龙血竭中龙血素A在大鼠体内的药动学研究

龙血竭中龙血素A在大鼠体内的药动学研究【本文关键词语】龙血竭;龙血素a;高效液相色谱法;大鼠;药动学【内容摘要】目的考察龙血竭中龙血素a在大鼠体内的药动学行为。方法按100g大鼠给予龙血竭250mg灌胃给药，测定不同时间点的血药浓度，并以3p97软件计算其药动学参数。结果龙血素a的ka为(146±0.19)h-1，t1/2(ka)为(0.48±0.06)h，t1/2(k)为(2.59±0.67)h，tmax为(2.00±0.55)h，cmax为(1.13±0.24)μg·ml-1，auc为(2.84±0.68)μg·h·ml-1。结论龙血素a在大鼠体内符合线性动力学一室开放模型，吸收较快。【本文关键词语】龙血竭;龙血素a;高效液相色谱法;大鼠;药动学abstract:objectivetostudyonpharmacokineticsofloureirinainsthebloodsampleswerecollectedataseriesoftimepointsafteranoraladministrationofdragon′sbloodtorats(2.5g·kg-1),andwereanalyzedbycokineticparameterswerevaluatedby3p97software.resultspharmacokineticparametersofloureirinawereasfollows:ka(1.46±0.19)h-1,t1/2(ka)(0.48±006)h,t1/2(k)(2.59±0.67)h,tmax(2.00±0.55)h,cmax(1.13±0.24)μg·ml-1,auc(2.84±0.68)μg·h·siontheresultsdemonstratedthatthepharmacokineticsofloureirinawasconsistentwithone-compartmentmodel,whichwasabsorbedanddistributedrapidlyinrats.keywords:dragon′sblood;loureirina;hplc;pharmacokinetics血竭(dragon′sblood)又名麒麟竭，是传统珍贵中药。国产血竭称龙血竭，具有祛瘀定痛、止血生肌的成效[1]，被誉为“活血圣药〞，临床应用广泛。龙血竭的重要成分为黄酮类化合物,其在治疗冠心病、脑梗死、心肌缺血、脑缺血损伤等方面有显著疗效[2-3]。龙血素a是龙血竭黄酮的重要成分之一，当前未见关于龙血素a体内药动学的文献报道。本文采取hplc法[4]测定龙血素a在大鼠体内的血药浓度，研究龙血素a在大鼠体内的药动学，为临床应用提供理论根据。1仪器与材料1.1动物sd大鼠66只，体质量(250±20)g，雌雄兼备，由中山大学医学院动物中心提供，合格证号：(粤)2006a064。1.2仪器waters高效液相色谱仪：515hplc泵，2487双波长吸收监测器，n-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);tdl80-2b台式离心机(上海安亭科学仪器厂);scq5201超声仪(上海超声波仪器厂);zh-2blender涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。1.3材料广西产龙血竭(广西学院制药厂提供);龙血素a对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：200402);乙腈、甲醇(色谱纯)，乙酸乙酯、无水乙醇、冰醋酸(分析纯)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：diamonsilc18(5μm，250mm×4.6mm);保卫柱：easyguardc18replacementcartridgescat#6101;流动相：乙腈-体积分数1%冰醋酸(体积比35∶65);检测波长：280nm;流速：1.2ml·min-1，柱温:25℃;进样量:20μl。2.2血样的收集和处理大鼠禁食(自在饮水)12h后，按100g大鼠给予龙血竭250mg，灌胃给药。分别在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10h于颈动脉取血,置于用肝素预处理过的离心管中。取全血1ml置离心管中，参加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml，涡旋混合均匀，3000r·min-1离心10min，取上清液，提取3次，合并上清液，50℃水浴挥干，于残渣中参加100μl甲醇，超声处理使之溶解，12000r·min-1离心10min，取上清液作为样品，注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱图与峰面积，采取外标法定量。