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第三节高速逆流色谱分离技术

化学系1303班郭丽丽201306311025目录概述1工作原理2溶剂系统的选择3应用4一、概述高速逆流色谱（High-SpeedCountercurrent

Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸收和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。二、HSCCC色谱的工作原理及其特点1、工作原理

HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记录仪以及馏分收集器等部分。选择溶剂体系平衡选择固定相充满螺旋管柱高速旋转螺旋管泵入流动相流动相流出，注入带分离的样品收集馏分2、HSCCC色谱的特点①应用范围广，适应性好②操作简便，容易掌握③重现性好，回收率高④分离效率高，分离量较大⑥产品纯度高三、溶剂系统的选择1、溶剂系统的种类：

①弱极性溶剂体系

②中等极性溶剂体系

③强极性溶剂体系2、溶剂体系选择的步骤（1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系；（2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用TLC进行检测，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为0.5~2为止；（3）用HPLC测定K值；（4)用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆流色谱进行分离。3、选择溶剂时应注意（1）溶剂不造成样品的分解或变性；（2）样品在溶剂中有足够高的溶解度；（3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数值（固定相为管柱总体积的50%以上，分配系数为0.5~2）；（4）固定相能实现足够高的保留。四、应用高速逆流色谱在分离纯化木蝴蝶中的黄酮苷类化合物的应用1、分配系数的测定利用HPLC测定样品在不同溶剂体系的分配系数。

2、溶剂系统的确定根据文献及被分离物的性质选择溶剂体系。包括：①氯仿-甲醇-水；②乙酸乙酯-正丁醇-水；③正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水。此处选用氯仿-甲醇-水

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