agilent HPLC化学工作站操作培训

Agilent1100化学工作站

操作培训2023年2月1日1Agilent1100化学工作站培训日程安排第一天上午：1欢迎，相互介绍 2液相色谱基础

3HPLC仪器工作原理 下午：1Agilent1100硬件的结构及特点

（真空脱气机、泵、自动进样器、检测器）

2

Windows操作系统简介 3

化学工作站的重新安装、配置及启动 4

练习（实验一）第二天上午：1化学工作站View菜单介绍

2方法的编辑、修改、存贮及运行

3Agilent各部件采集参数设置 4填写样品信息表、进样分析（实验二） 下午：1数据处理参数设置

（谱图优化、积分优化）

2练习

3谱图处理、手动积分 2第三天上午：1各种定量方法原理及其优缺点

2建立多级外标校正曲线，用外标法定量 3练习（实验三） 下午：1建立多级内标校正曲线，用内标法定量 2再校正、设定报告类型 3练习（实验四）

4高级功能简介（序列、DAD光谱功能……） 第四天上午：1系统日常维护和保养 2工作站故障诊断功能的应用 3Agilent1100泵的维护（拆泵头，更换泵头消耗品） 4Agilent1100检测器的维护（VWD、DAD易耗品的 更换，清洗流通池） 5练习

结业午餐

下午：1

考试

2

发结业证 3自由练习、讨论3第一章色谱基础本章内容：液相色谱发展史液相色谱的基本概念影响峰形扩展的因素4历史回顾0NNNNMgCHCH23CH3CH3HC30CH3CH3CH30CH300M.S.Tswett.Ber.Dtsch.Bot.Ges.24:384-393(1906)1906-MikhailSemenovich

Tswett(1872-1919)碳酸钙吸附剂石油醚1940‘s-分配色谱和纸色谱1950‘s-气相,薄层，凝胶过滤色谱梯度洗脱色谱1960‘s-商业高效液相色谱.5柱色谱装载样品装载溶剂重力洗脱玻璃柱硅胶氧化铝纤维素糖类粉末滤网1050100150Volume(mL)Time(hr)1.02.03.04.06高效液相色谱进样口检测器色谱图色谱柱溶剂泵混合器(HPLC)7液相色谱类型TypesofCompoundsSeparatedNeutralsWeakAcidsWeakBasesIonics,Bases,AcidsCompoundsInsolubleinWater,OrganicIsomersIonicsInorganicIonsHighMWCompoundsPolymersModeReversed-PhaseIon-PairNormal-PhaseIonExchangeSizeExclusionStationaryPhaseC-18,C-8,C-18,C-8Silica,Amino,CyanoDiolAnionorCation

ExchangePolystyreneMobilePhaseWater/OrganicModifiersWater/OrganicIon-PairReagentOrganicsAqueous/BufferCounterIonGelFiltration-AqueousGelPermeation-OrganicSilicaResinC-4,C-28色谱参数DetectorResponseTimeABWWABInjectt0tR(A)tR(B)t=保留时间