2.3方法学考察[3]2.3.1龙血素a对照品储备液的制备取龙血素a对照品，用甲醇配制成每1ml约含100μg的溶液，作为对照品储备液。2.3.2方法专属性取大鼠2只，实验前禁食12h，自在饮水，1只做空白对照，1只按100g给予龙血竭250mg灌胃给药，给药2h后取血样，按“2.2〞项下方法操作测定。由图1可见，全血中的内源性物质不干扰龙血素a的测定，表示清楚本方法有较好的专属性。[psd261;s*2〗a.空白血浆;b.空白血浆+对照品;c.样品图1hplc图谱figure1hplcchromatograms2.3.3标准曲线与最低检测限取空白全血适量，精致细密参加龙血素a对照品贮备液，配制质量浓度为0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836μg·ml-1的系列浓度标准溶液，按“2.2〞项下的方法，自“加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml〞起，依法操作，记录峰面积。以质量浓度(ρ)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标进行回归，结果表示清楚龙血素a的质量浓度在0.076～4.836μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为：a=49679ρ+2784.3，r=0.9983(n=7)。取标准曲线用溶液，逐步稀释至溶液中龙血素a的响应值约为基线噪音的3倍(s/n=3)，记录色谱图，得出最低检测限(lod)为0.025μg·ml-1。2.3.4相对回收率与精致细密度精致细密量取对照品贮备液，以空白全血分别配成高、中、低3种质量浓度(4.836、1.209、0.076μg·ml-1)的样品溶液，按“2.2〞项下的方法，自“加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml〞起，依法操作。记录峰面积并代入标准曲线计算各样品浓度，计算相对回收率。结果表示清楚，高、中、低3个质量浓度的样品的相对回收率均高于80%。见表1。取以上高、中、低3个质量浓度的样品溶液于同一天内连续测定3次，计算日内rsd;天天测定3种浓度样品各1次，连续测定3d，计算日间精致细密度rsd。结果日内和日间精致细密度rsd值均小于10%，表示清楚该法精致细密度较好。见表1。2.3.5样品稳定性精致细密量取对照品贮备液，以空白全血配制质量浓度为0.076、0.605、1.209、2.418μg·ml-1的样品，分别考察室温25℃放置0、4、12、24h，-20℃冰箱放置24h，-20℃下反复冻融3次的稳定性。结果各样品的rsd值均在2.76%～11.42%(n=6)之间，符合〔中国药典〕相关规定，表示清楚样品稳定性较好。表1龙血素的回收率与精致细密度2.4大鼠体内的药动学取sd大鼠66只，禁食不禁水12h后，按时间点随机分为11组，每个时间点6只，按100g体质量给予龙血竭250mg灌胃给药，收集不同时间点的血样，按“2.2〞项下方法处理样品并测定龙血素a的浓度。2.4.1血药浓度曲线按不同时间点求算平均血药质量浓度，并绘制血药质量浓度—时间曲线，见图2。由图可见，血药质量浓度达峰时间为(2.0±055)h，峰质量浓度为(1.13±0.24)μg·ml-1。[psd262;s*2〗图2大鼠口服龙血竭(2.5g·kg-1)后龙血素a平均血药质量浓度—时间曲线figure2meanconcentration-timecurveofloureirinainrats(n=6)2.4.2药动学参数用药动学数据处理软件3p97对所测得数据进行拟合，所得药动学参数见表2。由表2可见，龙血素a在大鼠体内符合一室模型。3讨论3.1本文选取龙血竭重要成分之一的龙血素a作为指标成分，对龙血素a在大鼠体内的药动学情况进行了研究，为临床用药提供了根据。3.2对sd大鼠一次性灌胃龙血竭(250mg/100g)后，取全血进行处理后测定血药浓度，根据aic(akaike′sinformationcriterion)值最小原则，确定其符合一室吸收动力学模型，吸收半衰期为0.48h;消除半衰期为2.59h。从本文得到的药动学参数，并结合文献[6]数据推断，龙血竭口服后吸收较快，且迅速向体内各组织分布。表2大鼠口服龙血竭(2.5g·kg-1)后药动学参数【以下为参考文献】[1]国家药典委员会.中国药典：2010年版一部[m].北京：科技出版社，2010：96.[2]刘忠和.复方血竭胶囊对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的拮抗作用[j].武汉大学学报:医学版,2005,26(6):174-177.[3]方伟蓉,李运曼,邓嘉元.龙血竭总黄酮对动物心