关节损伤再灌注改后

关节损伤再灌注改后第一页，共一百一十八页，2022年，8月28日

骨关节、滑膜、软骨等缺血再灌注损伤的机制与防治，是研究的重点。为此设多个专题进行研究：一、骨关节、滑膜缺血再灌注损伤二、软骨缺血再灌注损伤三、骨关节其它软组织缺血再灌注损伤四、防治方法的研究第二页，共一百一十八页，2022年，8月28日一、关节滑膜缺血再灌注损伤第三页，共一百一十八页，2022年，8月28日模型的建立

在股动脉处切开皮肤，游离股动静脉、股神经；于股骨中段逐层结扎并切断除股骨、股动静脉、神经以外的皮肤及各层肌肉；环形游离长约0.5cm的骨膜并用牙科磨钻开窗，用明胶海绵填塞阻断髓腔血流，然后用血管夹夹闭股动静脉造成远端肢体缺血。8小时后，放松血管夹恢复肢体血运。第四页，共一百一十八页，2022年，8月28日a图:连续夹闭4小时，动静脉未见明显异常。abc第五页，共一百一十八页，2022年，8月28日b图:连续夹闭6小时，动脉内见血栓形成，血管内皮细胞（EC）有脱落。

abc第六页，共一百一十八页，2022年，8月28日

c图:连续夹闭6小时，血管变形，动脉内见血栓形成。abc第七页，共一百一十八页，2022年，8月28日滑膜缺血与损伤的时效关系第八页，共一百一十八页，2022年，8月28日指标检测

分别于阻断血流后0h、4h、6h、8h、10h活杀动物，立即取材。第九页，共一百一十八页，2022年，8月28日

光镜观察第十页，共一百一十八页，2022年，8月28日正常滑膜组织

正常滑膜组织，由1-3层滑膜细胞和其下的组织构成。第十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日a图:缺血4小时，滑膜组织轻度水肿。

abcd第十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日b图:缺血6小时，滑膜组织水肿，间质血管有大量的红细胞。

abcd第十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日

c图:缺血8小时，滑膜组织水肿，毛细血管内皮细胞（EC）肿胀。

abcd第十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日d图:缺血8小时，滑膜下层组织出现核碎裂、和溶解等坏死变化。abcd第十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色×400

单纯I/RI1天,可见滑膜细胞间质水肿，其间散在数量不等的多形核粒细胞，伴有毛细血管充血，且管壁不完整，内有含铁血黄素。第十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色×400

关节单纯I/RI2周，滑膜间质水肿加重，见表层滑膜细胞有坏死脱落，间质内多形核白细胞（PMN）明显浸润。第十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色×100

关节单纯I/RI4周，可见滑膜细胞及滑膜下层血管减少，滑膜间质疏松，伴有巨噬细胞浸润。第十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节滑膜

HE染色×100

单纯I/RI12周，滑膜组织乳头状增生，呈细小绒毛状向腔内突出，表面被覆滑膜细胞，间质内伴有大量巨噬细胞浸润。第十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日电镜观察

缺血6小时，血管内皮细胞、滑膜细胞出现线粒体肿胀，嵴突变短；缺血8小时，还可观察到胞核染色质凝块的出现；缺血10小时，滑膜细胞染色质边集、粗面内质网脱颗粒和胞浆分泌颗粒减少，以致核碎裂等细胞坏死的表现;小血管内皮细胞胞膜出现髓鞘样变，胞浆突起、空泡形成，细胞紧密连接变松弛，胞膜破坏、崩解。第二十页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

透射电镜×3000

单纯I/RI2周内,可见滑膜细胞肿胀，细胞核染色质边集，核周隙明显增宽，细胞核周围出现空泡；胞浆内线粒体可出现髓样变、空泡样变。

第二十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

透射电镜×2000

单纯I/RI2周，可见血管内皮细胞肿胀明显，胞核变小，胞浆出现空泡样变，线粒体等细胞器明显减少。

第二十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

透射电镜×1400

单纯I/RI12周，滑膜细胞仍有肿胀，细胞核不规则，核仁明显，核周隙明显增宽，胞浆内质网扩大。第二十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜缺血再灌注损伤机制第二十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日

