真核蛋白质的生物合成(翻译)

真核生物蛋白质生物合成过程TheProcessofProteinBiosynthesis2021/4/2612021/4/262氨基酸的活化与搬运肽链合成起始阶段(initiation)延长阶段(elongation)终止阶段(termination)2021/4/263一、肽链合成起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物(translationalinitiationcomplex)。有多种蛋白质因子参与这一过程，称为起始因子（initiationfactor，IF）2021/4/264起始因子生物功能原核生物IF-1占据A位防止结合其他tRNAIF-2促进起始tRNA与小亚基结合IF-3促进大、小亚基分离，提高P位对结合起始tRNA的敏感性真核生物eIF-2促进起始tRNA与小亚基结合eIF-2B，eIF-3最先结合小亚基促进大、小亚基分离IF-4AeIF-4F复合物成分，有解螺旋酶活性，促进mRNA结合小亚基IF-4B结合mRNA，促进mRNA扫描定位起始tRNAIF-4EeIF-4F复合物成分，结合mRNA5`-帽子IF-4GeIF-4F复合物成分，结合eIF-4E和PABeIF-5促进各种起始因子从小亚基解离，进而结合大亚基eIF-6促进核蛋白体分离成大、小亚基原核、真核生物各种起始因子的生物功能2021/4/265（一）真核生物翻译起始复合物形成核蛋白体大小亚基分离；Met-tRNAiMet结合；mRNA在核蛋白体小亚基就位；核蛋白体大亚基结合。2021/4/266Met40S60SMetMet40S60SmRNAeIF-2B、eIF-3、eIF-6①elF-3②GDP+Pi各种elF释放elF-5④ATPADP+PielF4E,elF4G,elF4A,elF4B,PAB③MetMet-tRNAiMet-elF-2

-GTP真核生物翻译起始复合物形成过程2021/4/267真核生物翻译起始特点核蛋白体为80S（40S＋60S）起始tRNA携带的甲硫氨酸不需要甲酰化mRNA5`端帽子结构与其在核蛋白体上就位有关，需要帽子结合蛋白复合物(eIF-4F)参与eIF2与Met-tRNAiMet和GTP结合构成复合体后先与40S小亚基结合，然后才与mRNA结合2021/4/268二、肽链的延长指根据mRNA密码序列的指导，依次添加氨基酸从N端向C端延伸肽链，直到合成终止的过程。2021/4/269肽链延长在核蛋白体上连续性循环式进行，又称为核蛋白体循环(ribosomalcycle)，每次循环增加一个氨基酸，包括以下三步：进位（entrance）或注册（registration）成肽（peptidebondformation）转位（translocation）需要延长因子（elongationfactor，EF）和GTP的参与2021/4/26109、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20235:00:54PM11、人总是珍惜为得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、业余生活要有意义，不要越轨。2023/2/32023/2/303February202317、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3肽链合成的延长因子原核生物功能真核生物EF-TuEF-Ts促进氨基酰-tRNA进入A位，结合分解GTP调节亚基EF-1EF-1EF-G有转位酶活性，协助mRNA-肽酰-tRNA由A位前移至P位，促进卸载tRNA释放EF-22021/4/26122021/4/2613真核生物肽链合成的延长过程与原核基本相似，但有不同的反应体系和延长因子。另外，真核细胞核蛋白体没有E位，转位时卸载的tRNA直接从P位脱落。真核生物延长过程2021/4/2614三、肽链合成的终止当mRNA上终止密码出现后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体等分离，这些过程称为肽链合成终止。

2021/4/2615终止相关的蛋白因子称为释放因子(releasefactor,RF)一、识别终止密码二、诱导转肽酶改变为酯酶活性，相当于催化肽酰基转移到水分子-OH上，使肽链从核蛋白体上释放。

释放因子的功能真核生物释放因子：eRF,识别3种密码子2021/4/2616第二节蛋白质合成后加工和输送

Post-translationalProcessing&ProteinTransportation2021/4/2617从核蛋白体释放出的新生多肽链不具备蛋白质生物活性，必需经过不同的翻译后复杂加工过程才转变为具有天然构象的功能蛋白。主要包括多肽链折叠为天然的三维结构肽链一级结构的修饰高级结构修饰

在胞液核蛋白体合成的各种蛋白质，还需要靶向输送到特定细胞部位发挥生物作用。2021/4/2618一、多肽链折叠为天然功能构象的蛋白质新生肽链的折叠在肽链合成中、合成后完成，新生肽链N端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠即开始。可能随着序列的不断延伸肽链逐步折叠，产生正确的二级结构、模序、结构域到形成完整空间构象。一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动完成，而需要其他酶、蛋白辅助。2021/4/2619几种有促进蛋白折叠功能的大分子1.分子伴侣(molecularchaperon)2.蛋白二硫键异构酶(proteindisulfideisomerase,PDI)3.肽-脯氨酰顺反异构酶(peptideprolylcis-transisomerase,PPI)2021/4/26201.

热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)

HSP70、HSP40和GreE族2.

