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文档简介

掌握细胞融合的方学习使用PEG促进细胞融合的方二．实验原的细胞合并形成一个细胞的过程。由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大10−4-10−6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。生物方法： ，Newcastle ，Vaceine（DMSO从而使细胞发生融合。在众多的化学试剂中，PEGPEG更易和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。2080置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。三．实验材料及实验材料50%PEG混合鸡红细胞悬生理盐Hanks实验设备普通光学显微载玻片若干，注射灯、恒温水浴离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷四．实验方法及取细胞悬液1mL，移入10mL4mL0.85%生理盐水混匀。1200r/min离心5min。弃上清液（用吸管吸去0.85%生理盐水5mL，混收集最后一次离心沉淀的血细胞，加入适量Hanks910%的红细胞悬液（浓度约为3-4万个/mL）取上述悬液1mL到一个试管中，加入0.5-0.8mL五．实验结13在光镜下可见单个椭圆状的鸡血红细胞，在经由PEG接触的鸡血红细胞发生融合，可见相互接触的红细胞逐渐融合组成一PEG以可见大量细胞而成的褐红色团块。六．实验讨实验结论讨论一：细胞融合方法主要有哪几类？各有何优缺点几类细胞融合方法的优缺点如下好；缺点为PEG对细胞性，处理不好则会直接影响融合细胞讨论二：本实验中所用的PEG融合方法能否用于植物细胞？为本实验所用PEG融合方法不能直接用于未脱壁植物细胞的融合，因为植物细胞具有细胞壁，PEG无法介导其细胞融合；但是，如果将PEG讨论三：和其他同学比较，为什么出现了较多褐色团块？影响PEG融合的因素还有哪些？管，导致被PEG其他影响因素PEG的分子量与浓度:细胞融合效果与PEG的分子量及其PEGPEG1000~4000，浓度一般为40~60%。PEG的pH经验证，PEGpH8.0~8.2之间融合PEG的处理时间:处理时间越长，融合效果越好,但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实果,在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细,一般采用的温度为38~40℃。七．参考文[1]DOSREMEDIOSCG,CHHABRAD,KEKICM,etal.Actinbindingproteins:regulationofcytoskeletalmicrofilaments.[J].2(2):433-473[3],,,等.PEG介导细胞融合最适条件的探讨[J].动物医学

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