1．组织IR过程中由于激活了次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统，产生大量的活性氧自由基（ROS）；血管内皮细胞（EC）由于缺血缺氧及活性氧自由基（ROS）作用，可能促使多形核白细胞（PMN）粘附并侵入到组织间隙；多形核白细胞（PMN）在此过程中因呼吸爆发产生更多的活性氧自由基，当这些活性氧自由基的量超过组织的清除能力时，则导致组织细胞损伤，器官功能形态遭到破坏。第二十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

2．我们动态观察了脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、多形核白细胞（PMN）及超氧化物歧化酶（SOD）在滑膜IR损伤和修复中的变化，以及它们与滑膜组织结构和关节活动改变的关系。第二十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日实验方法第二十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日动物分组

实验动物55只，根据缺血后再灌注的时间不同，随机分成11组，每组5只；再灌注时间分别为1h、3h、6h、12h、24h、72h和1w、2w、4w、8w、12w，一侧后肢为实验侧，另一侧后肢为自身对照侧(不施行手术)。第二十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日

滑膜组织丙二醛含量和多形核白细胞记数

缺血组4、6、8、10小时滑膜组织中丙二醛（MDA）的变化与正常组无显著性差异（P>0.05）。第二十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日0501001502002501h3h6h12h24h72hIR后时间MDA含量(nmol/g)MDA实验侧MDA对照侧

*******

再灌注组2周内，实验侧丙二醛（MDA）含量呈双峰变化，IR1小时达第一个峰值，随后逐渐降低，IR6小时再次升高，72小时达第二个峰值，然后又逐渐降低。第三十页，共一百一十八页，2022年，8月28日0501001502002501w2w4w8w12wIR后时间MDA含量(noml/g)实验侧对照侧*

***IR实验侧滑膜组织丙二醛（MDA）在IR2周时仍显著高于自身对照侧（P<0.05）；IR2-8周丙二醛持续在低水平，12周又有所回升。第三十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日0510152025301h3h6h12h24h72h术后时间PMN(个/高倍视野)PMN实验侧PMN对照侧***

滑膜组织中多形核白细胞（PMN）浸润自IR后6小时开始升高，72小时达峰值，随后逐渐降低。第三十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日0510152025301w2w4w8w12w术后时间PMN(个/高倍视野)实验侧对照侧***

早期以中性粒细胞为主，两周后为巨噬细胞所代替。IR6小时-72小时滑膜组织丙二醛含量（MDA）与多形核白细胞（PMN）记数显著相关（r=0.66，P<0.05）。第三十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日IR及修复过程中超氧化物歧化酶SOD的变化

滑膜组织中超氧化物歧化酶（SOD）自缺血6小时开始降低，再灌注12小时达最低点，然后回升，再灌注8周，基本恢复正常。第三十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节活动度的变化

缺血再灌注最初2周，实验侧肢体活动明显减少；4周时活动较2周时有所增加，但仍以对照侧肢体为主；8~12周，双侧肢体均参与活动及持重，但可见到明显的跛行。术侧膝关节损伤后被动活动度逐渐降低。第三十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日滑膜组织病理学变化

第三十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日a图:IR3小时滑膜组织正常。

a1图:IR实验侧滑膜组织水肿，血管内血栓形成，血管内皮细胞肿胀、脱落。

abca1b1c1第三十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日b图:IR12小时对照侧滑膜组织间质水肿，血管充血。b1图:实验测滑膜间质出血，表层结构破坏脱落至关节腔。

abca1b1c1第三十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日

c图:IR72小时对照侧间质明显水肿。c1图:实验侧见细小血管破裂成为灶性出血。abca1b1c1第三十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日a图:IR1周滑膜组织灶性坏死，关节腔面有渗出物。a1图:对照侧无明显异常。aba1b1第四十页，共一百一十八页，2022年，8月28日b图:IR2周实验侧，滑膜下层开始修复，间质内有大量的成纤维细胞及炎细胞；新生毛细血管出现结构类似肉芽组织。b1图：对照侧结构正常。aba1b1第四十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日