伴侣素(chaperonins)

GroEL和GroES家族分子伴侣分子伴侣是细胞一类保守蛋白质，可识别肽链的非天然构象，促进各功能域和整体蛋白质的正确折叠。2021/4/2621热休克蛋白促进蛋白质折叠的基本作用——结合保护待折叠多肽片段，再释放该片段进行折叠。形成HSP70和多肽片段依次结合、解离的循环。HSP40结合待折叠多肽片段HSP70-ATP复合物

HSP40-HSP70-ADP-多肽复合物ATP水解GrpEATPADP复合物解离，释出多肽链片段进行正确折叠2021/4/2622伴侣素GroEL/GroES系统促进蛋白质折叠过程伴侣素的主要作用——为非自发性折叠蛋白质提供能折叠形成天然空间构象的微环境。2021/4/2623蛋白二硫键异构酶多肽链内或肽链之间二硫键的正确形成对稳定分泌蛋白、膜蛋白等的天然构象十分重要，这一过程主要在细胞内质网进行。二硫键异构酶在内质网腔活性很高，可在较大区段肽链中催化错配二硫键断裂并形成正确二硫键连接，最终使蛋白质形成热力学最稳定的天然构象。2021/4/2624肽-脯氨酰顺反异构酶多肽链中肽酰-脯氨酸间形成的肽键有顺反两种异构体，空间构象明显差别。肽酰-脯氨酰顺反异构酶可促进上述顺反两种异构体之间的转换。肽酰-脯氨酰顺反异构酶是蛋白质三维构象形成的限速酶，在肽链合成需形成顺式构型时，可使多肽在各脯氨酸弯折处形成准确折叠。2021/4/2625二、一级结构的修饰（一）切除N-端的甲酰基或N-蛋氨酸:（二）个别氨基酸的共价修饰羟脯氨酸,羟赖氨酸的羟化;-OH磷酸化;二硫键的形成组氨酸的甲基化糖苷和脂质的共价修饰（三）水解修饰酶原的激活2021/4/2626胰岛素的加工过程2021/4/2627鸦片促黑皮质素原(POMC)的水解修饰Endophin2021/4/2628三、高级结构的修饰（一）亚基聚合（二）辅基连接四级结构Hb(α2β2+血红素４)2021/4/26292021/4/2630蛋白质合成后需要经过复杂机制，定向输送到最终发挥生物功能的细胞靶部位，这一过程称为蛋白质的靶向输送。

四、蛋白质合成后的靶向输送•蛋白质的靶向输送(proteintargeting)2021/4/2631所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要为N末端特异氨基酸序列，可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这一序列称为信号序列。

•信号序列(signalsequence)2021/4/2632靶向输送蛋白信号序列或成分分泌蛋白N端信号肽内质网腔蛋白N端信号肽，C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列)线粒体蛋白N端信号序列（20～35氨基酸残基）核蛋白核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-，SV40T抗原）过氧化体蛋白-Ser-Lys-Leu-（PST序列）溶酶体蛋白Man-6-P（甘露糖-6-磷酸）靶向输送蛋白的信号序列或成分2021/4/2633分泌性蛋白质合成后透过膜性结构.必须具备三个条件：

1、信号肽

2、蛋白质自身的结构特点

3、转运的机构。2021/4/2634（一）分泌蛋白的靶向输送真核细胞分泌蛋白等前体合成后靶向输送过程首先要进入内质网。信号肽(signalpeptide)各种新生分泌蛋白的N端有保守的氨基酸序列称信号肽。2021/4/2635信号肽的一级结构2021/4/263613~36个氨基酸残基组成碱性N端：带正电荷的碱性氨基酸疏水核心区：疏水中性氨基酸为主C端加工区：极性小分子氨基酸信号肽的特点：2021/4/2637转运的机构信号肽、信号肽识别粒子（SRP包括7SRNA和六种蛋白组成）、膜上的对接蛋白（DP）识别并结合后，将所携带的蛋白质送出细胞。

2021/4/2638Figure27-33intextbook2021/4/2639信号肽引导真核分泌蛋白进入内质网2021/4/2640（二）线粒体蛋白的靶向输送2021/4/2641（三）细胞核蛋白的靶向输送所有靶向输送的胞核蛋白多肽链内含有特异信号序列，称为核定位序列（nuclearlocalizationsequence。NLS）。NLS为4~8个氨基酸残基组成的短序列，富含带正电的赖氨酸、精氨酸及脯氨酸。不同NLS间未发现共有序列。NLS可位于肽链不同部位，且在蛋白质进核定位后不被切除。新合成胞核蛋白靶向输送涉及几种蛋白质成分，包括核输入因子（nuclearimportin）和，以及一种小GTP酶Ran蛋白。2021/4/26422021/4/26439、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。***2/3/20235:00:54PM11、人总是珍惜为得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。***Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、业余生活要有意义，不要越轨。**2/3/202317、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。***03-2月-23谢谢大家2021/4/26449、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。***2/3/20235:00:54PM11、人总是珍惜为得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。***Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月2