实验二环境中的微生物

实验二环境中的微生物第一页，共二十六页，2022年，8月28日概述

因为微生物是肉眼看不见的，所以大家常常忽略一些经常接触的微生物。比如：室内外的空气、水、土壤；试验台面、椅子以及皮肤、头发、口腔等等。这些菌群大多属于正常菌群，与人们朝夕相处，但有些时候也能引起传染（条件致病菌），因此大家在以后的学习与实验中一定要特别注意操作步骤。第二页，共二十六页，2022年，8月28日实验室环境和人体表面微生物的检查一、实验目的证明实验室环境和人体表面存在微生物；比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；观察不同类群微生物的菌落形态特征；体会无菌操作的重要性。第三页，共二十六页，2022年，8月28日二、实验原理什么叫菌落？

平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜的条件下，1～2d内每一个菌体能通过细胞分裂（2n）而进行繁殖，形成一个肉眼可见的有一定形态结构的子细胞的群落,称为菌落。第四页，共二十六页，2022年，8月28日每一种菌落都有它自己的特征（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等），是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。第五页，共二十六页，2022年，8月28日菌落的形态结构、大小、色泽、透明度、黏稠度、色素及边缘情况等，因各种细菌而异。每一种细菌保持有一定的菌落特征，这些菌落特征的区别点都可作为鉴别细菌的依据之一。菌落特征为有呈圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有卵黄中心、直径2～3mm、不透明菌落、周围为一混浊带，外层有一透明带。第六页，共二十六页，2022年，8月28日第七页，共二十六页，2022年，8月28日细菌、酵母菌不形成菌丝，其菌落仅生长在固体培养基表面，可用接种工具将其全部挑起，即与培养基结合不紧密；而放线菌、霉菌的菌体大多分化为营养菌丝与繁殖菌丝，其营养菌丝深入培养基中吸取营养，故具有与培养基结合较紧，不易挑起等特征。第八页，共二十六页，2022年，8月28日三、仪器与材料1.牛肉膏蛋白胨琼脂平板（2个/人）、肥皂、标签纸、记号笔。2.仪器培养箱、酒精灯（1个/组）、灭菌棉签、接种环等。第九页，共二十六页，2022年，8月28日四、操作步骤（一）写标签

在各自的培养皿皿底上贴上标签，标明样品来源、姓名、日期。注意不要贴在中间！第十页，共二十六页，2022年，8月28日1.空气中细菌的检查（老师准备）2.实验台上细菌的检查3.手指上细菌的检查4.头发上细菌的检查5.口腔中细菌的检查（二）细菌的检查第十一页，共二十六页，2022年，8月28日1.空气中细菌的检查将平板放在实验室台面上，移去皿盖，使培养基表面暴露于空气中，0.5h后盖上皿盖，倒置于28℃培养箱培养。第十二页，共二十六页，2022年，8月28日2.实验台上细菌的检查在酒精灯附近操作，划线的角度要小，移动的压力不能太大。

①在培养皿底画线，将其一分为二，并贴上相应的标签；②取出棉签（动作要迅速）；③先在无菌平板的一个区域内试划几下；④然后用同一根棉签在实验台面擦拭2cm2的范围；⑤在培养皿的另一区域同样划线。第十三页，共二十六页，2022年，8月28日3.手指上细菌的检查①用记号笔在平板底部画线，将其平均分成两部分，标明洗手前与洗手后及姓名、日期；②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表面轻轻地来回划线，盖上皿盖。③用肥皂将手清洗干净，自然干燥后，在平板的另外一部分同样划线。第十四页，共二十六页，2022年，8月28日4.头发上细菌的检查在揭开皿盖的平板上方，用手将头发拨动数次，使细菌降落到平板表面，然后盖上皿盖。第十五页，共二十六页，2022年，8月28日5.口腔中细菌的检查将揭开皿盖的平板放在离口约6～8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。第十六页，共二十六页，2022年，8月28日（三）细菌的培养将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放入28℃培养箱培养1～2d。第十七页，共二十六页，2022年，8月28日（四）结果记录1.菌落计数

划线的平板数最后1/2面积的菌落数；

非划线平板直接数1/4面积的菌落数。2.特征描述观察菌落的特点时要选择分离很开的单个菌落。特征明显的菌落可初步判断属于哪种微生物。第十八页，共二十六页，2022年，8月28日（五）实验结果记录将结果如实记录，并清洗各自的平板。第十九页，共二十六页，2022年，8月28日描述菌落特征时须选择稀疏、孤立的菌落，其项目包括大小、形状、边缘情况、隆起形状、表面状态、质地、颜色和透明度等。多数细菌菌落圆形，小而薄，表面光滑、湿润、较粘稠，半透明，颜色多样，色泽一致，质地均匀，易挑取，常有臭味。这些特征可与其他微生物菌落相区别。第二十页，共二十六页，2022年，8月28日不同细菌的菌落也具有自己的特有特征：对于产鞭毛、荚膜和芽孢的种类尤为明显。例如，对无鞭毛、不能运动的细菌尤其是各种球菌来说，随着菌落中个体数目的剧增，只能依靠“硬挤”的方式来扩大菌落的体积和面积，因而就形成了较小、较厚及边缘极其圆整的菌落。对长有鞭毛的细菌来说，其菌落就有大而扁平、形态不规则和边缘多缺刻的特征，运动能力强的细菌还会出现树根状甚至能移动的菌落。有荚膜的细菌，其菌落往往十分光滑，并呈透明的蛋清状，形状较大。凡产芽孢的细菌，因其芽孢引起的折光率变化而使菌落的外形变得很不透明或有“干燥”之感，并因其细胞分裂后常成链状而引起菌落表面粗糙、有褶皱感，再加上它们一般都有周生鞭毛，因此产生了既粗糙、多褶、不透明，又有外形及边缘不规则特征的独特菌落。同一种细菌在不同条件下形成的菌落特征会有差别，但在相同的培养条件下形成的菌落特征是一致的。所以，菌落的形态特征对菌种的分类鉴定有重要的意义。菌落还常用于微生物的分离、纯化、鉴定、计数及选种与育种等工作。第二十一页，共二十六页，2022年，8月28日不同种类的细菌其菌落形态互不相同，表现在大小、形状、边缘、隆起、光泽、质地和颜色等方面。细菌菌落大小不一，小的不到1毫米，大的可以铺满整个培养皿；菌落形状有圆形、不规则形、卷发状、假根状等；菌落的隆起形状有扩展、台状、低凸、乳头状等；有的菌落有光泽、有的没有；有的菌落较粘，有的则较脆；菌落一般呈灰色，少数为白色、黄色、红色、绿色和棕色等。

第二十二页，共二十六页，2022年，8月28日各种菌落的菌落特征细菌的菌落

细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种的依据。

大肠杆菌第二十三页，共二十六页，2022年，8月28日霉菌由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1~2厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。

第二十四页，共二十六页，2022年，8月28日放线菌的菌落

放线菌在固体培养基上形成与细菌不同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色，使得菌落的正反面呈现出不同的色泽。

第二十五页，共二十六页，2022年，8月28日放线菌放线菌的菌落由菌丝体组成。放线菌菌丝纤细，生长缓慢，相互交错，所以形成的菌落较小而且质地致密