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文档简介
实验一一、淋巴细胞的分离二、细胞抗原片的制备三、人血清分离
杜联峰外周血细胞淋巴细胞单核-巨噬细胞粒细胞红细胞血小板一、淋巴细胞的分离
原理:根据淋巴细胞与血液中的其他细胞存在密度差异(比重差异),利用密度与淋巴细胞相近且近于等渗的分离液(ficoll液)作密度梯度离心进行分离。方法:聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法(Ficoll分离液法)目的:将淋巴细胞从外周血细胞中分离出来分离液要求:①对细胞无毒②基本等渗③有一定比重(根据所分离物质选择分离液)实验材料:淋巴细胞分离液,离心管,刻度吸管,毛细吸管,抗凝管等。
实验步骤:1、无菌采外周静脉血2ml加入抗凝管混匀、5分钟后加入Hank’s液2ml稀释血液。2、将抗凝血沿管壁缓慢加入分离液中。3、配平,放入水平离心机2000rpm离心10分钟4、用毛细吸管吸取血浆与分离液处淋巴细胞,放入刻度离心管中。5、加入Hank’s液至5ml,,2000rpm离心5分钟。弃去上清,沉淀为淋巴细胞Ficoll分离液法血浆淋巴细胞分离液粒细胞红细胞2000r/min20min稀释的抗凝血淋巴细胞分层液
淋巴细胞血浆
分层液稀释液
红血球二、淋巴细胞抗原片制备吹铺冷风吹干冷丙酮固定5~15min冷风吹干,密封置-30℃以下低温保存三、人血清分
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