超高效液相色谱

超高效液相色谱及其应用环境科学班第五组演讲人：孙硕ppt制作：宋云龙材料收集：任苏瑜石君随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。因此，UPLC（超高效液相色谱）概念得以提出，将HPLC的极限作为自己的起点。前言概念超高效液相色谱技术（ultraperformanceliquidchcromatography，简称UPLC）是一种综合了小颗粒填料、非常低系统体积(死体积)及快速检测手段等全新的检测技术。在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度的同时，保留其原有的实用性及原理。构造

范德米特(VanDeemeter)方程HETP=AdP+B／v+CdP2HETP：理论塔板高度A：涡流扩散系数dP：填料粒径B：分子径向扩散系数C：传质因子为流动相线速度由该方程可得出结论：颗粒度越小柱效越高；每个颗粒度尺寸有自己的最佳柱效的流速；更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速(线速度)方向移动，而且有更宽的线速度范围所以降低颗粒度不但提高柱效，同时也提高速度。原理优点超高分离度基于1．7m小颗粒技术的UPLC与人们熟知的高效液相色谱技术，具有相同的分离原理。不同的是，UPLC不仅比HPLC具有更高的分离能力，而且结束了人们多年不得不在速度和分度之间取舍的历史。使用UPLC可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作，并获得优异的结果。由右图可见：UPLCTM可以大大提高分离度，同时色谱峰强度也得到了提高。超高速度新一代UPLC系统用1.7µm颗粒，柱长可以比用5µm颗粒时缩短3倍而保持柱效不变，而且使分离在高3倍的流速下进行，结果使分离过程快了9倍而分离度保持不变。较小的颗粒能提高分析速度而不降低分离度；且VanDeemter理论表明柱长缩短会加快分离速度，而颗粒度越小，最佳流速也越大，进而可以通过提高流速来进一步加快分离速度。图4:UPLC与HPLC：速度比较图5：UPLC美国药典有关物质分析实例原有HPLC分析需要4个不同的方法、三根不同的色谱柱，至少需要65分钟才能完成；UPLC使用了一根色谱柱、一种简单方法，在1分钟内即可完成。超高灵敏度由于待测有机物的浓度越来越低，使得灵敏度成为很多分析对象的关键。UPLC使用小颗粒技术可以得到更高的柱效从而改善了分离度、更窄的色谱宽度，即更高的灵敏度。图6:HPLC到UPLCTM：灵敏度的改善无需折衷方法转换简便易与质谱串联......应用食品安全领域1.1农药残留物检测领域农药残留分析属于微量至超微量分析范畴，要求检测仪器有非常高的灵敏度；同时，由于其具有种类繁多、结构复杂等特点，对检测方法的通量和速度也提出了更高的要求。在农残分析检测中，UPLC与传统的HPLC相比较，不仅在分离度、灵敏度和分析速度上得到较大提高，而且很大程度上减少了样品和试剂的消耗量，具有很好的应用前景。1.2食品添加剂分析检测中的应用随着食品品种和添加剂种类的增加、多种添加剂的复配使用，迫切需要建立多种添加剂同时快速检测的方法。目前，HPLC技术是食品添加剂检测的最常用方法；而较这一传统方法而言，在技术性能上拥有优势的UPLC得到了更突出的应用。药物开发领域2.1化学药品分析在针对药物合成的分析方面，UPLC可实现随时快速准确检测合成过程中的中间体、副产物或降解产物等。2.2中药药品分析Waters公司合成了1．7p．m颗粒度的AcquityUPLC填料，减少了固定相表面残余硅羟基，因而在分析生物碱类样品时，流动相中只加入酸抑制剂，不需添加有机胺即可使其获得良好的分离。由于在流动相中避免了有机胺及盐的加入，可以在一定程度上降低质谱噪音、减少对质谱的污染，且使用的