t=死时间R

W=峰底宽度0

－定性和定量tR(B)-

tR(A)WA+WBR=2tR(B)-

tR(A)W1/2A+W1/2B=1.176K’=tR-t0t09不同R值的峰重叠R=1.5可以得到基线分离01.2510影响R值的因素ΔtW=R=1/4Nxα-1xk'1+k'容量因子选择性柱效α11容量因子各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的变化增大或缩小增加流动相的洗脱强度，降低了洗脱物的容量因子对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2到2/3。溶剂洗脱强度弱溶剂洗脱强度强246810110070030010060%AcetonitrileTime(min.)mAU20001600600080%AcetonitrileTime(min.)mAU100040%Water20%Water24681012分离选择性改用不同的流动相改变流动相的组成改变流动相pH值改变柱温应用特殊的化学效应改变固定相(α)改变分离选择性α的方法t0=1=k'k'BAAB23AB12AB12==1.641.58=1.04=1.150.85=1.35=0.950.63=1.50k'k'BAαααα13温度对分离选择性α的影响40℃60℃1005TimeinMinutes14柱效DetectorResponseInjectTime高柱效低柱效15InjecttRWWTimeN=16=5.54HETP=tRW2tR2LN1/2W1/2BB计算柱效16扩散h=A+CuBu.HETPBuC.uA线速度A=涡流扩散B=自由分子扩散C=传质阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquation+17初始带宽最终带宽AA=涡流扩散——多径扩散仔细填充柱子使用均一的载体线速度HETP扩散18扩散BB=自由分子扩散——纵向扩散在液相中影响小在低流速中影响大线速度HETP19扩散滞流的流动相流动相固定相C.uC=传质阻力在低流速下可以降低传质阻力使用小颗粒载体可以降低传质阻力HETP线速度20扩散h=A+CuBu.HETPBuC.uA线速度A=涡流扩散B=自由分子扩散C=传质阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquation+21柱外效应样品体积I.连接管路的体积色谱柱进口设计色谱柱出口设计检测池体积(<10µL)II.III.IV.V.降低输出回路响应时间VI.22不同分离度比较PoorefficiencyModerateselectivityPoorefficiencyGoodselectivityExcellentefficiencyPoorselectivityExcellentefficiencyModerateselectivityR=1R=1.5R=0.5R=423如何提高分离度通过下述方法增加保留时间:选择合适的分离参数增加色谱柱长度增加固定相浓度通过下述方法降低谱带宽度:使用均一的载体仔细填充柱子选择粒度小的载体优化流速减小进样量降低系统死体积降低输出回路响应时间24第二章HPLC仪器工作原理本章内容：往复活塞泵的结构及工作原理手动进样器（六通阀）结构及工作原理常见检测器检测原理25溶剂传输系统往复活塞泵(单向阀)GoldSealSapphireInsertRubyBallSpringInsert26溶剂传输系统减小流量脉冲－并联柱塞泵单向阀PABABSinglePistonDelivery柱塞A前进柱塞B后退CombinedDelivery相消干扰通常也需要阻尼器增加了单向阀的使用数量P27溶剂传输系统消除流量脉冲－串联柱塞泵单向阀P需要阻尼器减少了单向阀用量压缩因子补偿脉冲阻尼器28ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFromPumpToWaste手动进样器－六通阀29检测器使用统计43.0%22.0%10.0%8.0%7.0%5.0%1.0%4.0%UV-VISDADFluorescenceRefractiveIndexElectrochemicalConductivityMassspecOthers30NecessityforMorethanPAH'sextractedfromsoil;Col.:Sup.LC-PAH150x4.6mm;Solv.:H2O/CH3OH=10:90FluorescenceUV-signalWL241/394WL270/388WL248/411WL302/420WL247/504PyreneChryseneBenzo(e)pyrenePeryleneBenzo(k)fluorantheneBenzo(a)pyreneBenzo(ghi)peryleneIndeno(123-cd)pyreneSensitivityOneDetector31NecessityforMorethanOneDetectorFlecainideinSerumTherapeuticconcentration:1.8mg/l,20ulinjectedUVandfluorescencesignalFLsignalUVsignal

Selectivity32需要多个检测器QualitativeInformationTakepeakspectrum(UV)Chlortoluron?44685896132138158172215200Takepeakspectrum(MS)104Mass/ChargeAtrazine?Wavelength(nm)608010012014016018020022020025033紫外－可见检测器根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。I0=入射光强度I=透射光强度A=吸光度

a=摩尔吸光系数b=检测池长度c=溶质浓度IICboDetectorCellLog=A=abcI0I34发色团吸收波长ChromophoreAmineEthyleneKetoneEsterAldehydeCarboxylNitroPhenylNaphthyl-NH-C=C-

C=O-COOR-CHO-COOH-N210310202,255220,275max(nm)22----max=wavelengthofabsorptionmaximumStructure35Instrumentation-AbsorbanceVariableWavelength(UV/Visible)LightMonochromatorflowSourceCellDetectorElementSlitsMechanicalGratingDetectors36Instrumentation-AbsorbancePhotodiodeArray(UV/Visible)LightFlowSourceCellPhotodiodeLensesSlitsArrayHolographicGratingDetectors37DAD-PeakPurityGraphicalandNumericalResults200200400400PurityMatch764PurityMatch999impurepureSignalSpectraWavelength(nm)Wavelength(nm)Time(min.)8.28.638InstrumentationFluorescenceDetectorsGrating-GratingFlowCellPhotomultiplierTubeLightSourceExcitationEmissionVariableExcitationandEmissionWavelengths39InstrumentationRefractiveIndexDetectorsSampleReferenceSampleCellReferenceCellPhotodiodesBeamDeflectionFresnelPrismLaserInterferometerReferenceSample40第三章

固定相结构本章内容：固定相载体结构正相色谱固定相键合相色谱固定相41ParticlesofColumnPackings50µmLargePorousParticles30µmPellicularBeads3-10µmMicroparticulates2µmActiveSurface42TypicalColumnSiSiSiSiSiPackingSupportsChemicallyModifiedSilicaGelOHSiOSiOHOOSiOHOSiOOSiOHPoresSilicaGelSurface3CHCH3Si-O-Si-(CH2)17CH343正相HPLC极性固定相有机流动相传统目前硅胶氧化铝氰基二醇基氨基吸附色谱键合相适用于:同分异构体的分离.在有机/水流动相中不溶化合物的分离.适用于中等极性化合物分离.44吸附色谱保留机理OSiOSiOSiOOHHOROHHORO机理

