GAL性能说明新讲解检验科用2012

露喜佳®Lucica®

GA-L

酶法糖化白蛋白（液状试剂）

澳斯邦生物工程有限公司2012。6。28１．露喜佳®GA-L的开发历史２．露喜佳®GA-L试剂性能介绍３．露喜佳®GA-L试剂的优点1976ＴＢＡmethod

FlukigerR.,et.al1981

Furosinemethod

SchleicherE.,et.al1982

Fructosamine

JohnsonRN.,et.al1982

Affinitymethod

DennisC.,et.al1985ＲＩＡmethod

TanedaS.,et.al

1988ＨＰＬＣmethod

ShimaK.,et.al1989

ELISAmethod

CohenMP.,et.alEIAmethod

MiyakeY.,et.al

Enzymaticmethod

高妻

Ｔ.,et.al(LucicaGA)2004Enzymaticmethod

高妻

Ｔ.,et.al(LucicaGA-L)露喜佳®GA-L的历史（论文报告）年代

糖化血红蛋白

１９８０年代

血红蛋白A1c

GA和A1C的进化

（商业上）１９８０年代

果糖胺

：葡萄糖＋球蛋白等

34%66%白蛋白白蛋白+HbA1a,HbA1bHbA1cHbA1cHbA1c不稳定型A1c１９８２年代

稳定型HbA1c

２００２年酶法糖化白蛋白１９８８年ＨＰＬＣ糖化白蛋白GA为血清蛋白(果糖胺)的进化型。其发展比血红蛋白(A1C)晚。GSP/ALB(%)

１．露喜佳®GA-L的开发历史２．露喜佳®GA-L试剂性能介绍３．露喜佳®GA-L试剂的优点

露喜佳®

Lucica®GA-L产品概述·用于自动生化分析·试剂全部为液体并分别包装·

有效期:12个月·对白蛋白和糖化白蛋白的双向测定·保存方法：2～10℃露喜佳®GA-L反应原理

（GA试剂）葡萄糖酮ＫＡＯＤ（酮胺氧化酶）内因性糖化氨基酸氨基酸＋１）糖化氨基酸的消失反应（GA

R-1）

H2O2H2O＋O2＋ＰＯＤＴＯＤＢ４-ＡＡ青紫色蛋白酶糖化血清白蛋白：葡萄糖葡萄糖酮氨基酸糖化氨基酸ＫＡＯＤ（酮胺氧化酶）２）糖化白蛋白的测定

（GAR-2）

专利露喜佳®GA-L反应原理（ALB试剂）ＡＬＢＡＬＢＡＬＢ还原性白蛋白氧化性白蛋白氧化性白蛋白+氧化１）白蛋白的前处理

（ALB

R-1）２）白蛋白的测定

（ALB

R-２）ＡＬＢ溴甲酚紫（ＢＣＰ）青紫色氧化性白蛋白专利露喜佳®GA-L操作法和反应曲线

０５分１０分

主波长５４６ｎｍ

副波长７００ｎｍ

试料；６μＬ酶液；６０μＬ

前处理液；２４０μＬ糖化白蛋白试剂操作法糖化白蛋白值(%)的计算用糖化白蛋白的浓度除以白蛋白的浓度，算出试料中的糖化白蛋白值(%)。

０５分１０分

主波长６００ｎｍ

副波长６６０ｎｍ

试料；３μＬ发色液；１１０μＬ

前处理液；２２０μＬ白蛋白试剂操作法（日立７１７０Ｓ为例）糖化白蛋白反应曲线025507510012515005101520253035测定点（日立７１７０ｓ）灵敏度（ｍＡｂｓ）健康者血清患者血清白蛋白反应曲线05010015020025030005101520253035测定点（日立７１７０ｓ）灵敏度（ｍＡｂｓ）低白蛋白血清健康者血清露喜佳®GA-L定量性(稀释直线性)・GA浓度至４.０９g/dＬ有直线性。・ALB浓度至８.００g/dＬ有直线性。糖化白蛋白浓度的测定范围Ｙ=71.9Ｘ+1.72R2=0.99901002003004005000123456糖化白蛋白浓度（ｇ／ｄｌ）灵敏度(mAbs)４.０９g/dＬ用高浓度试样，以蒸馏水稀释；研究稀释直线性，取得测定上限浓度。白蛋白浓度的测定范围Ｙ=57.3Ｘ-4.05R2=1.00001002003004005006000246810白蛋白浓度（ｇ／ｄｌ）灵敏度(mAbs)８.００ｇ/ｄＬ露喜佳®GA-L测定范围・将高GA值(68.1%)试样和低GA值(3.2%)试样进行混合，测定各个混合试样的GA值，确认其直线性，并研究GA值的测定范围。・显示良好的直线性，作为GA值在3.2～68.1％范围能作正确地测定。

