实验动物基本操作

实验动物基本操作第一页，共一百二十三页，2022年，8月28日

为了确保实验研究结果的可靠性、准确性和可重复性，必须掌握规范的动物实验操作技术。娴熟的动物实验操作技术和技巧，是实验研究的保证。动物具有自卫能力，不会讲话，不领人情，更不会自动服从。减少动物的应激反应或伤害，避免实验人员出现意外和受伤。第二页，共一百二十三页，2022年，8月28日

实验前准备理论准备：了解动物实验基础知识查阅关于实验方法的参考文献制定研究计划和方案条件准备：动物、仪器、器械、药品实验场所和饲养场所第三页，共一百二十三页，2022年，8月28日第四页，共一百二十三页，2022年，8月28日第五页，共一百二十三页，2022年，8月28日实验动物的抓取与固定性别鉴定年龄的大致判断妊娠检查分组与编号本章主要内容常规采血方法给药途径与方法麻醉方法处死方法第六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第一节实验动物的抓取与固定原则：安静环境动作轻柔和熟练善待动物：多一份爱就多一份收获第七页，共一百二十三页，2022年，8月28日小鼠第八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第九页，共一百二十三页，2022年，8月28日大鼠第十页，共一百二十三页，2022年，8月28日豚鼠第十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日家兔第十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日狗第十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日猫第二十页，共一百二十三页，2022年，8月28日猴第二十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日

第二十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日第二节性别鉴定实验设计时有雌雄各半、雌雄不拘等。性成熟后，雌雄动物易区分：外生殖器第二性征新生动物？冬季天冷时的兔子？第二十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日大鼠和小鼠第二十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日兔、豚鼠第二十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日第三节年龄的大致判断提供实验动物时要有动物出生和生长记录。根据卡片记录来准确判断年龄。如无记录则要根据该动物的生长曲线、牙齿、爪子或者毛色特征来大致判断。第二十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日常用实验动物成年体重───────────────────────────

动物

小鼠

大鼠

豚鼠

家兔

猫

狗──────────────────────────

体重

18-28g

180-280g

350-650g

2-3kg

1.5-2.5kg

9-15kg─────────────────────────第二十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日小鼠ICR生长曲线第二十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日CBA/J生长曲线第二十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日初生小鼠即可发声，嗅觉和味觉敏感3日脐带脱落，开始长毛并出现胡须第三十页，共一百二十三页，2022年，8月28日4－6日双耳耸立第三十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日7－8日开始爬行，下门齿长出，被毛浓密第三十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日9－11日有听觉，被毛长齐第三十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日9－11日听觉发育完全，被毛长齐第三十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日12－14日开眼，上门齿出，开始采食、饮水第三十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日能跳跃，能抓取东西第三十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第三十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日第三十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日3周后可断奶独立生活雄鼠：6.90g雌鼠：6.40g第三十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日SD生长曲线大鼠第四十页，共一百二十三页，2022年，8月28日第四十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日初生仔鼠无毛、闭眼、耳孔闭合、6-7克第四十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日耳朵张开第四十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日开始长毛第四十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日被毛明显第四十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日8-10天下门齿长出第四十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第四十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日14-17天开眼第四十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第四十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日19天第一对臼齿长出第五十页，共一百二十三页，2022年，8月28日21天第二对臼齿长出、可以断乳雄鼠：52g，雌鼠：50g第五十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日豚鼠一般年幼豚鼠牙齿短而白，爪软而短，眼睛圆亮，行动活泼，被毛有光泽，且紧贴身体。而老年豚鼠则相反，牙齿和爪均较长，眼睛朦胧，行动迟缓。可根据体重粗略地判断年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。日龄/d初生720306090120180体重/g50-115100-120150-200170-220240-300330-400400-470520-600第五十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日兔年龄判断的重要标志：门齿和爪。门齿：青年兔：洁白、短小、整齐。老年兔：暗黄、厚长、不整齐、破损。趾爪：＜1岁，红多于白，=1岁，红色与白色相当，＞1岁，白多于红色。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。第五十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日狗主要依据牙齿的生长情况、磨损程度、外形、颜色等来综合鉴定:20—30天开始长牙，第10个月牙齿已全部长出。随着年龄的增长，乳齿脱落而长出恒齿。2-4个月，更换门齿，5—6个月更换犬齿。幼年狗的牙齿洁白而无磨损，1—2岁时，下颌的前门齿逐渐被磨损，2—3岁时，前门齿的尖锐端被磨损而消失。而上颌前门齿在2—3岁时才开始磨损。在4—5岁时，其尖锐端也被磨损消失，且牙齿发黄。到10—12岁时，牙根全部磨损。第五十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日年龄