H-键溶质顶替等量的溶剂固定相硅胶氯化铝流动相有机溶剂

偶极矩-键45吸附色谱中的保留smallk'largek'saturatedhydrocarbonsolefinsaromatichydrocarbons,organichalidessulfidesethersnitro-compoundsesters,aldehydes,ketonesalcohols,aminessulfonesamidescarboxylicacids非极性不保留sulfoxides极性被强烈吸附46硅胶柱和氧化铝柱的缺点容易脱尾样品被催化分解不易梯度洗脱含水量要控制47正相色谱键合相OSiCH3CyanoOSiCH2()nNH2CH2DiolAmineCNSiCHOHCHCHOOH22CH3(CH)2nSiCH3CH3SiSiCH3CH348键合相柱优点固定相不易被流动相洗脱无需饱和色谱柱非常容易进行梯度洗脱柱子平衡非常快使用极性范围宽选择性唯一柱容量大溶质不易污染柱子49ThermostattedcolumncompartmentQuaternarypumpControlmoduleG1354AG1316AG1323AG1313ADiode-arraydetectorBinarypumpAutosamplerG1315AG1312A

Vacuum

degasserIsocratic

pumpVariablewavelengthdetectorG1310AG1314AG1322A第四章Agilent1100系统硬件概观Plus,ManualInjector50优化流路减小死体积流路自上而下堆积配置手持控制器检测器柱温箱自动进样器泵脱气机

溶剂柜51每个部分有独立的电源1100各部件均由CAN线连接检测器与化学工作站之间用LAN线连接

(或用HP-IB连接)脱气机与泵之间用遥控线连接(错误信号输出)BCD板用于外设和读取样品瓶数量连线HP-IB外设(x4)52指示灯状态Off(poweroff)Ready(poweron)NotReadyRunErrorResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示BlackBlackYellowGreenRedYellowblinking6种LED仪器状态：53Fittings0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.LC/GCMagazine6:788(1988)TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.54HPCapillaryColorCoding

Blue0.25mmColor

i.d.Red0.12mmGreen0.17mm55第五章Agilent1100泵和在线脱气机Agilent1100系列泵,G1310A,G1311A,G1312A,G1354A和Agilent1100系列在线真空脱气装置(G1322A)56Agilent1100系列真空脱气机建议...低压混合进行梯度洗脱，提高泵的可靠性能。提高泵在低流速下的操作性能用于需要脱氧的检测器性能/用途与He脱气相比，更方便，更节省费用。高性能脱气，避免了烦琐的操作，提高仪器稳定性。内部延迟体积小，便于快速进行溶剂切换。4通路系统，操作灵活。与1100其它组件堆积在一起，用遥控线连接，用于传输错误信号。57TheHP1100VacuumDegasser(G1322A)ABCD

Solvent

Pump58Agilent1100系列On-lineDegasser设计真空泵真空室电磁阀控制组件ABCD59在线真空脱气机工作原理1mlSolenoidvalve60HP1100SeriesOn-lineDegasser:InfluenceonDetectorBaselinenodegassingheliumdegassingHPon-linedegassingAbsorbency123456789Time(min)Solvent:methanol;UVsignal:210nm61溶解酵素分析

2425262728296050403020100mAUFirstanalysisLastanalysisafter30hours2425262728296050403020100mAULastanalysisafter30hoursFirstanalysisHeliumDegassingOn-lineVacuumDegassingAgilent1100在线真空脱气机对保留时间在现性的影响62低流速下Online-Degassing对保留时间和峰面积的影响Column ODSHypersil,5µmColumnDimension 2.1×100mmSample MixtureofCaffeine

Primidone,PhenacetinMobilePhase 15%Acetonitrile/WaterFlowRate 0.22ml/minTemperature 40ºCDetection 220/8nm;Ref450/80nm63Agilent1100系列单元泵－G1310A特征/用途流量范围宽，用途广泛：0.5~10ml/min双柱塞，可变冲程，以及阻尼器可以减小流量脉冲。改进的阀系统可以延长使用寿命，降低维修成本。容易维护和维修。直接与溶剂瓶，清洗阀和管路连接，便于快速启动。可以升级至四元泵。建议...常规质量控制分析简单混合物的分析用于体积排阻色谱半制备工作加真空脱气机,流量范围可扩展至：0.2-10ml/min64Agilent1100系列单元泵(G1310A)阻尼器3.主动阀1.单向阀瓶头组件溶剂瓶溶剂柜泵2.冲洗阀泵头65单元泵工作原理AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)DamperPurgevalveSealPistonBallScrewDriveMotorwithEncoderGearOutletBallValveActiveInletValve66泵头-单元/四元泵LockScrewPumpheadscrews67泵头结构图Holding/LockScrew(PEEK)1234567SealSeal:5062-851668阀－单元泵/四元泵OutletBallValvePurgeValve234567ActiveInletValve(commontoallexcept1050)Cartridge