y=0.649x+2.978ｒ=0.99901020304050607080020406080100高GA试样混合率(%)GA%露喜佳®GA-L同时重复性・用管理血清，健康者血清以及患者血清，同时测定２０次，研究重复性。・同时重复性不管血清的种类，CV均在1％以内，取得稳定的测定结果。露喜佳®GA-L日间重复性・用健康者血清和患者血清，32天内测定20次，研究日间重复性。・不依靠校准方法，也能取得稳定的测定结果。测定日初次每次初次每次初次每次初次每次初次每次初次每次第１天0.6090.6094.564.5016.116.20.8970.8954.104.0224.625.0第２天0.6030.6104.564.4615.916.40.8850.8974.084.0024.425.1第３天0.6050.6014.544.4616.016.20.8920.8864.164.0624.224.5第４天0.6080.6024.584.4616.016.20.8980.8894.124.0224.524.8第５天0.6090.6024.624.5215.916.00.8910.8904.104.0624.424.6第９天0.6130.6044.584.4816.116.20.8930.8874.144.0224.324.8第10天0.6110.6064.564.5016.116.20.8930.8974.164.0824.224.7第11天0.6050.6004.564.4816.016.10.8900.8914.124.0224.324.9第12天0.6090.6054.604.5415.916.00.8910.8904.144.0824.224.5第15天0.6120.6064.604.5016.016.20.8940.8904.164.0424.224.7第19天0.6100.6074.644.5215.916.10.8950.8934.164.0424.224.8第22天0.6120.6074.664.4815.816.20.8960.8914.204.0424.024.8第23天0.6020.6004.624.4615.716.10.8840.8884.124.0024.224.9第24天0.6050.6094.624.5015.816.20.8900.8964.164.0424.124.9第25天0.6130.6054.684.5215.816.10.8960.8894.164.0424.224.7第26天0.6150.6074.644.4816.016.20.8900.8964.124.0024.325.1第29天0.6090.6004.664.4815.816.10.8860.8834.204.0023.824.8第30天0.6120.6084.624.5615.916.00.8880.8884.124.0424.324.7第31天0.6000.6054.564.4615.916.30.8850.8904.084.0024.425.0第32天0.6060.6064.624.5215.816.10.8850.8864.064.0424.524.6AVG0.6080.6054.604.4915.916.20.8910.8914.14.024.324.8SD0.0040.0030.0400.0290.1090.0910.0040.0040.0380.0250.1820.166CV%0.660.530.880.650.680.560.490.440.920.630.750.67患者血清GA浓度(g/dl)ALB浓度(g/dl)GA%GA浓度(g/dl)ALB浓度(g/dl)GA%健康者血请・初次:只有初次测定时作校准・每次:每次测定时都作校准露喜佳®GA-L共存物质的影响-1-

胆红素F的影响02040608010012005101520胆红素F(mg/dl)影响率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ胆红素C的影响02040608010012005101520胆红素C(mg/dl)影响率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ乳糜的影响0204060801001200400800120016002000乳糜（度）影响率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ葡萄糖的影响0204060801001200.00.20.40.60.81.01.2葡萄糖(g/dl)影响率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ露喜佳®GA-L共存物质的影响-２-血红蛋白对LucicaGA-L的影响是跟LucicaGA同等水平。血红蛋白的影响0204060801001200100200300400500600溶血血红蛋白(mg/dl)影响率(%)ＧＡＧＡ-ＬLucicaＧＡ-Ｌ很大改善抗坏血酸的影响。抗坏血酸的影响0204060801001200.000.020.040.060.080.100.12抗坏血酸(g/dl)影响率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ露喜佳®GA-L抗凝血剂、解糖阻止剂的影响・研究采血时用的抗凝血剂、解糖阻止剂的影响。

・所有被研究的采血管标本，都适用LucicaGA-L。从健康者６名采血。

表示血清值为100时的相对值。100101.3102.7100.3101.1020406080100120血清EDTA柠檬酸肝素ＮａＦ+EDTA相对值（％）*露喜佳®GA-L保存稳定性・本试剂在２～１０℃下保存，12个月内稳定。（表１）・开封后的试剂，在自动分析仪里（５～１５℃）保存，稳定１个月。（表２）表-1

