动物蛋白质的胃蛋白酶消化率(体外消化)

动物蛋白质的胃蛋白酶消化率〔体外消化〕一、适用范围：二、原理：用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约16蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。三、设备：1、恒温水浴振荡器：45±2℃。2、测定粗蛋白质的全套设备。3、过滤装置。、索氏脂肪浸提器。四、试剂：除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂：10.26.1ml1L0.2%胃蛋白酶溶液。21：3000342—45℃，2g,轻轻地搅动，使其溶解0.2%胃蛋白酶溶液。五、测定步骤：11g脱脂试样，放入300ml〔42—45℃〕0.2150ml，盖好塞子，在45℃16化管中，依据测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。率。六、测定结果计算与分析：1、计算：A-B动物蛋白质胃蛋白酶消化率〔%〕= ×100A式中：A—试样中粗蛋白质的含量〔%。B—试样中的不消化物粗蛋白质的含量〔%。2、分析：合格的鱼粉，其粗蛋白质的胃蛋白酶消化率应不小于85%；羽毛粉应在75%以上。植物油脂检验不皂化物测定法GB 5535-85本标准适用于商品植物油不皂化物的测定。油脂中不皂化物即油脂皂化时，与碱不起作用的，不溶于水的物质，包括留醇，脂溶性维生素的色素等。一、仪器和用具：锥形瓶：250ml冷凝管恒温水浴锅电炉分液漏斗：250ml量筒：50ml索氏抽提器烧杯、等二、试剂：1.0N氢氧化钾乙醇溶液0.5N氢氧化钾水溶液乙醇、乙醚(2：1)三、操作方法：5g〔W〕1.0NKOH50ml，连接30min，煮到溶液清亮透亮为止。用50ml蒸馏水将50ml1min后，静止分层。将下层皂化液放入其次只分液漏斗中，每次用50ml乙醚提取两次。合并20ml20ml猛烈振摇洗涤两次。次。最终用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。1h，冷却称3030ml0.02N氢氧化钾滴定至粉红色。四、结果计算：油脂中不皂化物含量按以下公式计算：不皂化物〔%〕100(W1W028VN)式中：W1——残留物重量，gW——试样重量，gV——滴定所消耗的氢氧化钾溶液体积，mlN——氢氧化钾溶液的当量浓度0.28——每毫克当量的油酸重量，g数点后第一位。过氧化值的测定一、适用范围：二、原理：油脂氧化过程中，产生的过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘；以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。三、试剂：114g10ml解，冷却后贮于棕色瓶中。现用现配。240ml60ml3、0.02mol/L5g〔NaSO·5HO〕223 2〔或3g无水硫代硫酸钠1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却。放置两周后过滤备用。4、1%0.5g，50ml四、测定步骤：250ml30ml1.00ml75ml1ml终点。同时作空白试验。五、测定结果的计算与分析：1、计算：X=[〔V-V0〕×N×0.1269]/m式中：X—样品的过氧化值，%。V—样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。ml。0N—硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度，mol/L。2、分析：0.15%。附：0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液的标定1、标定：0.15g120325ml2g20ml20%10min加150m水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时加 3ml淀粉指示液(5g/L)，连续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。同时作空白试验。2、计算:C= m(V1V0)0.04903式中：C—硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度，mol/L。m—重铬酸钾之质量，g。Vml。1Vml。01.00mlC=1.0mol/L】相当的以克表示的重铬酸钾的质量。一、原理：

挥发性盐基氮的测定(VBN)〔半微量定氮法〕蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。二、试剂：氧化镁混悬液〔10g/1.0g100ml硼酸吸取液〔20g/L〕盐酸[c〔HCl〕=0.010mol/L]或硫酸[c〔1/2HSO〕=0.010mol/L]的标准滴2 4定溶液。甲基红—乙醇指示剂〔2g/L〕次甲基蓝指示剂〔1g/L〕临时将上述两种指示液等量混合为混合指示剂。三、仪器：半微量定氮器0.01ml四、分析步骤：试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀，称取约10.0g，置于锥100ml30min后过滤,滤液帜置冰箱备用。10ml5滴~6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝5.0ml上述试样滤液于蒸5ml氧化镁混悬液(10g/L)，快速盖塞，并加水以防漏气，通〔0.010mol/L〕或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。五、计算结果：试样中挥发性盐基氮的含量按式⑴进展计算。12XV Vc12