8newstyle1oldstyleFritPTFEFrit:01018-2270769Agilent1100系列密封垫冲洗－SealWash(

可选)当流动相中盐浓度>0.01M时，使用Seal

Wash可以减小密封垫的磨损。对于Agilent1100系列泵为可选件。用10%异丙醇水溶液冲洗WasherSupportsealassemblySeal70带有SealWash的泵头结构图}12371Agilent1100系列四元泵－G1354A;

真空脱气机为标准配置!建议...使用2，4，8mm内径的柱子流量范围从0.2到10ml/min应用于研究和常规分析特征/优点四通路/低压混合能灵活地进行恒梯度或梯度洗脱。无需消耗昂贵的He而能进行高性能真空脱气。自动冲程调节，混合非常均匀，降低基线噪音。对于高盐流动相，可选择SealWash清洗密封垫。72Agilent1100系列四元泵－G1354A包括真空脱气机溶剂柜真空脱气机

G1322A四元泵

G1311A73四元泵工作原理AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)VacuumChamberMCGVAIVOBVDamperPurgeValveWastetoinjectiondevicefromsolventbottlesMCGV比例阀AIV 主动阀OBV 单向阀74Agilent1100系列二元泵－G1312A建议...使用4mm内径柱子流量范围从0.5到

5ml/min优点/特征高压混合，无需脱气。对于有强紫外吸收的流动相，使用静态混合器可以降低基线噪音。可以选择溶剂切换阀自动进行溶剂切换对于高盐流动相，可选择SealWash清洗Seal。增加真空脱气机,流量范围可扩展至0.05～5

ml/min推荐使用1，2，4mm内径的柱子。75二元泵工作原理DamperPurgevalveMixerABInletvalveOutletvalveWasteInletvalveOutletvalve76带有溶剂切换阀的二元泵ABMixerRestrictionCapillaryMixingCapillaryClampDamperSolventSelectionValveA1A2B1B277阀:二元泵OutletBallValve(uniquetothebinarypumpduetothepresenceofthesieve)PurgeValve(commontoall)SieveActiveInletValve(commontoallexcept1050)Cartridgenewstyleoldstyle78HP1100SeriesPumpingSystemsFlowRangesOverviewIsocraticpumpG1310AIsocraticpumpwithdegasserG1310AG1322AQuaternarypumpG1354ABinarypumpG1312ABinarypumpwithdegasserG1312AG1322A0.5-10ml/min0.05-5ml/min0.2-10ml/min0.5-5ml/min0.2-10ml/min价格/性能79系统延迟体积的比较泵不带混合器

带混合器

混合器自动进样器标准旁路柱温箱标准旁路1090 1050 1100四元泵 1100二元泵300-5001050-1250750V(loop)N/A4.1or8.20180-480600-900420300+V(inj)6.23or60800-1100n/an/a300+V(inj)6.23or60800-1100n/an/a327+V(inj)8150minRangeMaxRange304-5041058-1258189-489906-12061203-14061242-1442(单位：µL)80第六章Agilent1100自动进样器Precision

10255010081Agilent1100系列自动进样器推荐…

进样体积从0.1µL到1.8ml

最多可容纳100个样品瓶

自动样品前处理性能/优点

进样体积重复性高(典型<0.5%RSD)

进样动态范围宽连续冲洗流路并有洗针功能－降低样品残留所有驱动均采用电子驱动

可以容纳不同规格的样品瓶灵活的进样程序编制可以进行样品前处理（例如柱前衍生）

使用旁路可以降低延迟体积82Agilent1100系列自动进样器扩展进样范围选择推荐…

大体积进样

标准和带加热的自动进样器

新的或现有系统性能/优点

非常灵活的扩展动态范围

进样量准确

可以从现有系统升级83自动进样器管路连接FrompumpTocolumncompartment84Agilent1100系列自动进样器结构带机器手的传输臂样品盘计量泵样品管进样阀100x2ml样品盘15x6ml样品盘40x2ml样品盘85标准进样过程...Meteringdevice6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste准备位置调用样品瓶吸样品进样和运行位置860RSD(%)InjectionVol.(µl)1

