




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
第十四章细胞因子检测
P150一.细胞因子检测应注意的问题1.欲了解机体免疫功能,应检测多项细胞因子,如细胞免疫应测IL-2、TFN-γ等2.局部取标本:细胞因子由局部细胞产生,在血液中浓度极低,最好取局部体液或细胞3.动态检测比较,如疾病的复发期、缓解期、恢复期4.同一细胞因子选用多种方法联合检测,各种方法检测结果不一定平衡二.检测方法(P161)生物学方法免疫学方法分子生物学方法(一)生物学方法原理:根据不同细胞因子生物学活性(功能)不同而设计的方法如IL-2可促进T淋巴细胞生长;TNF可杀肿瘤细胞;CSF可刺激造血细胞形成集落;IFN可保护细胞免受病毒攻击。具体方法:细胞增殖法靶细胞杀伤法诱导的产物分析法细胞病变抑制法1.细胞增殖法原理:一些细胞因子可专一刺激某些细胞增殖,而且细胞增殖的程度与这些细胞因子活性呈正相关。如:IL-2——T细胞,IL-3——肥大细胞,IL-6——浆细胞。这些只依赖某种细胞因子才能生长的细胞系称为依赖细胞株。
如人IL-2对鼠T细胞有生长支持作用一定数量鼠T细胞+每孔分别加不同剂量的IL-2培养根据鼠T细胞生长情况,制作IL-2的标准曲线(数孔)2.靶细胞杀伤法
有的细胞因子能杀伤靶细胞(肿瘤细胞),利用同位素释放法或染色法等可判定其杀伤率3.细胞因子诱导的产物分析法某些细胞因子可刺激特定的细胞产生生物活性物质,通过测定其诱生产物来反映细胞因子活性如IL-2、IL-3可诱导骨髓产生组胺;IL-6诱导肝细胞产生-抗糜蛋白酶;4.细胞病变抑制法干扰素可阻止病毒侵害细胞,可用相关试验来检测验干扰素含量。血凝素生成抑制试验:
小鼠脑脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌A549细胞,该病毒在生长过程中可产生血凝素,使人O型RBC凝集
试验管:A549细胞(已长好)加一定量干扰素培养一定时间加病毒培养反复冻融稀释不同倍数加O型血球观察凝集情况
阳性对照加标准IFN;阴性对照不加IFN。
在IFN标准剂量曲线上查出IFN量(二)免疫学检测法
细胞因子为蛋白质或多肽,具有较强的免疫原性,可用其特异性抗体来进行检测。常用的检测方法是ELISA、流式细胞分析法、酶联免疫斑点试验。定量测定(三)分子生物学方法利用细胞因子基因探针检测特定的细胞因子mRNA表达的技术常用方法:斑点杂交、逆转录PCR、Northernblot、细胞或组织原位杂交等试剂:核酸探针——一段用放射性同位素或其他标记物(生物素、地高辛等)标记的一段DNA片段,单链DNA、RNA片段,它可与目的基因mRNA互补此法灵敏、快速三种方法优缺点比较
优点缺点生物学敏感、测功能长期培养依赖细胞株、费时步骤烦琐、影响因素多免疫学简单迅速只检测量,不代表活性,敏感重复好度低(较生物学法低10~100倍)分子生
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 工业设计在智能制造中的重要性
- 工业领域环保技术的推广与实践
- 工业遗产地旅游的开发与利用
- 工作场所心理健康及情绪管理培训
- 工作场所数字化管理的实践与思考
- 工作与生活平衡的职业规划策略
- 工作环境的舒适度对效率的影响
- 工程机械中液压系统的仿真分析
- 工程热力学及传热学基础
- 工艺品创新设计与销售策略
- 《动物保定技术》课件
- 2025年出版:全球市场光伏硅胶总体规模、主要生产商、主要地区、产品和应用细分调研报告
- 北京市朝阳区2023-2024学年四年级下学期语文期末考试卷(含答案)
- GB/T 45385-2025燃气燃烧器和燃烧器具用安全和控制装置特殊要求排气阀
- 留学机构合作协议书范本
- 家校社协同劳动教育实施现状与对策研究
- 国家开放大学《农村经济管理》形考任务1-4参考答案
- 铁丝围挡施工方案
- 石家庄事业单位综合类岗位笔试真题2024
- 《宴会国际礼仪》课件
- 【博观研究院】2025年跨境进口保健品市场分析报告
评论
0/150
提交评论