100m5/100式中：V1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升〔ml〕V2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升〔ml〕m——试样质量，单位为克〔g〕六、周密度：10%。三甲胺的测定一、原理：10.03化胆碱的含量。二、仪器与试剂：同粗蛋白质的测定。三、测定步骤：10.45gN。总21g10次左右，取出滤纸及残留物烘干，以凯氏定氮法测定含氮量，即为载体含氮量N133g100ml，0.55ml进展蒸馏，测其含氮量，即为水溶氮。四、测定结果的计算与分析：1、计算：N-N-N

总 1 210.03三甲胺的含量%=水溶氮的含量 59142、允许差：1%，取其算术平均值为测定结果。乌洛托品鉴别〔六次甲基四胺〕氢氧化钾；硫酸溶液：6+100；钠氏试剂；100ml20ml棕色中保存；pH4.5～8.0〔红→蓝二、鉴别方法：0.5g10ml20ml验溶液。10ml参加2g氢氧化钾，连续加热产生的蒸汽能使润湿的红色石蕊试纸变蓝，证明有甲醛和氨产生，判定样品中含有六次甲基四胺。TBA一、原理：油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反响，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA〔硫代巴比妥酸〕作用生成粉红色化合物，在538nm波特长有吸取顶峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。二、试剂：100ml〔TBA100ml0.02M；三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸〔分析纯〕7.5g0.1gEDTA，用水溶100ml；氯仿〔分析纯；丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至100ug10ml，100ml，ml10ug，备用。三、操作步骤：⑴标准曲线的绘制测定步骤进展，测得光密度绘制标准曲线。⑵样品测定：5-10g100ml25ml三氯乙酸混合液，振摇半小时〔保持油脂融溶状态，如冷结即在70℃水浴上略微加热使之溶化后连续振摇过滤一次。准确移取上述滤液5ml置于25ml5mlTBA90℃40min1h，5min，上清25ml5ml532nm〔同时做空白试验。四、计算丙二醛含量〔mg/kg〕C205m式中：C——从标准曲线查得丙二醛的微克数〔ug〕m——样品质量〔g〕光密度：TBA〔A532/kg〕=A532〔V1VmV

10001式中：V——油脂用三氯乙酸定容体积，mlVml1VTBAml2饲料中粗脂肪的测定一、适用范围：本方法适用于各种单一、混合、协作饲料和预混料。二、原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取风干试样中的脂肪，计算样品的失重。其中粗脂肪或乙醚提取物。三、仪器设备：1、试验室用样品粉碎机或研钵。20.45mm〔40。30.0001g。4、电热恒温水浴锅：室温—100℃。5、枯燥箱：50℃—200℃。6、索氏脂肪提取器〔带球形冷凝器100150ml。7、滤纸：中速、脱脂。8、枯燥器：用变色硅胶为枯燥剂。四、试剂：无水乙醚〔分析纯。五、试样的选取和制备：50g，40六、测定步骤：1、将棉线绳剪成适当大小置于无水乙醚中浸泡24小时〔留意密闭、防火〕后取出，晒干备用。将滤纸置于105℃22、将待测试样粉碎过40目后，取适量于135℃枯燥箱内枯燥40分钟，制成风干样品。并用处理好的棉线绳系好。460—100ml无水乙醚，在40—45℃的水浴中加热，使乙醚回流。待3小时左右〔油高的5小时〕用滤纸检查抽提管流出的乙醚，挥发后不留下油迹为抽提终点。5、取出试样后，置于恒重的铝盒内，于135℃4030七、测定结果的计算和表达：1、风干样中粗脂肪含量：M-〔M-M-M〕EE%=0 3 2 1 ×100M0其中：M0M1M2M3

