Her2 蛋白定量测定试剂盒(ELISA)20160612

北京胜发兴生物技术有限公司天津胜发生物技术有限公司（研发部）乳癌检测新时代---------

肿瘤标志物HER2/neu-ECD蛋白的临床应用1一、乳腺癌与HER2ECD概述二、HER2ECD的临床应用三、血清HER2ECD检测与其他检测相辅相成四、试剂盒简况及对比实验（临床实验）五、常见问题2

一、乳腺癌与HER2ECD概述1.乳腺癌

1.1我国乳腺癌发病率

1.2乳腺癌的分子分型2.HER2/neu的结构与功能3.乳腺癌与HER23.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度3.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度

3

1.1我国乳腺癌发病率41.腔型A---luminalA(ER+and/orPR+,HER2-

）2.腔型B--luminalB(ER+and/orPR+,HER2+)3.HER2过表达型---(ER-,PR-,HER2+)恶性程度高4.正常乳腺样型---normalbreast-like5.基底细胞样型---basal-like(ER-,PR-,HER2-,CK5/6+)1.2乳腺癌的分子分型5

2.HER2/neu的结构与功能属表皮生长因子受体家族，包括信号肽，胞外区（ECD），跨膜区和胞浆区；胞浆区具受体酪氨酸激酶活性；

ECD为配体结合域，与受体结合后使Her2受体自身磷酸化并激活其酪氨酸激酶活性，最终促进细胞增殖；Her2基因过度表达可导致细胞过度增殖和表型恶性转化，因而与肿瘤形成密切相关；

在乳腺癌患者中，约有1/4-1/3病人的肿瘤组织为Her2表达阳性。Her2阳性的乳腺癌疾病进展速度快、恶性程度更高，对化疗耐药、化疗缓解期缩短，更容易复发和转移，预后也差。HER-2/neu在正常人体腔上皮、腺上皮和胚胎中均有表达，但无基因扩增。特异性较高。

乳腺癌肿瘤细胞HER2/neu

肿瘤蛋白（p185）增强肿瘤细胞侵袭力HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER2/neu

细胞膜外区域

20-30%初发性乳腺癌HER2/neu阳性3.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度转移性乳腺癌HER2/neu阳性高达90%来源：美国肿瘤协会；200783.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度HER2ECD阳性18.5%初发的乳腺癌43%转移性乳腺癌HER2ECD阳性WalterPCarney,etal.ClinicalChemistry.1579-1598(2003)43%9复发的乳腺癌患者中HER2ECD阳性率25％50％19％68％局部复发远处转移34％IHC阴性的初发乳腺癌复发或转移时HER2ECD转为阳性的比率来源：美国肿瘤协会；200710HER2/neu检测应用指南ArchivesofPathologyandLaboratoryMedicine:2007,Jan(131),18–43.

美国临床肿瘤学会：……对于所有的浸润性乳腺癌患者，HER2/neu都应该推荐作为常规检测……11...…12二、HER2-ECD的临床应用判定值：15ng/mL（15ug/L）

疾病范围：乳腺癌，胃癌，肠癌，膀胱癌，肺癌等

评估预后（肿瘤分型、预示生存期等）

预测疗效（指导用药，激素、化疗或Herceptin）

监测病程（药效评估、监测进展、提示复发、转移等）

筛查指标（结合其他标志物）13早期筛查：临床治疗方案的制定：Her2阳性乳腺癌患者对蒽环类抗生素和紫杉醇有良好的效果，尤其对于赫赛汀有非常好的治疗效果。治疗过程中病程监测：预后的观察：

提前2-9个月提示复发的风险产品应用：血清HER2-ECD临床应用组织活检诊断

手术/

新辅助治疗淋巴结阴性/阳性

辅助治疗30%

复发率

(转移性乳腺癌)基础水平

HER2-ECD检测结合组织活检新辅助治疗中检测血清HER2-ECD水平结合血清HER2-ECD

检测，影像学检查和靶向治疗辅助治疗中血清HER2-ECD

水平检测15HER2ECD监测:复发(初发性乳腺癌)28％30％47％76％HER2CEACA15-3HER2+CEA+CA15-3肿瘤标志物预测复发的敏感性比较敏感性200例初发乳腺癌患者，随访1－4年。发现89例复发转移性乳腺癌，在这89例复发患者中HER2ECD敏感性28％，提前4.5月（局部复发敏感性低于远处转移，剔除局部复发，则HER2ECD敏感性31％），CEA30％，提前4.8月，CA15347％，提前4.9月。三者联合检测则敏感性上升到76％16HER2ECD监测:复发(转移性乳腺癌)敏感性肿瘤标志物预测复发的敏感性比较HER2CA15-3CEAHER2+CEA+CA15-367％54％43％76％DnistrianAM,etal.JClinLigandAssay.215-220(2003)17三、血清HER2ECD检测与其他检测相辅相成1.检测方法影像学：

钼靶检测等

病理：免疫组化（IHC）HER2/neu蛋白原位杂交（FISH,DISH，CISH）HER2/neu基因血清：HER2ECD（HER2蛋白胞外区）2.血清HER2-ECD检测与病理学检测比较

