标准解读

《GB/T 27528-2011 口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，专门针对口蹄疫病毒的快速、敏感且特异性的核酸检测方法进行了规定。该标准详细描述了利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）结合荧光探针技术对口蹄疫病毒进行定性检测的过程。其主要适用于动物源性样本中口蹄疫病毒核酸的存在与否的判定。

标准内容涵盖了实验所需材料与试剂、仪器设备的具体要求，以及样品采集和处理的方法。对于每一步操作都有明确指导，包括RNA提取步骤、逆转录过程、PCR扩增条件设置等，并指出了使用特定引物序列的重要性以确保检测准确性。此外，还提供了阳性对照品的选择建议及其制备方式，这对于保证实验结果的有效性和可靠性至关重要。

在结果分析部分，《GB/T 27528-2011》明确了如何根据Ct值判断样品是否含有目标病毒DNA片段。同时强调了实验过程中应严格遵守生物安全规范，采取适当防护措施避免交叉污染或实验室感染风险。

此标准为兽医诊断领域提供了一个标准化的操作流程，有助于提高口蹄疫监测工作的效率与质量，促进疾病防控策略的有效实施。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-11-21 颁布
  • 2012-03-01 实施
©正版授权
GB/T 27528-2011口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27528—2011

口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Real-timeRT-PCRfordetectionoffootandmouthdiseasevirus

2011-11-21发布2012-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27528—2011

前言

本标准的附录附录为规范性附录

A、B。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国深圳出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院北京盈九思

:、、

科技发展有限公司

。

本标准主要起草人秦智锋林祥梅吴绍强花群义卢体康刘建陈书琨吕建强曾少灵

:、、、、、、、、、

詹爱军韩雪清孙洁曹琛福贾广乐高小博陈兵阮周曦梅琳张彩虹陶虹

、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27528—2011

口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了口蹄疫病毒实时荧光检测方法

RT-PCR。

本标准适用于口蹄疫病毒的检测与鉴定

。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件其随后所有

。,

的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究

(),,

是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准

。,。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

出入境动物检疫采样

GB/T18088

口蹄疫诊断技术

GB/T18935

实验室生物安全通用要求

GB19489

基因检验实验室技术要求

SN/T1193

3缩略语

下列缩略语适用于本标准

。

值循环阈值

Ct:(cyclethreshold)。

4试剂耗材和仪器设备

41试剂耗材

.

411除非另有说明在检测中使用的试剂均为分析纯实验室用水应符合的要求

..,,GB/T6682。

412口蹄疫病毒实时荧光试剂保存见附录

..RT-PCR:-20℃,A。

413引物和探针序列

..

上游引物序列为

(FMDV-F):5′ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA3′。

下游引物序列为

(FMDV-R):5′GCGAGTCCTGCCACGGA3′。

探针序列为其端和端分别标记

TaqMan(FMDV-Pb):5′TCCTTTGCACGCCGTGGGAC3′,5′3′

和

FAMBHQ。

414处理水见附录推荐购买商品化处理的无酶和酶的水

..DEPC:B。DEPCDNARNA。

415氯仿分析纯常温保存

..:,。

416异丙醇分析纯使用前预冷至

..:,-20℃。

417乙醇用水和无水乙醇配制使用前预冷至

..75%:DEPC,-20℃。

418石英砂市售化学纯高压灭菌后备用

..:,121℃,15min。

419见附录

..0.01mol/LPBS,pH7.6~7.8:B。

4110阳性对照为灭活疫苗毒或组织培养灭活毒保存备用阴性对照样品可采用健康的猪

..,-20℃。

或牛的组织材料

。

42主要仪器设备

.

421荧光检测仪

..PCR。

422

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