犬齿更换和磨损情况2个月以下仅有乳齿(白、细、尖)2～4个月更换门齿4～6个月更换犬齿(白，牙尖圆钝)6～10个月更换臼齿1岁牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突2岁下门齿尖突部分磨乎3岁上、下门齿尖突大部分磨平4～5岁上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄6～8岁门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损9～10岁唇部、胡须发白10岁以上门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白第五十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日第四节妊娠检查临床检查和实验室检查：外部检查法摸胎法阴道检查法：大小鼠、豚鼠、地鼠直肠检查法：大动物超声波检查法孕酮含量测定法青蛙试验：猴第五十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日大小鼠阴道涂片检查第五十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日阴栓检查第五十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第五节分组与编号动物实验之前，必须对动物进行随机分组，再编号标记。随机化分组：避免人为影响第五十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日一、分组例1：将14只小鼠随机分成两组。①先将小鼠编为1～14号，②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。或者用计算器产生随机数字。编排如下：第六十页，共一百二十三页，2022年，8月28日动物编号1234567891011121314随机数日1622779439495443548217379323归组BBABAABABBAAAA③奇数代表A织，偶数代表B组④A组：356811121314B组：1247910⑤调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组。第六十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日⑥最终分组A组：3568111314B组：124791012注意：如果A组多3个，则再取1个随机数字，除以7。如果除尽，则写下除数当做余数。第六十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日例2：12只大鼠随机分为3组①大鼠编号1~12②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。③每个数分别用3除，记录余数（整除记下3）④根据余数分组大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余数：2，3，1，2，3，2，3，3，1，1，3，1组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A第六十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日⑤A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11⑥调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。⑦最终分组

A：3，9，10，12B；1，2

，4，6C：5，7，8，11第六十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日例2：6只大鼠随机将每只分为1组①大鼠编号1~6②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄6个随机数字。③每个数分别用6、5、4、3、2、1除，记录余数（整除记下除数）④根据余数分组:余数3则把C记下；余数1，则把剩下的第1个字母A记下；第3个余数1，把剩下的第1个字母B记下……大鼠编号：1，2，3，4，5，6随机数字：33，46，10，52，68，07除数：6，5，4，3，2，1余数：3，1，2，1，2，1，A组别：BCDEF第六十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日二、编号和标记1、染色法：浅色动物

3.5-5％苦味酸溶液（黄色）

0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）

2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）第六十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第六十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日2、打耳孔法：小型动物第六十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日3、剪趾法：小型动物139号？第六十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分5、针刺法(纹身)：刺号钳，中、大型动物6、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物7、剪毛法：大动物8、笼子标号第七十页，共一百二十三页，2022年，8月28日第七十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日三、去毛1、剪毛：弯头剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛；如用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。第七十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日4、化学脱毛：常用脱毛剂①8%硫化钠水溶液②硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状③硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状④硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。第七十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日第六节常规采血方法正式实验前后，常需采血测定生化指标。第七十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日1、大小鼠：眶静脉丛（窦）：少量多次采大小鼠血。小鼠0.2～0.3ml，大鼠0.4～0.6ml摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到4～5％体重的血量。尾静脉：用于少量多次采大小鼠血。第七十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日眶静脉丛采血第七十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日摘眼球采血尾静脉采血第七十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.5～1.0ml的血量大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸，右心室）或多次采血（不开胸）。第七十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日鼠断头器第七十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日2、家兔：耳缘静脉：可反复采血，每次5～10ml。耳中央静脉：可反复采血，每次10～15ml。第八十页，共一百二十三页，2022年，8月28日心脏采血可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到80～100ml血量。颈动静脉采血：用于一次性采血，需要手术，可得血量80～10ml。第八十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日3、豚鼠：心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到5～10ml血量。背跖静脉采血：用于少量反复采血。第八十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日4、犬猫：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血5、猪：前腔静脉采血或耳大静脉采血6、羊：颈静脉采血7、猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。8、禽类：翼下静脉第八十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日常用实验动物的