优劣势&相关性181.HER2/neu检测方法

HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER-2/neu

细胞膜外区域1IHC3ELISA2FISHIHC/FISHimagescourtesyofRYOsamura,MD,TokaiUniversitySchoolofMedicine19中医：乳腺钼靶片。大多数医院大夫都选用：大夫手诊，乳腺彩超西医：乳腺针吸细胞病理学：穿刺成功率高达100%，早期诊断率16.9%，总诊断准确率高达98.6%。医院里常用的检测方法：2.血清HER2-ECD检测与其他检测比较21存在一些病例，IHC和FISH得出的均为不确定的结果，无法对Her2状态做出明确判断，我们的产品为定量检测，结果判定明确。经IHC或FISH判断为Her2阳性的患者未必能从靶向治疗中获益，导致这种现象的原因可能是检测体系本身所造成的假阳性，也可能是Her2的信号通路中还存在其他异常位点。肿瘤异质性的存在导致IHC和FISH均无法避免假阴性结果。部分患者无法提供检测所需的组织样本或者组织标本无法满足进行检测的基本要求。既往的临床研究表明，患者病情发展及治疗过程中会发生Her2状态变化，而IHC和FISH均无法对患者的Her2状态进行动态、实时的检测。酶免疫的方法相对于FISH和IHC的优势2.血清HER2-ECD检测与病理学检测比较之相关性血清HER2-ECD检测与病理学检测互为有益补充，从多维度多方向改善乳腺癌疾病管理。23

四、胜发兴生物Her2试剂盒临床研究

1.试剂盒检测原理24252.试剂盒性能指标线性范围：0.16-20ng/mL检测范围：0-400ng/mL准确度：85%-115%孔间差：±10%批间差：±10%样本数：48孔试剂盒-32-40份

96孔试剂盒-80-88份26

3.临床研究注：临床试验样品的选择27以对比试剂为标准，得出如下结果：阳性符合率＝413/（413+16）×100%＝96.27％阴性符合率＝618/（618+3）×100%＝99.52％总符合率＝（413+618）/1050×100%=98.19％Siemens和北京胜发兴比较（单位：ng/mL）胜发兴Her2试剂盒与西门子化学发光试剂盒相同样本结果比较Siemens和北京胜发兴比较（单位：ng/mL）Siemens和北京胜发兴比较（单位：ng/mL）28胜发兴Her2试剂盒与西门子化学发光试剂盒检测相同样本结果比较经计算，N=1045次，r=0.9727，P=0.000（P<0.001），根据统计学原理，两组数据高度相关29临床研究结论

结果显示同一份血清标本分别用北京胜发兴生物技术有限公司生产的人Her2/neu蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫吸附法）和已获得SFDA注册证的SiemensHealthcareDiagnosticsInc.生产的HER-2/neu蛋白测定试剂盒(化学发光法)在中国已批准上市的同类产品进行测定的两组数据的相关系数和相关回归方程均具有显著性。

综上所述，临床应用中两者之间具有等效性。与对照试剂相比，二者同样具有检测性能稳定，检测结果准确、可靠，操作简便，检测时间短等特点，有利于快速及时地报告检测结果。适合在国内检验科或临床科室的实验室推广使用。30五、常见问题病理检测为阳性，为何试剂盒检测为阴性？阴性结果意义何在？两种方法的检测对象分别为组织中的HER2/neu与从细胞表面脱落至血清中的HER2-ECD，病理检测的阳性率较高，特异性则相对较低。二者结果不会完全一致，只具有一定程度的相关性，在转移型乳癌中相关性良好。血清HER2-ECD结果阴性，可作为初始值保存，之后进行连续监测，作为个体化治疗的依据。病理检测为阴性，为何试剂盒检测为阳性？血清中的HER2-ECD可以早于病理检测几个月提示潜在转移、复发的风险。可否用试剂盒来早期筛查？可以结合其他检测手段进行早期筛查。与化学发光法相比有何优势？

经典方法，价格较低，且不需要昂贵配套仪器，各级医疗机构均可应用，便于推广。有哪些应用实例？海军总医院、上海第一人民医院、第二炮兵总医院、陕西省肿瘤医院、医学科学院肿瘤医院、解放军307医院、北京潞河医院、北京海斯特临床检验所等。31公司简介研发中心：天津胜发生物技术有限公司于2011年在天津开发区注册，入住天津国际生物医药联合研究院，共享研究院大平台研发设施，是高科技生物医药产品研发企业，2013年认定为国家高新技术企业。生产车间：2011年在北京平谷区注册成立北京胜发兴生物技术有限公司，新建10万级GMP生产车间500平米，厂房1000平米。产品：人表皮生长因子受体2（Her2/neu）检测试剂盒，国食药械（准）字2014第3400595号。

人前列腺癌诊断试剂盒、人附睾蛋白4（HE4）检测试剂盒（卵巢癌）、脂蛋白相关磷脂酶A2（动脉粥样硬化）、胃蛋白酶原（PGI、PGII）（胃癌）、CEA、AFP、CA125、CA1