二、肢体缺血再灌注后关节软骨病理变化的研究第四十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨病理变化

大体病理观察：IR侧早期关节软骨与对照侧相比无差别，4周后软骨失去原有光泽，色泽暗淡，暗红或淡黄色。

第四十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日

光学显微镜观察

IR侧肢体1天和3天组，关节软骨表面平坦，柱状层细胞排列整齐，细胞核大多有偏移、缩小现象；1周、2周组软骨细胞排列紊乱，层次不清，胞核缩小甚至消失，软骨细胞碎裂、坏死，软骨陷窝内细胞数目较对照侧减少；4周、8周组关节软骨表面粗糙，表层细胞有脱落现象，柱状层细胞稀少、排列紊乱，12周组软骨表面甚至出现裂纹。第四十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨组织学变化HE染色×200A图：正常对照侧，表面光滑，软骨细胞排列整齐，核大小均匀，潮线清晰可见。第四十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

肢体IR后关节软骨组织学变化HE染色×200B图：IR后3天,表面平坦，柱状层细胞排列整齐，核偏移。第四十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨组织学变化HE染色×200C图：IR后2周,关节面粗糙，细胞数目减少，排列紊乱，胞核缩小、偏移。第四十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨组织学变化HE染色×200D图：IR后3个月,细胞数目减少，排列紊乱，软骨增厚，潮线增多、前移、模糊。第四十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日透射电镜

IR侧1天组，线粒体轻度肿胀，嵴消失，内织网扩张，胞浆内出现大量的脂滴；3天组，细胞高度肿胀，染色质边集，部分细胞出现溶解坏死，胞膜溶解，胞核碎裂。第四十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日

1周、2周组坏死细胞数量增加，胞核固缩、碎裂；4周、8周组仍可见到高度肿胀和溶解坏死的细胞，胞内残存有细胞器，12周组，可见较多的成软骨细胞，呈梭形，胞浆内大量粗面内织网和线粒体，新生软骨细胞数目增多，有分裂现象。第五十页，共一百一十八页，2022年，8月28日

肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察（×14K）

A图：对照侧关节软骨细胞，胞膜完整，核形态基本正常，未见细胞器肿胀。

第五十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日

肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察（×7K）B、C图：IR后1天，变性软骨细胞，线粒体肿胀，内织网扩张，胞核变形、偏移，胞浆内出现大量脂滴。

第五十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日

肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察（×7K）

D图：IR后1天，肿胀、坏死软骨细胞，胞膜表面微绒毛消失，细胞器及胞核溶解。第五十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察E图：IR后3天，软骨细胞高度肿胀，胞核固缩，细胞器溶解，胞膜基本完整。（×7.0K）F图：IR后1周，大量软骨细胞溶解。（×2.9K）

第五十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察G图：IR后2周，可见溶解坏死软骨细胞，胞膜破裂，细胞器溶解，胞核碎裂。（×7.0K）H图：IR后1月，仍见坏死的软骨细胞（×1.85K）第五十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察I图：IR后1月，出现梭形成软骨细胞。（×7.0K）J图：IR后2月，成软骨细胞数目增多，可见分裂的软骨细胞。（×2.1K）

第五十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨细胞超微结构观察K图：IR后3月，见分裂的软骨细胞。（×10.0K）L图：IR后3月，新生软骨细胞数目增多。（×2.1K）

第五十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日

扫描电镜

IR侧1周－2周内软骨表面出现小的凹陷，“垄沟”尚在，但变浅，表面可见散在的炎性细胞；4周、8周组，“垄沟”排列基本消失，软骨表面凹凸不平；12周组软骨表面出现细小浅表的裂缝，胶原暴露，基质丢失。第五十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨表面扫描电镜观察A图：IR后1天，表面有均匀分布的“垄沟”，呈平行排列，相邻距离相等，垄表面光滑，高度和深度基本一致。（×1000）

