标准解读
《GB/T 22287-2008 贝类中甲型肝炎病毒检测方法 普通RT—PCR方法和实时荧光RT—PCR方法》是一项国家标准，旨在规范贝类产品中甲型肝炎病毒（HAV）的检测流程。该标准详细描述了两种主要的检测技术：普通逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与实时荧光逆转录聚合酶链反应（实时荧光RT-PCR），以确保食品安全。
对于普通RT-PCR方法，首先需要从待测样品中提取RNA，然后通过逆转录过程将RNA转化为cDNA，接着使用特异性引物进行扩增反应。最终产物可通过琼脂糖凝胶电泳分析来判断是否存在目标序列，从而确定样品是否含有HAV。
实时荧光RT-PCR技术则是在传统RT-PCR基础上增加了荧光标记探针或染料的应用，使得整个扩增过程可以在封闭系统内连续监测，并且能够定量测定目标核酸的数量。这种方法不仅提高了灵敏度和特异性，还减少了交叉污染的风险，是目前较为先进的病原体核酸检测手段之一。
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- 现行
- 正在执行有效
- 2008-08-12 颁布
- 2008-12-01 实施
文档简介
犐犆犛６７．１００
犡０４
中华人民共和国国家标准
犌犅／犜２２２８７—２００８
贝类中甲型肝炎病毒检测方法
普通犚犜—犘犆犚方法和
实时荧光犚犜—犘犆犚方法
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２００８０８１２发布２００８１２０１实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发布
中国国家标准化管理委员会
书
犌犅／犜２２２８７—２００８
前言
本标准的附录Ａ为规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检
疫局。
本标准主要起草人：陈广全、饶红、段洪安、冯骞、付溥博、张惠媛、汪琦、曾静、张睿、李金华。
Ⅰ
书
犌犅／犜２２２８７—２００８
贝类中甲型肝炎病毒检测方法
普通犚犜—犘犆犚方法和
实时荧光犚犜—犘犆犚方法
１范围
本标准规定了贝类中甲型肝炎病毒的普通ＲＴ—ＰＣＲ和荧光ＲＴ—ＰＣＲ检测方法。
本标准适用于贝类中甲型肝炎病毒核酸的检测。
２规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—２００８，ＩＳＯ３６９６：１９８７，ＭＯＤ）
ＧＢ１９４８９实验室生物安全通用要求
ＳＮ／Ｔ１１９３基因分析检测实验室技术要求
３术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
３．１
聚合酶链式反应狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀，犘犆犚
ＤＮＡ模板先经高温变性为单链，在适宜的温度下和缓冲液中，两条引物分别与模板ＤＮＡ两条链
上的一段互补序列发生退火，接着在ＤＮＡ聚合酶的催化下以四种ｄＮＴＰ为底物，使退火引物得以延
伸，如此反复变性、退火和延伸，使位于两段引物序列之间的ＤＮＡ片段呈几何倍数扩增。
３．２
反转录聚合酶链式反应狉犲狏犲狉狊犲狋狉犪狀狊犮狉犻狆狋犻狅狀狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀，犚犜—犘犆犚
ＲＮＡ在逆转录酶的作用下，适宜反应条件下，被逆转录成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ作为模板进行ＰＣＲ。
３．３
实时荧光犚犜—犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犚犜—犘犆犚
实时荧光ＲＴ—ＰＣＲ方法是在常规ＲＴ—ＰＣＲ的基础上，加入一条特异性的荧光探针。该探针为
一段寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧
光信号被淬灭基团吸收；ＰＣＲ扩增时，犜犪狇酶的５’３’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和
淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可以接收到荧光信号，即每扩增一条ＤＮＡ链，就有一个
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