微生物检查技术

微生物检查技术【根据药品种类·给药途径分】：无菌检查法：细菌·霉菌及酵母菌计数检查法：药品中控制菌的检查

2014年7月7

赵忠麒2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室2控制菌的检查大肠杆菌的检查：原理仪器用具试药与试液

检验程序：

供试液的制备

增菌培养MUG试液原理

分离培养

生化试验沙门菌的检查铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌一、大肠杆菌的生物学特性

1、简介

大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。因此，大肠杆菌被列为粪便污染指示菌，是非规定灭菌口服药品的常规必检项目。2、形态与染色

大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室51供试品的制备【大肠杆菌】若为固体样品，

称取10g,用100ml无菌生理盐水溶解，充分混合溶解即为供试液，

若为液体样品，

量取10ml，加90ml无菌生理盐水溶解，充分混合溶解即为供试液。2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室62增菌培养取供试液10ml接种于乳糖胆盐培养基中，置37℃培养18～24h，同时做好阴性和阳性对照，阴性对照管加入与供试液等量的稀释液，阳性对照管加入供试液以及50～100个阳性对照管，培养乳糖胆盐增菌液若供试增菌液澄清透明，证明无菌生长。若供试液增菌液混浊，证明有菌生长。37℃培养18～24h（必要时可延至48h）。阴性对照应无菌生长。摇匀上述BL增菌培养液2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室73MUG试验原理摇均上述乳糖胆盐增菌培养液，用灭菌吸管各吸取0.2ml,分别接种至5mlMUG培养基管内培养，分别在5h和4h，阳性对照管应呈现萤光，MUG阳性

阴性对照管应呈现无萤光，MUG阴性MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色）,MUG阴性（无荧光）、靛基质阴性（无色）2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室84生化试验：乳糖发酵试液

甲基红试验

乙酰甲基甲醇生成试液

2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室94.1乳糖发酵试验操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于乳糖发酵管，培养24～48h，观察产酸（指示剂为酸性品红者为红色；指示剂为溴麝香草酚蓝者为黄色），产气（小倒管内有气泡，气泡无论大小）假阴性的处理：为避免迟缓发酵乳糖产生假阴性，亦可接种5％乳糖发酵管。绝大多数迟缓发酵乳糖的细菌，可于24h出现阳性。或适当延长培养时间2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室104.2甲基红试验（Ｍ）操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2h，于培养液中加入甲基红指示液2～3滴（约每ml培养液加指示液1滴），轻微摇动，立即观察结果观察：呈鲜红色或桔红色为阳性，呈黄色为阴性。2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室114.3乙酰甲基甲醇生成试验（V-P）操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2h，于2ml培养液中加入α-萘酚乙醇试液1ml，混匀，再加40％氢氧化钾试液0.4ml，充分振摇，在4h（通常在30min）内观察结果结果观察：出现红色应判为阳性，无红色反应为阴性二、沙门氏菌的生物学特性

1、形态与染色特性：革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,一般无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数具有菌毛。2、培养特性：需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。122005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室13三、铜绿假单胞菌检查法铜绿假单胞菌，习称绿脓杆菌，为假单胞菌属菌种广泛分布在土壤，水及空气，人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在，故可通过环境和生产的各个环节污染药品。本菌是常见的化脓性感染菌、在烧伤、烫伤，眼科及其他外科疾患中常引起继发感染，由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性，增加了治疗的难度、国内外药典均将铜绿假单胞菌检查列为检查项目之一2005年4月16日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室14四、金黄色葡萄球菌检查法金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)为葡萄球菌属中的一种广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和