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文档简介

1.2基因工程的基本操作程序（二）1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在和表达的过程。1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）1、将目的基因导入植物细胞（1）导入细胞的种类（2）导入方法农杆菌转化（最常用）体细胞双子叶植物和裸子植物其他植物可用酚类物质处理后用农杆菌转化1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）1、将目的基因导入植物细胞（2）导入方法基因枪法花粉管通道法1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）2、将目的基因导入动物细胞（1）导入细胞的种类（2）导入方法显微注射法最好是受精卵细胞1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）3、将目的基因导入微生物细胞（1）微生物作为受体的优势（2）导入方法Ca2+处理①繁殖速度快，可大量生产②生产成本低胰岛素原的人工合成

1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）3、将目的基因导入微生物细胞（3）原核生物作为受体细胞产生的蛋白质没有空间结构，需要在体外加工。1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞导入方法农杆菌转化法（最常用）基因枪法花粉管通道法显微注射法Ca2+处理法（感受态细胞发）受体细胞受精卵或体细胞受精卵原核细胞（细菌）1.2基因工程的基本操作程序第三步：将目的基因导入受体细胞（转化transformation）生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞转化过程将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→Ca2+处理导入农杆菌细胞→侵染植物细胞→目的基因整合到受体细胞的染色体上DNA上→植物组织培养→试管苗表达目的基因→产生相应性状。将含有目的基因的表达载体提纯→取受精卵→显微注射→获得导入目的基因的受体细胞→早期胚胎培养→胚胎移植→获得新性状的动物。Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组的基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子完成转化→目的基因表达，获得新性状。1.2基因工程的基本操作程序第四步：目的基因的检测与鉴定抗虫鉴定、抗病鉴定活性鉴定等抗原－抗体杂交法分子杂交法DNA分子杂交法受体是否具有转基因特征个体水平目的基因是否翻译目的基因是否转录目的基因是否导入分子水平方法检测对象DNA分子限制片段限制性酶切割琼脂糖电泳转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记DNA探针杂交放射自显影带有DNA片段的凝胶凝胶滤膜用缓冲液转移DNA吸附有DNA片段的膜DNA分子杂交32P-抗体裂解细胞，表达蛋白转移

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