药物分析(第六章)

第六章芳酸类药物的分析学习目标掌握水杨酸、苯甲酸类药物化学结构与分析方法间的关系；鉴别与含量测定的方法；特殊杂质的检验方法与杂质限量计算；两步滴定法和双相测定法的原理。熟悉紫外分光光度法、高效液相色谱法在芳酸类药物中的应用。了解其他芳酸类药物的分析。第六章芳酸类药物的分析本章目录

概述第一节水杨酸类药物分析第二节苯甲酸类药物分析第六章芳酸类药物的分析羧基直接与芳香环相连的化合物称芳酸。芳酸及其酯类药物的结构特点是：结构中有羧基、酯键和苯环；有些药物有酚羟基、芳伯氨基

概述第六章芳酸类药物的分析第一节水杨酸类药物分析水杨酸类药物结构理化性质鉴别检查含量测定

第六章芳酸类药物分析药物结构理化性质与分析方法①在乙醇中易溶，在水中溶解度小，多以醇为溶剂分析；②具羧基，呈酸性；③含酯键，不稳定，易水解；④水解后生成游离的酚羟基，可与铁离子发生呈色反应⑤有苯环，在紫外光区有吸收

②③④⑤阿司匹林结构与理化性质的关系

第六章芳酸类药物分析酸性：用于定性、定量反应酚羟基：FeCl3呈色反应苯环：紫外吸收水杨酸

第六章芳酸类药物分析芳酸碱金属盐：水溶性大，显弱碱性酚羟基，有何性质？芳伯氨基：重氮化－偶合反应苯环有何性质?对氨基水杨酸钠

第六章芳酸类药物分析酯键：水解，可生成酚羟基和醋酸酯键：水解，可生成酚羟基和羧基酰胺键：水解，可生成芳伯氨基苯环苯环贝诺酯返回

第六章芳酸类药物分析一、鉴别试验1.三氯化铁反应含酚羟基结构的药物在中性或弱酸性条件下，可与Fe3＋反应，形成有色配位化合物。（1）水杨酸：加三氯化铁试液1滴，即呈紫色。（2）阿司匹林：加入氢氧化钠试液，煮沸水解后，放冷，加FeCl3试液1滴，呈紫堇色。（3）贝诺酯：加入氢氧化钠试液，煮沸，放冷，滤液调成微酸性，加三氯化铁试液2滴，呈紫堇色。

第六章芳酸类药物分析反应式如下：贝诺酯和阿司匹林需水解，生成水杨酸，才能发生该反应

（紫堇色）

第六章芳酸类药物分析2.重氮化－偶合反应

贝诺酯由阿司匹林和对乙酰氨基酚酯化而成。在酸性条件下加热水解，生成对氨基酚，呈芳香第一胺反应。

供试品稀盐酸，煮沸，放冷，滤过滤液猩红色亚硝酸钠、碱性β-萘酚

第六章芳酸类药物分析

第六章芳酸类药物分析3.紫外吸收光谱法贝诺酯溶液，在240nm的波长处有最大吸收，按干燥品计算，吸收系数（）为730～760。4.红外吸收光谱法水杨酸、阿司匹林、贝诺酯、对氨基水杨酸钠均采用红外吸收光谱法，供试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。对氨基水杨酸钠水溶液还可呈钠盐鉴别反应。IR：阿司匹林-COOH-COOHPh-C邻位取代PhN-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚

第六章芳酸类药物分析二、杂质检查（一）阿司匹林的杂质检查阿司匹林原料主要控制的特殊杂质有“溶液的澄清度”“水杨酸”“易炭化物”

第六章芳酸类药物分析1.溶液的澄清度

本项目主要检查碳酸钠试液中不溶性杂质。这些杂质是未反应的酚类、或副反应产生的无游离羧基的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。阿司匹林有羧基，溶解于碳酸钠试液。醋酸苯酯

水杨酸苯酯

乙酰水杨酸苯酯

第六章芳酸类药物分析2.游离水杨酸水杨酸可由合成过程中乙酰化不完全或阿司匹林在贮藏过程中水解产生。水杨酸对人体有毒，并有刺激性，其进一步氧化产物使药物变色，影响药物的质量。故应严格控制阿司匹林中的水杨酸。中国药典（2010）采用高效液相法测定。

第六章芳酸类药物分析【实例分析】阿司匹林中游离水杨酸检查游离水杨酸照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相；检测波长为303nm。理论板数按水杨酸峰计算不低于5000，阿司匹林主峰与水杨酸主峰分离度应符合要求。供试品溶液的制备取本品约100mg，精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（临用前新配）。对照品溶液的制备取水杨酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。测定法立即精密量取供试品溶液、对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显水杨酸色谱峰，按外标法以峰面积计算供试品中水杨酸含量，含水杨酸不得过0.1%。

第六章芳酸类药物分析原则上，制剂不必重复检查原料药项下检查的杂质，但在制剂制备或制剂贮存过程中，有可能再引入的杂质，应检查控制。阿司匹林片在制备或贮存过程中，因酯键易水解，而生成水杨酸，故阿司匹林片剂、栓剂均要检查水杨酸。

第六章芳酸类药物分析3.易炭化物本项目检查被硫酸碳化而呈色的低分子有机杂质

第六章芳酸类药物分析(4)有关物质照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为276nm。阿司匹林峰的保留时间约为8分钟，理论板数按阿司匹林峰计算不低于5000，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0.0100060.02080

