临床免疫学检验：12 超敏反应及检测

第二十一章超敏反应性疾病及其免疫检测P2571.超敏反应(hypersensitivity)——又称为变态反应(allergy)，是指机体受到某些抗原刺激时，出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常适应性免疫应答。①起因：必须是再次接触同一种抗原——变应原。②后果：造成组织细胞损伤和/或生理功能紊乱。

③本质：仍属(适应性)特异性免疫应答反应。超敏反应的分类

Ⅰ型——过敏反应、速发型(IgE)

Ⅱ型——细胞毒型或细胞溶解型

(IgG，IgM)

Ⅲ型——免疫复合物型或血管炎型(IgG)

Ⅳ型——迟发型(Th1，CTL)Ⅰ型超敏反应1．Ⅰ型超敏反应(速发型)试验原理

脱颗粒

IgEFceRI变应原炎症反应

Ⅰ、Ⅳ型超敏反应性疾病常通过

皮肤试验来寻找过敏原。

避免再次接触过敏原是防治两类疾病再次发生的重要手段。

皮肤试验当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特异IgE高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质：如组胺、白三烯、激肽等。在20－30分钟内局部皮肤出现红晕、红斑、风团以及搔痒感，数小时后消失。出现此现象者判断为皮试阳性，即对该变应原过敏；未出现红晕、红斑、风团者为阴性，即对该变应原不过敏。皮内试验方法

Ⅰ型超敏反应皮内试验

（1）前臂内侧皮肤注入,注射量一般为0.01-0.02mL，使皮肤形成直径约2－3mm的皮丘。（2）同时进行数种变应原皮试时，两种皮试变应原的间距应为2.5-5cm。（3）注射后于15－25分钟观察有无风团和红晕反应。（4）Ⅰ型超敏反应皮试时可引起全身反应，故注射后应严密观察，一旦发生严重反应，应及时抢救。

Ⅰ型超敏反应皮内试验风团和红晕大小的分级法级别红晕（cm）风团（cm）

<0.5无反应或小于对照

+1.1~2.00.3~0.5++2.1~3.00.6~0.9+++3.1~4.01.0~1.5,或有伪足++++>4.0>1.5，或有多个伪足变应原皮肤试验挑刺试验（pricktest)主要用于检测Ⅰ型超敏反应方法：试验时将抗原及对照液滴于受检者前臂内侧皮肤，然后在该处用针尖透过抗原液滴与皮肤呈45度进针点刺，1min后擦去抗原液，15min后观察结果。以出现红晕风团为阳性。较皮内试验安全、敏感性低，假阳性少。Ⅰ型超敏反应皮肤试验临床意义

1．寻找变应原2．预防药物或疫苗过敏血清IgE检测

IgE是介导Ⅰ型超敏反应的抗体，检测血清总IgE和特异性IgE对诊断Ⅰ型超敏反应性疾病及确定其变应原均很有价值。*IgE——亲细胞性抗体可通过其Fc段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面上的IgE

Fc受体结合而使机体处于致敏状态。血清总IgE检测血清总IgE水平是针对各种抗原诱导产生的IgE的总和。正常情况下血清IgE含量很低，仅在20-200U/ml水平。临床上一般选用敏感性较高的化学发光法及酶联免疫吸附法、免疫比浊法、放射免疫等进行检测。1．放射免疫吸附试验

此试验是将抗IgE抗体吸附到固相载体上，用以检测血清IgE(抗原)，故又称固相放射免疫测定。

临床上常用双抗体夹心法，载体多用滤纸，将已知抗IgE抗体偶联到经溴化氰活化的滤纸上,使其与待测血清中IgE进行反应，洗涤后加入125I标记的抗人IgE，再经洗涤后测定滤纸片的放射活性。其测定值与标本中的IgE含量呈正相关。2．酶联免疫测定法测定血清IgE也可用双抗体夹心ELISA法该法方便、实用，敏感性、特异性好无同位素污染，也不需要特殊仪器临床上应用较广洗涤三次终止液血清总IgE检测临床意义

正常人血清IgE水平为20－200Iu／ml(1Iu=2.4ng)Ⅰ型超敏反应性疾病、寄生虫感染、急慢性肝炎等可使IgE升高血清IgE的量受多种因素的影响，如年龄、种族、地域、环境、遗传及检测方法等。分析血清IgE结果必须考虑当地人群的IgE水平特异性IgE测定

特异性IgE是指能与某种过敏原特异结合的IgE（sIgE)。检测时是将纯化的特异变应原包被,采用间接法检测血清中IgE(Ab)。常用检测方法:放射免疫技术酶联免疫技术

1．放射变应原吸附试验（radioallergosorbenttest,RAST）

将纯化的变应原吸附于固相载体上，加入待测血清(一抗）及参考标准品，再与同位素标记的抗人IgE抗体(二抗)反应，最后测定固相的放射活性。利用参考标准品做出标准曲线，求出待测血清中与变应原相结合的特异IgE含量。

2．酶联免疫测定法

试验原理及步骤基本与RAST

只是将同位素标记抗人IgE改为加酶标记的抗人IgE，再加入底物，利用酶催化底物生成有色产物显色来判断结果

特异性IgE检测临床意义

特异性IgE的增高对诊断Ⅰ型超敏反应疾病更具有重要价值采用间接法检测特异性IgE时特异性高、敏感性强、影响因素少，同时也可确定变应原Ⅳ型超敏反应1．Ⅳ型超敏反应(迟发型)试验原理

皮肤试验用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的CD4+Th1再次遇到相应抗原后，释放出大量细胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用；（2）吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；（3）促进T细胞增生和分泌细胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反应。

48-72小时后局部出现红肿、硬结或水泡，以此来判断变应原是否引起机体Ⅳ型超敏反应或了解机体的细胞免疫功能。

Ⅳ型超敏反应皮肤试验结核菌素皮试指用1:2000浓度的旧结核菌素（OT）或PPD0.1ml作Ag，于前臂内侧皮内注射，48-72h后注射局部出现红肿、硬结等局部炎症反应。该实验为典型的感染性迟发型超敏反应。

该试验设计是基于人群中96%的人均感染过结核菌（被结核抗原致敏），致敏淋巴细胞再次接触抗原（如OT)后，释放细胞因子，使局部产生以巨噬细胞、淋巴细胞浸润为主的炎症反应（表面为红肿硬结）。阳性（直径>0.5cm)：表明曾感染过结核菌，细胞免疫功能好阴性(直径<0.5cm)

：表明细胞免疫功能差或从未感染过结核菌强阳性（直径>2.5cm)：表明现处于结核的活动期

Ⅳ型超敏反应皮肤斑贴试验（patchtest）

主要用于寻找接触性皮炎（属Ⅳ型超敏反应）的过敏原。取数层1cm2纱布浸蘸变应原溶液，贴敷于受检者前臂内侧，盖以玻璃纸或蜡纸，再用纱布固定48－72h观察结果敏感度不高，假阳性少

Ⅳ型超敏反应皮试结果判定标准

反应结果皮内斑贴无反应（）无反应或小于对照无反应或小于对照弱阳性（+）仅有红肿轻度红肿、搔痒阳性（++）红肿伴硬结（0.5－1cm）明显红肿，时有红斑强阳性（+++