试剂冷藏（２～１０℃）的保存稳定性0102030405003691215保存月数ＧＡ值（％）Ｌｏｔ．ＡＬｏｔ．ＢＬｏｔ．ＣＬｏｔ．ＡＬｏｔ．ＢＬｏｔ．Ｃ管理血清L管理血清H表-2

开封后试剂的保存稳定性（５～１５℃）0510152025300123456保存期间(周)ＧＡ值（％）Lot.ＡLot.ＢLot.ＣＬｏｔ.ＡＬｏｔ.ＢＬｏｔ.Ｃ健康者血清患者血清结论

确认DCCT研究时使用的样品（存储19-23年）保存稳定性。存储23年的样品可使用于GA测定。

ClinicalChemistry57-2286-290(2011)＊1986-90年时保存标本和2009年保存标本的相关公式没有显示有意截距和斜率。露喜佳®GA-L基本性能一览表项目功能露喜佳Lucica

ＧＡ-Ｌ既成品测定功能重复性：同时；ＣＶ％0.63～0.931％以内

日间；ＣＶ％0.56～0.672％以内直线性：健康者群良好良好

患者群良好良好测定范围（ＧＡ％）３.２～６８.１％３.１～７０.７％共存物质的影响

胆红素Ｆ（ｍｇ／ｄｌ）≦１４.２≦１８.３

胆红素Ｃ（ｍｇ／ｄｌ）≦１５.６≦１９.0Ｈｂ（干扰检查；ｍｇ／ｄｌ）≦１９６≦１９６

乳糜（浊度）≦１９３０≦１９３０

抗坏血酸（ｍｇ／ｄｌ）≦１００≦１７

葡萄糖（ｍｇ／ｄｌ）≦１０００≦１０００

Fructosyl-N-α-Ｚ-Ｌ-ｌｙｓｉｎｅ≦１５ｍＭ≦0.007mＭ抗凝血剂、解糖阻止剂的影响ＥＤＴＡ２Ｎａ１００ｍｇ／ｄｌ・采血管・采血管

柠檬酸３Ｎａ１００ｍｇ／ｄｌ・添加试验・添加试验

胆素Ｌｉ１０ｍｇ／ｄｌ

均无影响

均无影响

ＮａＦ１０００ｍｇ／ｄｌ露喜佳®GA-L项目间演算式

对ＨＰＬＣLot倾斜度截矩G１/１.１６3.08H１/１.１３2.80I１/１.１４2.88平均１/１.１４2.92・由该法和ＨＰＬＣ法的相关式研究该试剂项目间演算式。・得到项目演算式ＧＡ值（％）＝１/１.１４×［ＧＡ浓度］/［ＡＬＢ浓度］×１００＋2.9

相関ＨＰＬＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.Ｇ）y=1/1.16x+3.08ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相関HPLＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.H）y=1/1.13x+2.80ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相関HPLＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.Ｉ）y=1/1.14x+2.88ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相关ＨＰＬＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.Ｇ）y=1/1.16x+3.08ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相关HPLＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.H）y=1/1.13x+2.80ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相关HPLＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.Ｉ）y=1/1.14x+2.88ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）・相关式【ＨＰＬＣＧＡ％＝１/１.１４×Lucica

ＧＡ-Ｌ＋２.９】・项目间演算式ＧＡ值（％）＝１/１.１４×［ＧＡ浓度］/［ＡＬＢ浓度］×１００＋２.９(n=61)(n=55)(n=55)露喜佳®GA-L使用时的注意事项１．Lucica

GA-LのGAR-2（酶液）试剂由于交叉污染的原因，对一部分试剂＊有可能产生影响。

希望能通过追加碱洗来避免污染。＊免疫法测定试剂（药物血中浓度测定用试剂等）以及胆汁酸测定试剂（循环酶法）２．要得到GA%值必须用以下的项目间演算式：ＧＡ％＝ＧＡ／ＡＬＢ×１００×1／1．14＋２．９

如果使用的是有序排列系统，则有必要更改该系统。３．由于血红蛋白的负面影响，明显的溶血试样应先稀释再测定。４．关于管理血清，请使用GA管理血清L、H。１．露喜佳®GA-L的开发历史２．露喜佳®GA-L试剂性能介绍３．露喜佳®GA-L试剂的优点露喜佳®GA-L酶的选择糖化白蛋白用酮胺氧化酶