第六章芳酸类药物分析测定法取本品约0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液；精密量取对照溶液10ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得灵敏度试验溶液。分别精密量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，除小于灵敏度试验溶液中阿司匹林主峰面积的单个杂质峰、溶剂峰及水杨酸峰不计外，其余各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积（0.5%）。

第六章芳酸类药物分析（二）对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查间氨基酚易被氧化，氧化产物导致药物变色，并且对人体有毒性作用，应严格控制其限量间氨基酚引入的途径有二：一是未反应完全的原料；二是对氨基水杨酸钠遇热或日光照射脱羧

第六章芳酸类药物分析

【检查】有关物质避光操作。取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.7mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液A。另取间氨基酚对照品适量，精密称定，加流动相稀释制成每1ml中含1.2μg的溶液，作为对照品溶液B。照含量测定项下的色谱条件，检测波长为280nm测定，理论板数按对氨基水杨酸钠峰计算应不低于3000，对氨基水杨酸钠峰与杂质峰之间的分离度应符合要求。取对照溶液A20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基水杨酸钠色谱峰的峰高为满量程的20％～25％。另精密量取供试品溶液、对照溶液A与对照品溶液B各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色谱图中如有与间氨基酚峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得过0.25%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液A主峰面积的1/10（0.1%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液A主峰面积（1.0%）。第四节含量测定一、酸碱滴定法(Acid-basetitrationmethod)苯甲酸pKa4.20水杨酸pKa2.98酸性较强羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性直接滴定Aspirin、丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均可采用本法1.直接滴定法乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差

pKa3~6

的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定

pKa6~9

的药物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法2.水解后剩余滴定法(Residualtitrationafterhydrolysis)取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4USP32-NF27滴定度滴定度浓度待测物反应系数滴定液物反应系数滴定液物摩而质量空白反应体积样品测定消耗体积样品称重量3.两步滴定法(Two-steptitration)Aspirin片枸橼酸Citricacid酒石酸Trataricacid水解产物水杨酸SAHAc第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc

第二步：水解后剩余滴定取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4空白消耗样测消耗校正因数滴定度片剂规格二、非水溶液滴定法吡罗昔康四、UV1.直接UV法2.离子交换-UV法氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UV法测定。3.CPC-UV法(ColumnPartitionChromatography)利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离200~300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm担体：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和)b.ASA测定供试液制备洗脱5,25mlCHCl3相继洗脱，弃去CHCl3洗脱10ml冰HAc-CHCl3(1→50)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀释至100ml测定：280nm空白：CHCl3①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质②冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被CHCl3洗脱供试品吸光度对照品吸光度对照品浓度例子五、HPLC对照品浓度供试品浓度对照品浓度

第六章芳酸类药物分析【实例分析】阿司匹林原料的含量测定取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。阿司匹林的百分含量％＝式中V:氢氧化钠滴定液消耗的体积，ml；T：滴定度（18.02mg）；F:滴定液浓度校正系数；W：供试品取样量。

第六章芳酸类药物分析注意事项：（1）中性乙醇：阿司匹林在乙醇中溶解度大，不易水解；乙醇中有微量乙酸等物质，故应制成中性（对酚酞指示液显中性）；（2）为防止阿司匹林在滴定过程中水解，一要快速滴定，二要剧烈振摇，防止局部碱过浓；（4）滴定终点后，因乙酰水杨酸钠逐渐水解，会使粉红色褪去，所以要注意判断终点第六章芳酸及其酯类药物的分析第二节苯甲酸类药物的分析

苯甲酸及其钠盐结构理化性质鉴别检查含量测定第六章芳酸药物的分析药物结构理化性质与分析方法

2.羧基4.苯环3.芳酸1.在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在水中微溶，在沸水中溶解；其钠盐在水中易溶，乙醇中略溶2.酸性，用于定量3.三氯化铁呈色反应4.共轭双键，紫外吸收

1.溶解性一、苯甲酸及其钠盐的结构、主要理化性质与分析方法返回

第六章芳酸药物的分析二、苯甲酸及其钠盐分析（一）鉴别试验1.三氯化铁反应在碱性溶液和苯甲酸钠在中性溶液，苯甲酸与三氯化铁试液生成沉淀。第六章芳酸药物的分析2.分解产物的反应苯甲酸钠升华试验：苯甲酸钠固体，加硫酸，加热，可见白色苯甲酸凝结在试管内壁。此反应收载于中国药典（2005年版）附录“一般鉴别试验”中。3.红外光谱法供试品红外光吸收图谱与对照的图谱比较应一致。第六章芳酸药物的分析(二)含量测定1.苯甲酸直接酸碱滴定法

基本原理：苯甲酸酸性较强，水中溶解度小，而其钠盐在水中溶解度大，故以中性稀乙醇为溶剂,可用氢氧化钠滴定液直接滴定。终点产物为苯甲酸钠，偏碱性，以酚酞为指示剂。第六章芳酸药物的分析【实例分析】苯甲酸的含量测定取苯甲酸约0.25g,精密称定，得0.2478g。加中性稀乙醇（对酚酞指示液显中性）25ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1033mol/L)滴定，消耗滴定液19.72ml，每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于12.21mg的C7H6O2。第六章芳酸药物的分析分析：

苯甲酸的百分含量％＝F＝

苯甲酸的百分含量％＝