温敏性壳聚糖

温敏性壳聚糖 甘油磷酸二钠盐水凝胶的初步研究【摘要】目的探讨温敏性壳聚糖 甘油磷酸二钠盐水凝胶应用于软骨再生的可行性。方法制备壳聚糖/β-甘油磷酸二钠盐水凝胶。将体外培养的小鼠软骨细胞与水凝胶共培养，采用荧光倒置显微镜观察细胞在三维材料上生长分布的状态。选取共培养1、2周的细胞水凝胶复合物，采用 半定量的方法检测Ⅱ型胶原和聚合素两种细胞外基质在mRNA转录水平上的差异。结果制备的水凝胶具备生理性的pH值，在常温下为液态，体温状态下为胶冻状。荧光倒置显微镜显示共培养2周时软骨细胞呈球状生长。细胞/2具有温度敏感性，是一种生物相容性的温固化凝胶。【关键词】壳聚糖； 甘油磷酸二钠盐；温度敏感材料

甘油磷酸二钠盐水凝胶ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatethefeasibilityofnovelthermallysensitivechitosan/β-glycerophosphate(Ch/GP)hydrogelforchondrocytesregeneration.MethodsCh/GPhydrogelswereprepared.Fluorescentinvertedmicroscopy(FIM)wasusedtoshowthecellularproliferationandⅡandaggrecandetectedwitbelowroomtemperatureforencapsulatinglivingcells;theyformmonolithicgelsatbodytemperature.FIMshowsthatat2weeks,thecellsaregenerallyround.Inaddition,wefoundthatthenormalizedratioofcollagentypeⅡandaggrecan significantlyincreasedat2weeks,ascomparedtothatat1week(P<0.05).ConclusionThisstudyreportsforthefirsttimetheuseofCh/GPaqueoussolutionsasgellingsystems,suggestingthediscoveryofaprototypeforanewfamilyofthermosettinggelshighlycompatiblewithbiologicalcompounds.KEYWORDS：节滑液,,亦无神经支配,损伤后其自身修复能力较差,,它能够吸收大量的水分,联作用而不会溶解于水中,只能溶涨且保持一定的形状[1]水凝胶因其在组织再生[2-4][5-8]最近我们发现用具有相反电荷的多羟基盐例如 甘油磷酸二钠盐（ ，GP)中和后的壳聚糖（chitosan，Ch）具备温度敏感性。这种溶液能够在室温或者低于室温的状态下较长时间的保持37pH6.8～7.2。本试验的目Ch/GP温固化系统的物理特征，为软骨再生的细胞治疗的可行性提供理论依据。材料与方法材料壳聚糖（高分子量，脱乙酰>95％）， 甘油磷酸二钠盐公司），培养液和胎牛血清（Gibico公司）。其他试剂均为分析级。chitosan/GP复合凝胶200mg10ml0.1M的乙酸溶液中，边添加边用磁力搅拌器搅拌，至少1h。溶解完20minGP粉剂溶解于去离子水（45％，w/w）15min后，将冷GPGP的终浓度分别为1.8％和7.3％（w/v）。软骨细胞分离培养、包裹及观察v2.2 软骨细胞在Ch/CMC凝胶中的三维培养细胞在凝胶中生长、分布情况如图1所示。细胞定植在凝胶中，视角聚集到凝胶的不同层面可见软骨细胞呈三维较均匀分布。培养2周（图1）的细胞－水凝胶复合物用AO染色，荧光倒置显微镜下观察可见软骨细胞仍保持球形，视角聚集到凝胶的不同层面可见软骨细胞呈三维较均匀分布。3 讨论比，可注射性的生物材料具有可以与细胞均匀混合，与修复组织之间嵌合连接好，塑型容易的特点，且能通过关节镜操作，治疗简单、安全、有效，适应现代微创手术理念。丙烯、聚氧化丙烯等。与上述凝胶支架相比，壳聚糖不仅具有良好的生物相容性、降解性，还具有抗菌、止血、止痛，预防膝关节或肌腱粘连，延缓创伤性关节软骨退变等作用。其理化性质和临床应用与透明质mRNA表达，产生Ⅱ型胶原、Ⅲ型胶原和蛋白多糖。壳聚糖的降解产物可作为关节液中的硫酸角质素、硫酸软骨素及透明质酸的合成原料，是关节软骨的重要营养物质壳聚糖只能溶解于酸性溶液， 甘油磷酸二钠盐的加入将壳聚糖溶液改造成温固化的溶液。其凝固温度与壳聚糖分子量无关，与脱乙酰度成负相关。因此，可通过选择不同脱乙酰度的壳聚糖来控制凝胶的凝固温度和时间。凝胶复合物还可以作为细胞因子或药物大分子的缓释体系，通过调整其体内降解速度，制成可控制释放大分子速度的载体物质。体外培养软骨细胞随其传代而表型整个发生改变，正常的Ⅱ、Ⅳ型胶原合成减少，Ⅰ、Ⅲ型胶原合成pHCh/GP2我们的试验初步证实脱乙酰度90％以上的壳聚糖稀盐酸溶液和 甘油磷酸二钠盐水溶液混合后，pH37℃，15软骨的功能及力学特性还有待进一步的研究。【参考文献】RatnerBD,HoffmanAS.HydrogelsforMedicalandRelatedApplications[M].ACS,Washington,1976:1MatsudaT,MagoshiT.Preparationofvinylatedpolysaccharidesandphotofabricationoftubularscaffoldsaspotentialuseintissueengineering[J].Biomacromolecules,2002,3:942hydrogelswithneuraltissue:effectsofstructureandpolargroups[J].Biomaterials,1991,12:197BellamkondaR,RanieriJP,BoucheN,eta1.Hcells[J].JBiomedMaterRes,1995,29:663ZielinskiBA,AebischerP.Chitosanasamatrixformammaliancellencapsulation[J].Biomaterials,1994,15:1049EmerichDF,WinnSR,ChristensonL,eta1.AnovelapproachtoneuraltransplantationinParkinson'scoextrusionwithanorganicpolymersolution[J].Biomaterials,1991,12:50n，e，n,t.sfnnte.,20：1937吴海ft，[J]军医学杂志，1995，20(6)：4054BALB/c小鼠，重量约20～30g胶原酶消2h10100U/ml100μg/mlDMEM37℃的细胞培养箱中培养。当原代培养成功细胞生长增殖形成单层细胞后，进行传代培养。在冰浴的环境下，4～5Ch/GP106个/ml63730min10％的胎牛血清的DMEM继续培养每312周的细胞/水凝胶复合物进行荧光倒置显微镜观察。采用免疫荧光染色方法处理标本，即刻观察并照相。逆转录聚合酶链反应（