检出方法；过氧化氢

基质；ε糖化氨基酸

特征；对糖化蛋白质没有影响。糖化白蛋白用蛋白酶

检出方法；酮胺氧化酶

基质；糖化白蛋白

特征；对白蛋白以外的蛋白质没有影响。按以下基准从数千种酶中进行选择。

露喜佳®GA-L酶的选择菌体破碎酶的精制菌体土壤等离心分离选择酶培养露喜佳®GA-L对以前产品的改进项目露喜佳Lucica

GA-L以前产品１）剂型液状品冻干品（可以直接使用）（需要溶解处理）２）稳定性１个月（开封后）２周（溶解后）（由于提高稳定性，可用于（少量标本单位不适用）标本较少的小规模单位）３）白蛋白试剂新ＢＣＰ试剂ＢＣＧ试剂（不受Alb浓度的影响）

（受Alb浓度的影响）４）校准１次/２周（１点）１次/１天（２点）（节约费用、操作简便）５）和HPLC法相关性优良可（不受低ＡＬＢ标本的影响）（受低ＡＬＢ标本的影响）６)输液的影响有消失系统无消失系统（异常高值）糖化氨基酸的消去反应

避免特殊输液（糖化氨基酸）的影响・与管理血清添加标准糖化氨基酸，研究糖化氨基酸的影响。・LucicaＧＡ－Ｌ大幅度减少糖化氨基酸的影响。添加糖化氨基酸的影响020040060080010000.05.010.015.020.0Z糖化赖氨酸添加浓度（ｍM）GA值(%)Lucica

GA-LLucica

GAZ糖化赖氨酸LucicaＧＡ-ＬLucicaＧＡ(FZL)添加浓度管理血清管理血清（ｍＭ）ＧＡ值（％）ＧＡ值（％）0.0015.216.60.2515.443.60.5015.469.90.7515.495.31.0015.5119.02.0015.6219.54.0015.9405.110.0016.1980.515.0016.01458.620.0069.71845.4100±５％以内Z糖化赖氨酸：Fructoｓｙｌ-Z-Lysine专利2.共存物质的影响(糖化氨基酸、葡萄糖)GSP/ALB(BCG)同露喜佳®GA-L相比，受糖化氨基酸的影响非常大,不能用于高卡路里氨基酸输液的患者。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）共存物质的影响

(脂质)ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）GSP/ALB(BCG)同露喜佳®GA-L相比，受血清脂質的影响非常大,针对乳糜样本或者脂肪乳剂注射(输液)患者不能反映正确的GA值。共存物质的影响（胆红素）GSP/ALB(BCG)同露喜佳®GA-L相比，受到胆红素

F、C的影响非常大。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）共存物质的影响（维生素

C）GSP/ALB(BCG)同露喜佳®GA-L相比，受到维生素

C

(ascorbic

acid)的影响非常大。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）糖化血清蛋白GSP(果糖胺)与露喜佳®GA-L的区别１）血清蛋白中有66%的

白蛋白。２）GSP是用来测定血清蛋白中糖化物的絶対量

的，而GA是用来測定

白蛋白的糖化率的。其它的血清蛋白質α

球蛋白（１１％）β

球蛋白（１０％）γ球蛋白（１３％）白蛋白（６６％）：葡萄糖ＧＡGSP１）不受白蛋白以外的蛋白影响。２）不受蛋白质浓度的影响。露喜佳®GA-L的特征１）不受白蛋白以外的蛋白影响

＊GA用来测定血清中的白蛋白。GSP是测定血液中的糖化蛋白质。白蛋白以外大量的血清蛋白是免疫球蛋白，GSP可能因为多種原因发生变动。

α球蛋白

(11%)β球蛋白

(10%)γ球蛋白

(13%)其它的血清蛋白质糖化氨基酸、肽测定结果酮胺氧化酶×白蛋白特异的蛋白酶白蛋白(66%)：葡萄糖GA的测定原理

２）不受蛋白质的浓度影响

＊GA的测定值是以白蛋白中的糖化白蛋白含有比率来表示的。而GSP的值是绝对量。蛋白质的浓度因人而异，疾患及治疗也会使之发生变动。而GA不受那些变动的影响。GA酶法的测定原理

GA测定ALB测定用改良BCP法测定白蛋白。计算GA的值GA(%)=GA浓度/ALB浓度

X100用酶测定糖化白蛋白。备注：实际测定时，用下述修正公式加以修正。

修正