第五十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨表面扫描电镜观察

B图：IR后1周，“垄沟”尚在，深浅不均，连续性差。（×1000）第六十页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨表面扫描电镜观察

C图：IR后1月，“垄沟”排列消失，软骨表面凹凸不平。（×500）

第六十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日肢体IR后关节软骨表面扫描电镜观察

D图：IR后3月，软骨表面出现的裂隙，胶原纤维暴露，表面不平坦。（×1000）

第六十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨内MMP3的表达与分布

肢体IR后1天组，关节软骨内阳性颗粒较少，主要分布在胞浆内；3天组明显增多，阳性颗粒在胞浆和基质中均有分布；至1周和2周组渐升高达峰值，之后表达逐渐回落，但8周-12周组仍高于对照侧。第六十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3的表达A图：对照侧关节软骨胞外基质很少着色，阳性细胞少，染色淡。（DAB染色×200）

第六十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3的表达B图：IR后1天，关节软骨内出现较少阳性细胞，阳性染色主要在细胞内。（DAB染色×400）

第六十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3的表达

C图：IR后3天，阳性细胞增多，主要集中在表层，胞外基质有着色。（DAB染色×400）

第六十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3的表达

D图：IR后1周，大量染色阳性细胞，胞外基质同时着色。（DAB染色×400）第六十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3表达

E图：IR后2周，阳性细胞多，着色深。（DAB染色×400）第六十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3表达F图：IR后4周，在大量阳性细胞周围，可见基质的阳性染色。（DAB染色×400）第六十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3表达G图：IR后8周，表层细胞有脱落，柱状层染色阳性细胞多。（DAB染色×400）第七十页，共一百一十八页，2022年，8月28日

组化SP法检测IR后关节软骨内MMP3表达H图：IR后12周，表层细胞脱落严重，细胞数目减少，但仍见强染色细胞。（DAB染色×400）第七十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节内MMP3的合成较正常增多，并在关节内广泛分布，与关节软骨基质的降解有关。刺激MMP3表达的因素，考虑可能是肢体缺血再灌注后释放大量的自由基和炎症细胞因子，如：一氧化氮（NO）、白介素-1（IL-1）肿瘤坏死因子（TNF）等。有研究证明这些因子可刺激关节软骨细胞和滑膜细胞产生和分泌金属蛋白酶类。第七十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日

后期出现新生软骨细胞，而慢性关节炎形成，炎性介质及细胞因子刺激新生软骨细胞合成MMP3，MMP3mRNA又表现出增高趋势。而在2周-4周时MMP3并不随mRNA而变化，可能是细胞裂解将胞内合成的MMP3释放的缘故。第七十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨内蛋白多糖含量变化

IR侧1天、3天组与对照侧无明显差异；1周染色较对照侧淡；2周组蛋白多糖含量较1天组明显减少（P<0.01）；直到12周组实验侧蛋白多糖含量较对照侧存在明显差异。第七十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日

免疫组化SP法对关节软骨内蛋白多糖染色A图：对照侧软骨内着色深，基质与胞内均有着色。（DAB染色×100)第七十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

免疫组化SP法对关节软骨内蛋白多糖染色

B图：IR后1周，软骨内蛋白多糖染色仍较深。（DAB染色×100)第七十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日

免疫组化SP法对关节软骨内蛋白多糖染色C图：IR后1月，染色明显变淡，胞内着色少。（DAB染色×100)第七十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日

免疫组化SP法对关节软骨内蛋白多糖染色

D图：IR后3月，染色淡，与对照侧有差异。（DAB染色×100)第七十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日

