标准解读

《GB/T 27540-2011 猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，旨在提供一种基于实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术的猪瘟病毒检测方法。该标准适用于疑似感染猪瘟病毒样本中猪瘟病毒核酸的定性和定量分析。

根据此标准，整个检测过程包括但不限于样品采集、保存与运输、RNA提取、反转录以及荧光定量PCR扩增等步骤。在具体操作上，首先需要从待测动物体内采集合适的生物材料作为检测样本；随后按照指定条件对这些样本进行处理以提取其中可能存在的猪瘟病毒RNA；接着利用特定引物和探针对提取到的目标RNA序列进行反转录并进行后续的PCR扩增反应，在此过程中通过监测荧光信号强度变化来判断是否存在目标病原体及其含量水平。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-11-21 颁布
  • 2012-03-01 实施
©正版授权
GB/T 27540-2011猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27540—2011

猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionof

classicalswinefevervirus

2011-11-21发布2012-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27540—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中国兽医药品监察所

:。

本标准主要起草人王琴王泰健徐璐范学政刘俊蒋春燕赵启祖宁宜宝邹兴启

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27540—2011

猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪瘟病毒实时荧光检测方法

(Classicalswinefevervirus,CSFV)RT-PCR。

本标准适用于猪瘟的诊断和监测适用于猪活体及其脏器血液排泄物和细胞培养物中核

,、、CSFV

酸的检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

中华人民共和国农业部公告第号兽医实验室生物安全技术管理规范

302

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

猪瘟病毒

CSFV:(Classicalswinefevervirus)

值达到阈值的循环数

Ct:(cyclethreshold)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

酶热启动聚合酶

HSTaq:TaqDNA(HSTaqDNApolymerase)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

荧光荧光逆转录聚合酶链式反应

RT-PCR:(realtimefluorescentquantitativereverse

transcriptionpolymerasechainreaction)

4试剂和材料

除另有说明所用试剂均为分析纯所有试剂均用无酶的容器分装

,;RNA。

41抽提试剂外观为粉红色分装至棕色瓶中于保存

.Trizol:RNA,,,4℃~8℃。

42氯仿预冷

.:4℃。

43异丙醇预冷

.:4℃。

44乙醇用新开启的无水乙醇和水配制预冷

.75%:DEPC,-20℃。

45水去离子水中加入作用高压灭菌

.DEPC:0.1%DEPC,37℃1h,(121±2)℃,15min。

46酶抑制剂

.RNA(30U/μL)。

47

.10×PCRbuffer(10mmol/LpH8.3Tris-HCl,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2)。

48

.dNTP(2.5mmol/L)。

49用于反应的引物浓度为探针浓度为其序列如下

.RT-PCR

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