3

5

7

910

2550100不同进样体积下的峰面积精度87Agilent1100系列自动进样器进样测试min05101520253035mAU020406080100#1#10#5#8Repetitive1µlinjectionsfrom10µlsample8810002000020406080100InjectionVolume(µL)AreaCountsCorrelation:0.999995Agilent1100系列自动进样器进样线性89Agilent1100系列自动进样器样品容量100x2mlvialsin1tray40x2mlvialsin1/2tray15x6mlvialsin1/2tray117x2mlvialswithexternaltrayMicrovialsforsmallvolumes进样量Standard: 0.1-100µlUpto1.8mlusingmultidrawoptionExpandedinjectionrange:0.1-900µl精度5-100µl typically<0.5%RSD1-5µl typically<1%RSD残留Withoutneedlewash typically<0.1%Withneedlewash typically<0.05%延迟体积Standard 300µl+injectionvolumeInbypassmode 6.2µl90洗针把样品残留降低到最小限度多次吸液

用于进样量大于100µL

旁路

减小延迟体积

进样程序非常灵活地执行进样系列Agilent1100系列自动进样器特殊功能91ImpactofNeedleWashonCarry-OverwithCappedandUncappedWashVialsCarry-over(%)Injectionvolume(µL)0.10.51500.050.10.515PrimidoneCarry-over(%)Injectionvolume(µL)0.10.51500.050.10.515PhenacetineWithoutneedlewashWithneedlewash,washvialuncappedWithneedlewash,washvialcapped92使用洗针程序可以降低样品残留min510mAU04Sample:0.01M咖啡因,普里米酮,非那西汀Injectionvolume:1µL

Blankinjection(1µL)withneedlewashBlankinjection(1µL)withoutneedlewash样品残留峰93lInjectionrange:0.1-900µLlUpto1800µLwithMulti-drawkit

900µLmeteringdeviceSamplingunitTowasteFrompumpTocolumnloopextensionformulti-draw900µLneedle900µlloopextension

带有多次吸样装置的自动进样器94Agilent1100自动进样器进样程序用于样品衍生或样品前处理进样量从0.5到5µlMeteringdeviceSamplingunitTowasteFrompumpTocolumnSampleReagent使用多次吸样可以扩展进样量95Agilent1100系列带加热的自动进样器推荐...

对于热依赖性的样品使用

(生化)制药行业

临床实验室性能/优点

半导体控制，可以非常方便、准确的升温和降温

控温范围:4-40℃(室温为25℃)

可容纳100个样品瓶(冷却)可更换样品盘96自动进样器加热原理室温空气入口热空气出口加热/冷却部件热交换器半导体部件97维护情况:

更换针更换针座更换机器臂对机器臂定位分步命令自动进样器测试功能98第七章Agilent1100柱温箱TCC99柱温箱的特征及优点推荐...温度控制范围：

低于室温10℃～80℃保留时间的再现性需要稳定

的温度如果需要在高于或低于室温

进行分离操作时，需要使用

柱温箱特征/优点大空间，可以容纳三根30cm长色谱柱更换柱子非常方便降温非常方便安装柱识别可以记录进样次数使用切换阀可以进行柱切换(可选)两个单独的加热区可以分别控制温度可以进行程序升温内部死体积小(左侧3µL，右侧6µL)100HP1100柱恒温与普通柱温箱比较

Column:250x1mmVydacTP218;Eluent:Water/Acetonitrile+TFA

RTfluctuationsofpeptidepeakoverasequenceof10consecutivetrypticmyoglobinmaps.70.4070.5070.6070.7070.8070.9071.0071.1071.2071.3012345678910HoursretentiontimedaynightdayconventionalcolumnovenHP1100columnthermostatwithPeltierheatingandcooling

101室温下的柱温控制性能Sample PNAEPAStandardColumn 250

x2.1mmPAH,5µmColumnTemp18℃Flowrate 0.4ml/minMobilePhaseA:waterB:acetonitrileGradient 50to95%Bin22.5min123456min510152025mAU051015202530789101112131415Environmental

ApplicationPNAs/PAHsimproveatsub-ambient!102PNAs分析条件优化－柱温Sample PNAEPAStandardColum 250

x2.1mmPAHMobilephase Water/Acetonitrile50:50Flowrate 0.4ml/minGradient from50to95%Bin22.5minColumnTemp: 18,25and30°Cmin510152025mAU0102030213546978101112141315161718°C25°C30°CColumnTemp103柱温箱前视图

....FromAutosamplerToFlowCellInletCapillary104柱识别系统Productnumber79916OD-552Serialnumber951001Batchnumber1675Geometry[mm]100x2.1StationaryphaseODSHypersilParticlesize10µmNumberofinjections999Maximumpressureallowed[bar]400Maximumtemperaturerecommended[鳦]70MaximumpHrecommended12

柱识别必须安装在距离识别天线2mm范围之内，且柱识别上HP的图标朝上。105柱切换阀(可选)(Rheodyne7750)ElectronicActuatorCeramicstatorVespelrotorseal(6-port)106第八章Agilent1100

