《注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法研究开题报告（含提纲）》

PAGE注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法研究1研究的背景及意义注射用炎琥宁为新一代的纯天然抗感染药。有清热解毒及抗病毒作用,主要用于病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染。本品系植物穿心莲提取物―穿心莲内酯经酯化﹑脱水、成盐精制而成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐,与穿琥宁在体内活性代谢物为同一物质(穿琥宁为穿心莲内酯半酯单钾盐)。能抑制早期毛细血管通透性增高与炎性渗出和水肿,能特异性地兴奋垂体一肾上腺皮质功能,促进ACTH释放,增加垂体前叶中ACTH的生物合成;体外具有灭活腺病毒﹑流感病毒、呼吸道病毒等多种病毒的作用。开发注射用炎琥宁具有充分的临床、文献和动物试验依据,本品有着良好的安全性和稳定性,可增强临床应用中的抗病毒﹑抗菌双重疗效,增强机体免疫力、解热抗毒消炎,无西药抗生素的耐药性等特点，不增加不良反应,应用前景可观。注射用炎琥宁批量生产后,必须抽样检测细菌内毒素,传统检测方法是注射炎琥宁给健康家兔,观察家兔的体温变化情况，如果体温升高即可判定次批次的炎琥宁含有细菌内毒素,产品不合格。但是这种方法繁琐﹑费时,也不能直接测定内毒素的含量,只是一个定性过程。因此，建立准确定量﹑快捷,减少人为和动物等影响因素的新方法十分必要。本试验根据药厂的需求,尝试建立检测注射用炎琥宁细菌内毒素的新方法。2研究方法（1）鲨试剂灵敏度复核按《中国药典》2005年版二部“鲨试剂灵敏度复核试验”进行试验。根据鲨试剂灵敏度的标示值（λ）,将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ4个浓度的内毒素标准溶液，复溶后的0.1mL-1支规格的鲨试剂原安瓻18支，其中16管分别加入0.1mL不同浓度的内毒素标准溶液,每一个内毒素浓度平行做4管;另外2管加入0.1mL细菌内毒素检查用水作为阴性对照。（2）细菌内毒素限值(L)的确定按公式L＝K/M确定,K为按规定的给药途径下试验动物每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量;M为每公斤体重每小时最大剂量。（3）干扰试验有效浓度的计算根据公式C=λ/L计算。入药品检验的鲨试剂灵敏度,L为限值。（4）干扰试验预试验取样品1瓶,将细菌内毒素检查用水溶解为20mg"mL-1的溶液,再作15、30、60、120、240倍稀释,同时每一稀释度下均制备含有2入浓度细菌内毒素工作标准品的样品溶液。按《中国药典》2005年版二部的干扰试验方法进行试验。从预试结果可知，注射用炎琥宁在0.33mg.mL-1时有可能排除干扰,以细菌内毒素检查用水及浓度为0.33mg.mL-1的样品稀释液分别将细菌内毒素工作标准品配成浓度0.5、0.25、0.125、0.0625EU·mL-1的溶液(分别称S和T系列),采用两个厂家的鲨试剂测定并比较同一批细菌内毒素工作标准品在两个溶液中的效价(Es及Et),同时分别以细菌内毒素检查用水和样品0.33mg.mL-1溶液作阴性对照。结果按公式:Es=lg1(ΣXs/4)和Et=lg-1(ΣXt/4)计算，其中Xs和Xt分别为S和T系列各反应终点细菌内毒素浓度的对数值。3论文提纲（研究路径/论文（设计）框架）1材料与方法1.1试验材料1.2试验方法1.2.1鲨试剂灵敏度复核1.2.2细菌内毒素限值(L)的确定1.2.3干扰试验有效浓度的计算1.2.4干扰试验预试验2结果与分析2.1鲨试剂灵敏度复核2.2细菌内毒素限值(L)的确定2.3干扰试验有效浓度的计算2.4干扰试验预试验2.5干扰试验2.6细菌内毒素检查方法验证3结论4论文写作计划（进度安排）申请论文2021-11-30——2021-12-13下达任务书2021-12-23——2022-01-04开题报告2022-01-05——2022-01-19初稿提交2022-01-20——2022-02-24终稿提交2022-02-25——2022-03-31答辩申请2022-04-01——2022-04-10论文评阅2022-03-315主要参考文献[1]陈玲,伍伦玲,梁岚,李国春.注射用炎琥宁含量检查方法分析[J].临床医药文献电子杂志,2018,5(55):171.DOI:10.16281/ki.jocml.2018.55.148.[2]高钟丽.炎琥宁注射液不良反应的Meta分析[D].郑州大学,2017.[3]王瑜.炎琥宁、普米克、可必特联合治疗小婴儿毛细支气管炎（痰热闭肺型）的临床疗效观察[D].黑龙江中医药大学,2016.[4]陈静雯,陈晓琴,赵翠琴,方剑儒.注射用炎琥宁的细菌内毒素检查[J].生物技术世界,2012,10(06):17+19.[5]申颖,申和平.注射用炎琥宁有关物质检查方法探讨[J].临床合理用药杂志,2010,3(22):58.DOI:10.15887/ki.13-1389/r.201