为风干试样重，g。为滤纸恒重，g。为铝盒恒重，g。为烘后铝盒+滤纸包重，g。2、原样中粗脂肪含量：EE%=〔1-原样中水份含量〕×风干样中粗脂肪含量3、重复性：每个试样取两个平行样进展测定，以其算术平均值为结果。10%以上〔10%〕3%；105%。油脂酸败试验〔间苯三酚试纸法〕一、仪器和用具：电炉移液管、棕色瓶等二、试剂：间苯三酚试纸：取长7cm4cm的滤纸条，浸入0.1%间苯三酚-乙醇3min盐酸3、操作方法：5ml5～620min。试纸变红为阳性，表示有醛类存在，试样已发生酸败；试纸呈黄色或橙色时为阴性。玉米脂肪酸值的测定一、原理：在室温下用无水乙醇提取玉米中的脂肪酸，用标准氢氧化钾溶液滴定，计算脂肪酸值。二、试剂和材料：除非另有规定，仅使用分析纯试剂。1、无水乙醇2、酚酞-乙醇溶液〔10g/L：1.0g100ml95%〔V/V〕乙醇。3、c〔KOH〕=0.01mol/L氢氧化钾-95%乙醇标准滴定溶液c〔KOH〕=0.5mol/LCO2〔20ml〕24h中。c〔KOH〕=0.5mol/L50ml不含CO2蒸馏水中，滴加酚酞-乙醇指示剂3～5滴，用配制的氢氧化钾标准储藏液滴定至微红色，以30s不褪色为终点，登记所耗氢氧化钾标准储藏液ml〔V1，同时做空白试验〔不加邻苯二甲酸氢钾，同上操作，登记所耗氢ml〔V0。按下式计算氢氧化钾标准储藏液浓度。C〔KOH〕= 1000m (1 V V)204(1 式中：c〔KOH〕——氢氧化钾标准储藏液浓度，mol/L1000——换算系数m——称取邻苯二甲酸氢钾的质量，gV1——滴定所耗氢氧化钾标准储藏液体积，mlV0——空白试验所耗氢氧化钾标准储藏液体积，ml204.22——邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，g/mol注：氢氧化钾标准储藏溶液按要求定时复标4、c〔KOH〕=0.01mol/L氢氧化钾-95%乙醇标准滴定溶液20.0ml0.5mol/L1000ml，盛放于聚乙烯塑料瓶中，临用前稀释。三、仪器与设备：具塞磨口锥形瓶：250ml移液管：50.0ml、25.0ml微量滴定管：5ml，0.02ml；10ml0.05ml0.01g/min四、分析步骤：1、试样处理：10g0.01g250ml10min100/min。1～2min，在玻璃漏斗中放入折叠滤纸过滤，并加盖滤纸。弃去最初几滴滤25ml2、测定：150ml50mlCO2呈微红色，30s-95%乙醇溶液体积〔V1〕CO2参照相比有色差时，即可视为已到滴定终点。3、空白试验：25.0ml150ml50mlCO23～-95%乙醇溶液体积〔V0〕五、结果计算：脂肪酸值〔KOHmg/100g〕=11220 (V1V0)cm

× 100 100w式中：V1——滴定试样所耗氢氧化钾-95%乙醇溶液体积，mlV0——滴定空白所耗氢氧化钾-95%乙醇溶液体积，mlc——氢氧化钾-95%乙醇溶液的准确浓度，mol/L50——提取试样用无水乙醇的体积，ml25——用于滴定的滤液的体积，ml干〕试样的质量，gm——试样的质量，g100gg六、结果表示：每份试样取两个公平样进展测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果保存小数点后一位数。七、重复性：2mgKOH/100g。氟的测定⒈原理：