检测器VWD/DAD107Agilent1100VWD检测器推荐…产品开发及质量控制应用需要高灵敏度检测器性能/优点...从190－600nm波长范围，噪音小，基线稳定(±0.75x10-5AU)可变波长检测，可以对不同物质的检测获取最大灵敏度。更换氘灯及清洗检测池非常方便内置钬玻璃可以非常快速方便地进行波长校准。根据不同需要选择不同的流动池。108FrontElements-VWDlamp流动池的后压非常重要，使用正确的出口连接管。109光学单元-VWD光路氘灯光源透镜滤光片（钬玻璃/遮光）入射狭缝反射镜1＃反射镜2＃光栅分光器参比光电二极管数模转换板样品光电二极管数模转换板流通池110VWD检测器灵敏度min012345AU00.000050.00010.000150.00020.000250.0003Signal: 0.23mAUBaselinenoise:<1x10-5AUSample AnthracenestandardColumn 100x2.1mmODSMobilephase Water/Acetonitrile30:70Flowrate 0.4ml/min10pgAnthracene111多组份分析min024681012141618mAU050010001500200025003000254nm370nm204nmGinkoBilobaextractQuercetinIsohamnetinKaempferolMonitoringimpuritiesat204,254nmSensitivequantitationofactivecompoundsat370nm112选择性和灵敏度min02468101214mAU020040060080010001200204nm254nm368nmHydroxybenzotriazoleTrimethoprimFurazolidoneChloramphenicolNalidixicAcidQuantitationofantibiotics113VWD流通池StandardandMicroHighPressure114高性能的Agilent1100DAD115Agilent1100二极管阵列检测器推荐...

研究及方法开发多波长检测峰纯度检查峰确认（定性）性能/优点...灵敏度高(±1x10-5AU)。

两个灯，波长检测范围宽（190－950nm）。1024个二极管和1nm狭缝。可变狭缝。根据不同需要选择流动池。可以进行自动峰检索。利用紫外谱图进行峰确认116FrontElements-DAD进口管可以直接连接到色谱柱出口氘灯流通池室钨灯117DAD光路钨灯耦合透镜氘灯光源透镜(消色差透镜)氧化钬滤光片支撑透镜Flowcell光谱透镜光栅阵列狭缝118

二极管阵列检测器与传统紫外扫描检测器比较ConventionalScanningDetectorDiode-arrayDetectorSourceEntranceslitConcavegratingDiode-arraydetectorFlowcellSourceEntranceslitExitslitFlowcellDetectorConcavegrating119DAD流通池Micro-HighPressureStd.andSemi-Micro120可编程光路狭缝--超微机械设计MotorSlit121可编程光路狭缝ReplacesthreeconventionalslitsExtendsslitwidthto1and16nmForfastoptimizationofresolution,sensitivityandlinearityDocumentsslitwidthforGLPtraceabilityHP1050DADHP1100Series

threefixedslitsfor2,4and8nmoneprogrammableslitfor1,2,4,8and16nm122选择不同狭缝--灵敏度与分辨率nm23024025026027028000.7mAU

1nm

2nm

4nm8nm1nmslit2nmslit<1x10-5AUnoise123HPLCdetection190-950nm宽波长范围－有利定性分析PatentblueBrilliantblueAmaranthTartrazine300400500600700800900

Otherdiode-arraydetectorsHP1100SeriesWavelength(nm)AbsorbanceNow190-950nm124定性分析--峰纯度检验pureimpure8.28.4Time(min)200400Wavelength(nm)PurityMatch764200400Wavelength(nm)PurityMatch999AbsorbanceAbsorbance125定性分析--探索三维立体影像