IR侧关节软骨内蛋白多糖含量减少可能的原因

IR后由于软骨细胞的损伤，细胞合成蛋白多糖及胶原的功能下降，而此时MMP3表达还没达到最高峰，因此推断软骨细胞损伤是IR早期软骨内蛋第七十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日白多糖含量减少的主要原因。2周后MMP3在关节软骨内表达增多，基质中也有大量表达，明显多于对侧。金属蛋白酶合成与分泌，引起蛋白多糖的降解，最终导致蛋白多糖含量下降。第八十页，共一百一十八页，2022年，8月28日三、预防

预防重于治疗，因而要先于治疗。

1、肢体不论何种原因造成的缺血，时限不应超过6－8小时，最长不超过10－12小时。过长即可造成不可逆性损伤。因此，必须争分夺秒尽快采取措施恢复血供。第八十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日2、部队指战员操练、施工尽量不要一个姿势过长时间的操作，可以变换姿势或适当休息后，再行操练。避免肢体长时间寒冷，注意保温。

3、一旦发现肢体有血供不足或缺血的早期症状，如肢体行动乏力、酸痛或不稳等，应尽早采用活血化瘀、改善血液循环的药物治疗。第八十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日

4、适当的补充微量元素，如锌、铁、硒等，是预防的重要方面。

5、维生素、钙的适当补充亦是预防和治疗所必须的措施。第八十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日

四、消灵仙注射液与Vit.E注射液对关节缺血再灌注损伤的防治研究

第八十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日

鉴于以上实验结果，研究I/RI损伤的防治方法。我们采用中药消灵仙注射液与Vit.E注射液关节腔内注射，观察对I/RI的发生、发展有否防治作用，并阐明其作用机制，为临床I/RI的防治提供理论依据。第八十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日中药消灵仙的作用

中药消灵仙注射液的成分主要是活血化瘀、消炎祛湿类中药。其中红花的有效成分红花黄色素、当归的有效成分阿魏酸钠；三七、牛膝、紫苏的有效成分均有一定的抗凝、抑制血小板聚集、抗血栓形成，从而改善微循环的作用。此外，黄芪酮（黄芪的有效成分）及阿魏酸钠也有清除OFR，增加超氧化物歧化酶活力的功效。第八十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日以红花为例，中药消灵仙注射液的活血化瘀机制可能为：

1.

抗凝血作用红花黄色素可使血浆凝血酶时间、血浆凝血酶原时间和血浆复钙时间显著延长。对血小板活化因子（PAF）介导的中性粒细胞的聚集、粘附均有抑制作用，并呈一定的剂量依赖关系。据此推测，红花黄色素对抗血小板活化因子的作用，可能是红花活血化瘀的重要机制之一。第八十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日以红花为例，中药消灵仙注射液的活血化瘀机制可能为：

2.抗血栓形成作用可能与其促进血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂（tPA）有关。由于组织型纤溶酶原激活剂活性的增强抵消了部分纤溶酶原激活抑制剂的抑制作用，从而使其纤溶活性得以加强。第八十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日以红花为例，中药消灵仙注射液的活血化瘀机制可能为：

3.改善微循环红花黄色素有改善外周微循环的作用，从而使血流加速，毛细血管开放数目增多，血细胞粘稠程度下降。

第八十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节软骨

HE染色×400

单用药2周时，可见软骨表面欠光滑，细胞层次减少，钙化潮线前移，表面见少许细胞脱落。第九十页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节软骨

HE染色×400

单用药4周时，可见关节软骨表面仍有凹陷，但细胞层次较前增多，提示少量软骨细胞增生修复。第九十一页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨

HE染色×400

单用药12周时，软骨表面光滑，细胞层次排列清晰，提示软骨细胞几乎完全修复。第九十二页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨

HE染色×400

联合用药2周时，可见关节软骨表面略有凹陷，细胞层次减少，但未见到细胞坏死脱落。第九十三页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨

HE染色×400

联合用药4周时，关节软骨表面无凹陷，细胞层次增多，各层排列较规则。

第九十四页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节软骨

HE染色×400

联合用药12周时，可见软骨表面光滑，细胞排列整齐，无异于正常软骨。

第九十五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节滑膜

HE染色×400

单用药1天，可见滑膜间质水肿，毛细血管扩张，但无充血或血栓形成，偶见少量的多形核粒细胞浸润第九十六页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色，×100

