MTT比色试验、克隆形成试验_第1页
MTT比色试验、克隆形成试验_第2页
MTT比色试验、克隆形成试验_第3页
MTT比色试验、克隆形成试验_第4页
MTT比色试验、克隆形成试验_第5页
已阅读5页，还剩15页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

常用测定细胞增殖能力的实验方法：MTT比色试验、克隆形成试验常用测定细胞增殖能力的实验方法活细胞计数法：费时，有一定主观性MTT比色法：简便，大样本、灵敏度较高，重复性好结晶紫染色法：与MTT法类似，但步骤多克隆形成法：反映干细胞增殖能力，周期长流式细胞术：细胞周期分布，成本高同位素掺入法：3H-TdR,125I-UdR掺入DNA，反映S期细胞活性，精度最高，但有放射性ATP生物发光法：灵敏度高，与MTT法类似MTT比色试验原理MTT比色试验步骤接种:细胞密度103~105/ml,体积100~200l培养:37℃、5％CO2、饱和湿度，培养24h施加干预因素：培养适当时间（1-5d）呈色:终止培养前4～6h，每孔加5mg/mlMTT20l，继续培养溶解:每孔加DMSO150l，振荡5min比色:492nm波长，测定光吸收值（A）绘制曲线：以细胞数或作用因素（如药物浓度）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制曲线MTTASSAYCellsuspension105/ml3.2×104/ml104/ml0.32ml0.1mlMedium0.68ml0.1ml0.9ml0.9ml3.2×103/ml3.2×105/ml0.9ml0.1mlMTTASSAYMTTASSAY

103

3.2×1033.2×104

104105

MTT比色试验注意事项培养板：贴壁型细胞－平底培养板悬浮型细胞－U型培养板细胞密度：不同细胞须选择适当的密度MTT溶液：4℃避光保存，出现结晶时弃去；部分细胞需摸索MTT作用最佳浓度和时间残留血清和培养液会影响吸光值注意控制吸光值与细胞数之间线性范围，一般为102～105MTT比色试验应用举例药物敏感性试验生物材料细胞毒测定放射效应测定冷冻杀伤效应测定高温杀伤效应测定激光效应测定磁场效应测定补体依赖性细胞毒测定克隆形成试验概念：克隆指单个细胞在体外持续分裂繁殖6代以上，其后代所组成的细胞群。光镜下，大于50个细胞，计数为1个克隆。方法：1.平皿克隆形成试验:适用于贴壁型细胞，如正常细胞或肿瘤细胞；控制细胞迁移2.软琼脂克隆形成试验:适用于肿瘤细胞、转化细胞和悬浮生长细胞；无细胞迁移；底层为0.5%琼脂，上层为0.3%琼脂(含细胞)。用途：多用于药物、放射敏感性试验。平皿克隆形成试验软琼脂克隆形成试验MTT实验实习2人为1组，每块96孔板共4人操作预先接种细胞数:103、3.2×103、104、3.2×104、105/0.2ml/孔预先常规培养预先加入MTT0.02ml,孵育6h吸出上清液，加入DMSO0.2ml,振荡5`490nm比色，手工记录吸光值

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论