SpectralAcquisitionModesAllspectraEvery2ndspectrumAllinpeakApex+Slopes+BaselinesApex+BaselinesNoneAbsorbanceTimeWavelength126DAD测试功能及诊断DAD自检暗电流测试灯强度测试钬玻璃测试流通池测试滤光片测试波长校正模拟信号输出测试127第九章熟悉化学工作站及其操作系统本章内容：WindowsNT及Windows2000概述如何创建快捷键如何维护计算机系统128Windows界面：通过此键进入磁盘及文件目录。垃圾斗，用于盛放被删除的子目录及文件Start键用于开启某个应用程序任务栏129Windows菜单用鼠标单击Start键，所有菜单均显示出来。Program:包括WindowsExplorer,Word Pad,Paint,HPChemStationDocument:显示最近使用过的15个文件。Settings:包括ControlPanel,Printers, TaskbarShutdown:用于关闭计算机。130Windows的一些有用的功能：把常用执行程序放在Start菜单的第一级。用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开WindowsStartMenu窗口，用鼠单击Program图标，打开Windows/StartMenu/Program窗口，用鼠标右键拖拽所需应用程序图标到WindowsStartMenu。当再打开Start菜单时，所选择的应用程序显示在Program菜单之上。WindowsStartMenu窗口Windows/Start/Program窗口131在Desktop创建快捷键。用鼠标右键单击Start键，选择Open命令，打开WindowsStartMenu窗口，用鼠单击Program图标，打开Windows/StartMenu/Program窗口，用鼠标右键拖拽所需应用程序图标到Desktop上。此步骤完成后，所需应用程序图标显示在Desktop上。改变Desktop的属性：用鼠标右键单击desktop的任意位置，在出现窗口选择Properties,在DisplayProperties窗口选择设置项目。132计算机操作系统的维护经常性删除临时文件子目录中及垃圾斗中的文件。使用ScanDisk或Checkdisk检查盘上的错误。消除硬盘上的碎片。使用杀病毒软件。创建EmergencyRepairdisk(WindowsNT)。——运行rdisk。如果计算机被非法关机，临时文件子目录中会留下许多临时文件，如果不及时清除，这些文件会影响系统的性能。所以，这些文件应定期删除。Windows中有许多工具可以帮助你对操作系统进行维护。ScanDisk和DiskDefragmentor是非常重要的两个工具。ScanDisk可以扫描硬盘的坏区，然后或者对坏区进行修复，或者锁定坏区。Defragmentor通过去除硬盘上的碎片来提高系统的操作性能。133DemoC:ExcelHpchem12DataLab1.dMethodsSequenceTempVerifyBackupCoreDriversGcHelpenuLanguageLcRepstyleSpeclibsSysWindows化学工作站软件目录结构所有数据文件均存放在Data子目录下，扩展名为.D，每个数据文件为Data子目录下一单独子目录，里面包括各种扩展名的文件：.REG－二进制文件.LOG－logbook文件.M－方法文件（存贮数据时选择方法存贮在数据文件中）工作站软件及文件的维护.CH－色谱图文件.UV－紫外谱图文件.MAC－样品信息文件134所有方法文件均存贮在Method子目录下，扩展名为.M。所有序列文件均存贮在Sequence子目录下，扩展名为.S。定期拷贝有用的文件。在工作站中有用的文件是指：1.数据文件(xxx.D)。2.方法文件(xxx.M)。3.序列文件(xxx.S)。定期拷贝这些文件后，清除工作站子目录下的这些文件，以节省硬盘空间，使运算速度正常。禁止使用盗版软件，建议在运行工作站的同时，不要使用中文操作平台，防止与工作站发生冲突。135It’sLabTimeNow!136启动化学工作站配置仪器启动化学工作站任务安排137InstrumentOn-lineInstrumentoff-line

ONON

ONOFF联机操作，进行仪器控制操作脱机操作，进行数据分析138化学工作站界面TopToolBarStatusToolBar系统视图OnlineSignal样品视图139ViewsMethodandRunControlDataAnalysisReportLayoutVerification(OQ/PV)DiagnosisFullmenuorshortmenu化学工作站Views菜单140在化学工作站中有5个功能界面：MethodandRunControlDataAnalysisReportLayoutVerification(OQ/PV)DiagnosisMethodandRunControl－仪器控制;方法编辑、运行;

序列编辑、运行。DataAnalysis－数据分析：包括谱图优化，积分优化，

校正表建立，报告格式选择等。ReportLayout－用户编辑个性化的报告格式。Verification(OQ/PV)－仪器认证。Diagnosis－利用工作站诊断仪器硬件。141ChangeViews142方法中所包含的内容。如何编辑采集参数。如何显示Logbook及实时显示检测信号。第十章方法编辑、保存本章内容：143方法的组成：方法信息(Methodinformation)仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition)数据分析参数(DataAnalysis)运行时间表(RunTimeChecklist)方法：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要的所有参数：数据采集参数、数据分析参数及命令或宏指令。方法的文件名为：xxx.m。什么是方法?144用户图形界面（GUI）单击图标打开菜单单击此图标进行控制145Instrument菜单-改变每个部件的参数146使用EditEntireMethod

编辑一个完整的方法编辑一个方法147选择所要编辑的内容148方法信息(MethodInformation)149包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(StopTime)，后运行时间(Post

Time)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(PressureLimits)等泵的操作参数150样品盘容量100x2mlvialsin1tray40x2mlvialsin1/2tray15x6mlvialsin1/2trayMicrovialswithsleeves进样体积0.1-100ul－标准进样最大1800ul－使用多次进样装置最大900ul进样，不使用多次进样装置，但需要扩展进样装置自动进样器参数设置参数包括：进样体积(Injection)，洗针(NeedleWash)