最大安全采血量与最小致死采血量动物种类最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510家兔1040

狗50300

猴1560第九十页，共一百二十三页，2022年，8月28日第九十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。采血时要注意第九十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日常用抗凝剂：肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg＝125U，10U~20U抗1ml血凝集，但通常应用2~3倍剂量。用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100℃烘干，每管可抗凝5~10ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。第九十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用3~5%水溶液，碱性较强。草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。氟化钠：每毫升血加6mg。第九十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日其他体液采集1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓第九十五页，共一百二十三页，2022年，8月28日6、尿液采集：代谢笼收集导尿管采集膀胱穿刺压迫排尿第九十六页，共一百二十三页，2022年，8月28日第七节给药途径与方法在动物实验过程中，应根据不同的实验目的、动物种类、药物类型来决定动物的给药途径与方法。第九十七页，共一百二十三页，2022年，8月28日1、自动口服：加入饲料或饮水2、投喂药片：掰开口，放到舌根部3、灌胃（i.g)4、直肠给药

5、呼吸道给药

6、滴鼻

7、点眼第九十八页，共一百二十三页，2022年，8月28日第九十九页，共一百二十三页，2022年，8月28日8、经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、致敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。

9、皮内注射(i.d)：一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。第一百页，共一百二十三页，2022年，8月28日10、皮下注射(s.c)：颈背部、腋下、腿、侧腹。11、肌肉注射(i.m)：股内侧部肌肉。第一百零一页，共一百二十三页，2022年，8月28日12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中线两侧第一百零二页，共一百二十三页，2022年，8月28日13、静脉注射(i.v)：小鼠：尾静脉大鼠：尾静脉、阴茎静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉大小鼠尾部有4对动静脉，其中背腹各有1根动脉、两侧各有1根静脉很明显。第一百零三页，共一百二十三页，2022年，8月28日尾静脉注射第一百零四页，共一百二十三页，2022年，8月28日阴茎静脉注射舌下静脉注射第一百零五页，共一百二十三页，2022年，8月28日猴的后肢皮下静脉注射浅背侧跖静脉第一百零六页，共一百二十三页，2022年，8月28日豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射家兔：耳静脉注射猪：耳缘静脉第一百零七页，共一百二十三页，2022年，8月28日第一百零八页，共一百二十三页，2022年，8月28日猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射第一百零九页，共一百二十三页，2022年，8月28日14、脑腔注射15、关节腔注射：16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍第一百一十页，共一百二十三页，2022年，8月28日注射途径小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5静脉0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）第一百一十一页，共一百二十三页，2022年，8月28日第八节麻醉方法对动物实施麻醉，是动物福利的措施。如不实施麻醉，动物严重应激，影响实验结果，甚至死亡。动物清醒状态下，可能会伤及人员。第一百一十二页，共一百二十三页，2022年，8月28日1、麻醉方法：全麻吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。局麻浸润麻醉。根据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。第一百一十三页，共一百二十三页，2022年，8月28日第一百一十四页，共一百二十三页，2022年，8月28日常用麻醉剂的用法及剂量麻醉剂动物种类给药途径剂量(mg/kg)常用浓度(％)戊巴比妥钠犬、兔静脉303

腹腔40～503大鼠、小鼠、豚鼠

腹腔40～502硫喷妥钠

犬、兔

静脉15-202

大鼠

腹腔401

小鼠

腹腔15-201氯胺酮犬、猫

腹腔10-4010

大鼠、小鼠

腹腔100～20010

氯醛糖

兔

静脉80-1002

大鼠

腹腔502乌拉坦

兔

静脉750-100030

大鼠、小鼠皮下或肌肉800-100020