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第十四章细胞因子检测

P150一.细胞因子检测应注意的问题1.欲了解机体免疫功能，应检测多项细胞因子，如细胞免疫应测IL-2、TFN-γ等2.局部取标本：细胞因子由局部细胞产生，在血液中浓度极低，最好取局部体液或细胞3.动态检测比较，如疾病的复发期、缓解期、恢复期4.同一细胞因子选用多种方法联合检测，各种方法检测结果不一定平衡二.检测方法（P161）生物学方法免疫学方法分子生物学方法（一）生物学方法原理：根据不同细胞因子生物学活性（功能)不同而设计的方法如IL-2可促进T淋巴细胞生长；TNF可杀肿瘤细胞；CSF可刺激造血细胞形成集落；IFN可保护细胞免受病毒攻击。具体方法：细胞增殖法靶细胞杀伤法诱导的产物分析法细胞病变抑制法1.细胞增殖法原理：一些细胞因子可专一刺激某些细胞增殖，而且细胞增殖的程度与这些细胞因子活性呈正相关。如：IL-2——T细胞，IL-3——肥大细胞，IL-6——浆细胞。这些只依赖某种细胞因子才能生长的细胞系称为依赖细胞株。

如人IL-2对鼠T细胞有生长支持作用一定数量鼠T细胞+每孔分别加不同剂量的IL-2培养根据鼠T细胞生长情况，制作IL-2的标准曲线（数孔）2.靶细胞杀伤法

有的细胞因子能杀伤靶细胞（肿瘤细胞），利用同位素释放法或染色法等可判定其杀伤率3.细胞因子诱导的产物分析法某些细胞因子可刺激特定的细胞产生生物活性物质，通过测定其诱生产物来反映细胞因子活性如IL-2、IL-3可诱导骨髓产生组胺；IL-6诱导肝细胞产生-抗糜蛋白酶；4.细胞病变抑制法干扰素可阻止病毒侵害细胞，可用相关试验来检测验干扰素含量。血凝素生成抑制试验：

小鼠脑脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌A549细胞，该病毒在生长过程中可产生血凝素，使人O型RBC凝集

试验管：A549细胞（已长好）加一定量干扰素培养一定时间加病毒培养反复冻融稀释不同倍数加O型血球观察凝集情况

阳性对照加标准IFN；阴性对照不加IFN。

在IFN标准剂量曲线上查出IFN量（二）免疫学检测法

细胞因子为蛋白质或多肽，具有较强的免疫原性，可用其特异性抗体来进行检测。常用的检测方法是ELISA、流式细胞分析法、酶联免疫斑点试验。定量测定（三）分子生物学方法利用细胞因子基因探针检测特定的细胞因子mRNA表达的技术常用方法：斑点杂交、逆转录PCR、Northernblot、细胞或组织原位杂交等试剂：核酸探针——一段用放射性同位素或其他标记物（生物素、地高辛等）标记的一段DNA片段，单链DNA、RNA片段，它可与目的基因mRNA互补此法灵敏、快速三种方法优缺点比较

优点缺点生物学敏感、测功能长期培养依赖细胞株、费时步骤烦琐、影响因素多免疫学简单迅速只检测量，不代表活性，敏感重复好度低（较生物学法低10~100倍）分子生

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