，程序进样(InjectionProgram)优化进样(Optimization)，取样速度(DrawSpeed)，注射样品速度(EjectSpeed)，取样位置(Drawposition)，时间设置(Time)等。151洗针

降低样品残留多次吸样

用于进样体积大于100μL

旁路

标准进样系统的整个延迟体积为300μL,切换到旁路后延迟体积降到6.2μL。进样程序根据需要编制进样程序最大动态进样范围:0.1µl-1.8ml泵色谱柱计量泵废液4通路旋转密封阀自动进样器特殊功能152进样体积从0.5至5µl。用于样品衍生及其前处理。计量泵取样系统废液泵柱子样品反应物进样程序153控温范围：低于室温10℃～80℃两个单独的加热区

安装切换阀可以进行柱切换

可以容纳30cm长色谱柱

安装柱识别可以自动记录进样次数柱温箱154可以选择存储5个信号信号波长范围191-949nm可变狭缝：1,2,4,8,16nm可以时间编程可以保存数张或所有光谱DAD参数设置155选择在方法中要执行的项目运行时间表(RunTimeChecklist)156从Method菜单选择SaveMethod/SaveMethodas或从存贮方法工具图标存贮方法。存贮方法157选择监控信号从View菜单,选择OnlineSignals,单击Change，在EditSignalPlot窗口选择要监控的信号。158信号显示159要分析单个样品,从RunControl菜单选择SampleInfo...,输入样品信息。样品信息包括：操作者姓名(OperatorName)，存盘数据文件(DataFile)，样品参数(SampleParameters)。然后运行方法(RunMethod)。运行方法160补充说明1.查看Logbook:

从View菜单选择Logbook，单击CurrentLogbook显示当前Logbook内容。161InstrumentMorePumpAuxiliary...2.泵的辅助功能从泵的辅助功能可以设置最大升流速率，冲程大小，压缩因子补偿。162与检测器的控制类似检测器:灯开/关(钨灯/氘灯)自动开灯模拟信号输出范围泵的控制1633.自动进样器扩展功能164自动进样器设置165第十一章谱图优化本章内容：谱图调用谱图优化谱图加标注166调用数据文件在DataAnalysis界面，File菜单下选择LoadSignal。167使用SignalOptions...

功能来优化色谱图的显示谱图优化在DataAnalysis界面下，Graphics菜单下选择SignalOptions...168谱图优化的工具谱图优化图标谱图显示方式化合物名称保留时间显示标题显示轴单独/重叠显示基线打印窗口色谱图控制图标移动标注文字标注设置标注格式线形标注删除标注WMF图标注拷贝169选择:字体和字型字体大小字体颜色、旋转角度等在色谱图上加标注170AddAnnotationDrawLineinWindowMoveAnnotationDeleteAnnotation加标注工具谱图处理工具谱图处理工具171如何建立积分事件如何使用信号选项框如何使用积分时间表自动积分手动积分本章内容：第十二章积分优化172增强积分方式可以提供:当基线波动时，基线的定位。使用初始峰高参数去除噪音峰。控制积分开始和结束的标识。在噪音中定位信号峰。使用二阶导数确定肩峰。增强积分方式173您也可以通过以下方式进行积分:从Integration菜单选择

Integrate

或AutoIntegrate。选择积分工具。运行一个包括数据分析的完整方法。调用信号执行积分174自动积分检查开始和结束区域，确定噪音。赋予初始SlopeSensitivity和HeightReject值.对第一次积分赋予一个临时峰宽值。设置AreaReject为0。执行测试性积分，有可能重复几次。基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。优化SlopeSensitivity和HeightReject。从初始的峰宽和噪音水平计算AreaReject。175积分事件初始值信号选项框高级基线选择176高级基线177添加积分事件功能删除积分事件功能积分事件表178积分任务对当前色谱图积分自动积分积分事件设置BaselineNow设置BaselineHold设置拖尾切线撇去积分设置斜率设置最小峰面积设置固定峰宽设置肩峰检测积分工具栏179存贮积分事件到方法作为方法的一部分存贮积分参数保存方法180选择积分工具对目前色谱图进行积分自动积分积分事件手动积分画基线手动积分负峰手动积分切线撇去手动积分裂分峰手动积分去除峰手动积分工具181DrawBaselineNegativePeak(s)TangentSkimSplitpeaksDeletePeak(s)AllValleys手动积分182峰类型符号峰起止点符号

B基线 P基线渗透

V峰谷点 H水平基线

M手动积分 T切线撇去其它符号

+参考峰 I内标峰

A+面积加和峰 N负峰

S溶剂峰 警示符号

+高于含量上限 －低于含量下限183基线符号

BBBBB=基线BV