单用药2周，滑膜间质水肿减轻，未见表层滑膜细胞脱落，间质内有少量多形核粒细胞浸润。第九十七页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色，×100

单用药4周，滑膜间质无水肿，表面被覆增生的复层滑膜细胞，其下密集增生的纤维组织内散布多数增生的滑膜腔隙，并可见巨噬细胞浸润。

第九十八页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节滑膜

HE染色×400

单用药12周，滑膜细胞细胞排列较规则，复层被覆于滑膜下结缔组织表面，无巨噬细胞浸润，已近完全修复。第九十九页，共一百一十八页，2022年，8月28日关节滑膜

HE染色×400

联合用药早期（1天-2周）可见滑膜间质水肿，偶见少量的多形核粒细胞浸润，无充血或血栓形成，表层无细胞脱落。第一百页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节滑膜

HE染色×400

联合用药4周，可见滑膜胶原纤维增多，表面滑膜细胞增生，未见巨噬细胞浸润，已开始修复。第一百零一页，共一百一十八页，2022年，8月28日

关节滑膜

HE染色×400

联合用药12周，可见滑膜细胞层次排列清晰，间质内无巨噬细胞浸润，已完全修复。第一百零二页，共一百一十八页，2022年，8月28日生化指标测定结果第一百零三页，共一百一十八页，2022年，8月28日中药组、VitE组及中药+VitE组均较单纯缺血再灌注组丙二醛（MDA）含量明显降低，差异有显著性（P<0.01）。但中药组与VitE组无显著性差异（P>0.05）；其余任两组间差异显著（P<0.05）。

第一百零四页，共一百一十八页，2022年，8月28日丙二醛（MDA）含量在1天组较高，之后逐渐下降，在12周又复回升，1天组与12周组间丙二醛含量差异显著（P<0.01）。第一百零五页，共一百一十八页，2022年，8月28日

中药组、VitE组及中药+VitE组的超氧化物歧化酶活力均较单纯组明显升高，统计学上有显著性差异（P<0.05）。但中药组与VitE组无显著性差异（P>0.05）；其余任两组间差异显著（P<0.01）。

活力值（NU/mg）第一百零六页，共一百一十八页，2022年，8月28日

各时间点超氧化物歧化酶（SOD）活力亦有显著性差异（P<0.05），超氧化物歧化酶活力随时间延长而逐渐回升。12周组与其他组间超氧化物歧化酶活力差异显著（P<0.01），其余组间差异无显著性（P>0.05）。

活力值（NU/mg）第一百零七页，共一百一十八页，2022年，8月28日中药组、VitE组及中药+VitE组的NOS酶活力均较单纯组明显降低，统计学上有显著性差异（P<0.05）。但中药组与VitE组无显著性差异（P>0.05）；其余任两组间差异显著（P<0.05）。

活力值（U/mg）第一百零八页，共一百一十八页，2022年，8月28日各时间点NOS酶活力亦有显著性差异（P<0.05），NOS酶活力随时间延长而渐趋正常，12周组与其他组间NOS酶活力差异无显著性（P>0.05），其余组间差异有显著性（P<0.05）。活力值（U/mg）第一百零九页，共一百一十八页，2022年，8月28日VitE与消灵仙注射液对关节生化、形态、功能的影响

对生化指标的影响

关节缺血8小时后，在关节局部可产生大量的OFR，超过了超氧化物歧化酶。在应用亲水性氧自由基清除剂VitE后，可使局部关节滑膜组织中的丙二醛含量降低，且超氧化物歧化酶活力升高，随时间的延长而疗效更加显著。

第一百一十页，共一百一十八页，2022年，8月28日

中药消灵仙中阿魏酸钠与黄芪酮等均是OFR清除剂，可使滑膜组织中丙二醛含量降低，超氧化物歧化酶活力升高。中药消灵仙中以红花黄色素为代表的活