实验一分光光度计的性能检验

实验一分光光度计的性能检验第一页，共十三页，2022年，8月28日目的（1）学会使用分光光度计。（2）掌握分光光度计的性能检验方法。第二页，共十三页，2022年，8月28日实验原理（1）分光光度计的性能好坏，直接影响到测定结果的准确性，因此新购仪器及使用一定时间后，均需进行检验调整。（2）利用KMnO4溶液的最大吸收值来检验波长的精度。（3）同种厚度的比色皿，由于材料及工艺等原因，往往造成透光率的不一致，从而影响测定结果，故在使用时需加以选择配对。第三页，共十三页，2022年，8月28日仪器和试剂（1）722型分光光度计（2）容量瓶：25ml1支；100ml1支（3）吸量管：1ml1支，10ml1支（4）0.2mol/LKMnO4溶液（5）0.02mol/LK2Cr2O7溶液第四页，共十三页，2022年，8月28日操作步骤1

1．比色皿透光率的检查

以空气的透光率为100%，则比色皿的透光率应不低于84%，同时在450nm、650nm处测其透光率，各透光率差值应小于5%。2．比色皿的配对性同种厚度的比色皿之间，透光率误差应小于0.5%。检查方法：将0.02mol/L的K2Cr2O7溶液5ml稀释到25ml,分别注入厚度相同的几个比色皿中。以其中一个比色皿的溶液做空白，在440nm波长处分别测定其它各比色皿中溶液的透光率，然后选择相差小于0.5%的比色皿使用。第五页，共十三页，2022年，8月28日操作步骤2

3.重现性仪器在同一工作条件下(440)，用同种溶液连续测定7次，其透光率最大读数与最小读数之差(极差)应小于0.5%。检查方法如下:以蒸馏水的透光率为100%,用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则符合要求。第六页，共十三页，2022年，8月28日操作步骤24.波长精度的检查为了检查分光系统的质量,可用KMnO4溶液的吸光度最大吸收波长525nm为标准,在待检查仪器上测绘KMnO4溶液的吸收曲线。检查方法如下:取0.2mol/L的KMnO4溶液0.3ml,用水稀释到100ml。以水为空白调零，在460~570nm处，每隔5nm分别测定吸光度，在坐标纸上绘出吸收曲线。若测得的最大吸收波长在525±10nm以内，说明该仪器符合使用要求。第七页，共十三页，2022年，8月28日722型分光光度计使用方法

1.开机后需预热20分钟。2.波长设定需从短波向长波方向调整。3.调零需在透射比模式下将比色皿架置于调零档。4.调满度时将空白样品置于光路，按100%T（OA）键。5.按方式键可实现透射比，吸光度方式转换。6.波长改变后千万不能忘了再调到零和调满度。第八页，共十三页，2022年，8月28日注意事项

1.待测溶液装量应超过比色皿2/3，但也不能装得太满。2.实验过程中，注意不要将溶液撒入机器内部，如果发生上述情况，请及时清理干净。3.比色皿用后，请洗净后，用95%乙醇浸泡，长期不用，请擦干后，收好。第九页，共十三页，2022年，8月28日300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2AbsorbanceCr2O72-、MnO4-的吸收光谱350第十页，共十三页，2022年，8月28日数据1．比色皿透光率的检查4个比色皿在450nm、650nm的透光率2．比色皿的配对性4个比色皿中K2Cr2O7溶液在440nm的透光率3.重现性1个比色皿中K2Cr2O7溶液在440nm的透光率4.波长精度的检查1个比色皿中KMnO4溶液在460～570nm吸光度第十一页，共十三页，2022年，8月28日思考题

1．同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？2．检查分光光度计的波长精度及重现性对测定有