离子选择性电极法2.303RT式〔E=Eº-F

lgc。FElgcF

呈线性关系。2.303RT/F为该直线的斜率〔25℃时为59.16。在水溶液中，易与氟离子形成络合物的三价铁Fe3+、三价铝Al3+〕及硅酸根SiO2-〕等3离子干扰氟离子测定，其他常见离子对氟离子测定无影响。在测量溶液的酸度为pH5～6，用总离子强度缓冲液消退干扰离子及酸度的影响。⒉试剂和溶液试剂均为分析纯；GB/T6682全部溶液贮于聚乙烯塑料瓶中。⑴c〔CHCOONa•3HO〕=3mol/L3 2称取204g〔CHCOONa3H300ml1mol/L3 2乙酸〔GB/T676〕pH7.0500ml⑵c〔NaCHO•2HO〕=0.75mol/L3657 2称取110g柠檬酸钠〔NaCHO2HO，溶于约300ml水中，加高氯酸〔HClO〕14ml，移入3657 2 4500ml⑶总离子强度缓冲液乙酸钠溶液〔1〕与柠檬酸钠溶液〔2〕等量混合，临用时配制。⑷c〔HCl〕=1mol/L量取10ml盐酸〔GB/T622，加水稀释至120ml。⑸氟标准溶液氟标准贮备液：称取经100℃4h〔GB/T1264〕0.2210g，溶于水，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，贮备于塑料瓶中，置冰箱内保存，此液每毫升相当于1.0mg10.00ml100ml100.0ug10.00ml100ml10.0ug⒊仪器、设备氟离子选择电极：测量范围10-1mol/L～×10-7mol/L，pF-1甘汞电极：232磁力搅拌器。酸度计：测量范围0.0～-1400mV，pHS-30.0001g。纳氏比色管：50ml。容量瓶：50，100ml。超声波提取器。⒋试样制备2kg，250g，0.42mm品瓶，密闭保存，备用。⒌分析步骤⑴氟标准工作液的制备吸取氟标准稀溶液0.50、1.00、2.00、5.00、10.00ml，再吸取氟标准溶液2.00、5.00ml，分别置于50ml5.00ml0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、10.0ug/ml。⑵试液制备a、饲料试液制备〔除饲料级磷酸盐外〕准确称取约含2023ug氟的试样〔准确至0.0002g，置于50ml纳氏比色管中，参加盐酸溶液5.0ml，密闭提取1h〔不时轻轻摇动比色管，应尽量避开样品粘于管壁上，或置于超声20min25ml滤液供测定用。b、磷酸盐试液制备0.5～1g〔0.0002g〕置于100ml5.00ml50ml25ml度，混匀。供测定用。⑶测定将氟电极和甘汞电极与测定仪器的负端和正端联接，将电极插入盛有水的50ml聚乙烯塑料烧杯中，并预热仪器，在磁力搅拌器上以恒速搅拌，读取平衡电位值，更换2～3次水，待电位值平衡后，即可进展标准液和试样液的电位测定。由低到高浓度分别测定氟标准工作液的平衡电位。同法测定试液的平衡电位。⒍分析结果计算和表述⑴饲料中氟含量计算饲料〔除饲料添加剂级磷酸盐外〕按式①计算出试样中氟的含量：501000X=m1000

50 ①m式中：X——试样中氟的含量，mg/kg；ρ——试样中氟的浓度，ug/ml；m——试样质量，g；50——测试液体积，ml。磷酸盐按式②计算出试样中氟的含量：501000X=m1000

100 5

1000 ②m⑵结果表示每个试样取两个平行样进展测定，以其算术平均值为结果，结果表示到0.1mg/kg。⒎允许差同一分析者对同一饲料同时或快速连续地进展两次测定，所得结果之间的相对偏差：50mg/kg10%；50mg/kg5%。饲料酸结合力的测定方法仪器设备：1000ml容量瓶，酸式滴定管，250ml烧杯，分样筛，铁架台，玻棒。试剂：NaOH校准浓度。饲料样品：实行肯定数量的玉米、豆粕、小麦、菜粕、棉粕、次粉、小麦麸、鱼粉、磷酸氢钙、石粉、乳清粉、酸化剂、玉米蛋白粉、肉粉等饲料样品，粉碎并通过肯定规格的分样筛。测定方法：粉碎的样品进展筛分〔<0.25m，后用四分法取样。准确称取10.0g于枯燥250ml90ml的去离子水，在恒温水浴中加热，至温度37℃±1℃内。将酸度计电极插入溶液中，待pH值恒定后登记1ml，滴入后至pH值恒定时记录数值。植物油脂检验皂化值的测定 GB5524一、定义：在规定条件下皂化1g油脂所需的氢氧化钾毫克数为皂化值。二、原理：在回流条件下将样品和氢氧化钾-滴定过量的氢氧化钾。三、试剂：全部试剂必需是分析纯级，使用水为蒸馏水或与其相当纯度的水。10.5mol/L95%〔V/V〕乙醇中。此溶液应为无色或淡黄色。通过以下步骤可制得稳定的无色溶液。8g5g1L1h，马上蒸馏。将需要量的氢将此液贮存在配有橡皮塞的棕色或黄色玻璃瓶中备用。2、盐酸标准滴定溶液：c〔HCI〕=0.5mol/L10g/L95%〔V/V〕6B20g/L95%〔V/V〕乙醇。、助沸物：玻璃珠或瓷粒。四、仪器：2、回流冷凝管：带有连接锥形瓶的磨玻璃接头。3、加热装置：如水浴锅、电热板或其他