免疫细胞功能检测技术

免疫细胞功能检测技术第一页，共三十八页，2022年，8月28日淋巴细胞T细胞（负责细胞免疫功能）B细胞（执行体液免疫功能）NK细胞（非特异性免疫作用）第二页，共三十八页，2022年，8月28日一、T细胞功能的检测T细胞增殖试验T细胞分泌功能测定T细胞介导的细胞毒试验体内试验第三页，共三十八页，2022年，8月28日（一）T淋巴细胞增殖试验1.原理：淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松第四页，共三十八页，2022年，8月28日

未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无第五页，共三十八页，2022年，8月28日2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：

PHA------T细胞

ConA-------T细胞

PWM-------T、B细胞

LPS-------B细胞特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原

第六页，共三十八页，2022年，8月28日3.检测方法

形态法：刺激物淋巴细胞（4-6天）母细胞化同位素法：PHA淋巴细胞（54h）

DNA合成期+3HTdR掺入

收集细胞

检测β射线

测定细胞内的3H－TdR第七页，共三十八页，2022年，8月28日（1）形态学检查法第八页，共三十八页，2022年，8月28日方法学评价：优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。第九页，共三十八页，2022年，8月28日培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性（2）3H-TdR掺入法第十页，共三十八页，2022年，8月28日优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。第十一页，共三十八页，2022年，8月28日培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性MTT测吸光度(3)MTT比色法第十二页，共三十八页，2022年，8月28日(二)T细胞分泌功能测定

体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。

第十三页，共三十八页，2022年，8月28日（三）T细胞介导的细胞毒试验1.原理：靶细胞抗原T细胞观察杀伤活力致敏CTL靶细胞第十四页，共三十八页，2022年，8月28日形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞2.方法意义：肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力

第十五页，共三十八页，2022年，8月28日图15-2T细胞细胞毒试验示意图第十六页，共三十八页，2022年，8月28日靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时51Cr释放法第十七页，共三十八页，2022年，8月28日(四)体内试验特异性抗原皮肤试验PHA皮肤试验第十八页，共三十八页，2022年，8月28日二、B细胞功能检测B细胞增殖能力的试验溶血空斑试验B细胞抗体形成功能的检测体内试验第十九页，共三十八页，2022年，8月28日(一)B细胞增殖能力的试验抗IgM细菌脂多糖SAC的SPA

B细胞增殖形态学3H－TdR掺入法第二十页，共三十八页，2022年，8月28日(二)溶血空斑试验1.原理：第二十一页，共三十八页，2022年，8月28日2.方法学：经典溶血空斑形成试验被动溶血空斑试验

第二十二页，共三十八页，2022年，8月28日3．临床应用与评价溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。

第二十三页，共三十八页，2022年，8月28日(三)

B细胞抗体形成功能的检测

——酶联免疫斑点法ELISPOT1.原理：第二十四页，共三十八页，2022年，8月28日2．应用与方法学评价：该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。优点：稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。第二十五页，共三十八页，2022年，8月28日(四)体内试验体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。第二十六页，共三十八页，2022年，8月28日染色计数离心取上清测LDH或AKP离心取沉淀测活细胞荧光测发光强度测CPM值形态法酶释法荧光法同位素法化学发光法三、NK细胞活性测定靶细胞溶解常用靶细胞:

K562细胞株第二十七页，共三十八页，2022年，8月28日二吞噬细胞功能检测技术

按其形态大小分为两类：大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统小吞噬细胞—中性粒细胞第二十八页，共三十八页，2022年，8月28日一、中性粒细胞功能的检测

细胞趋化功能的检测吞噬和杀菌功能的检测第二十九页，共三十八页，2022年，8月28日(一)细胞运动功能——趋化功能检测1.原理：第三十页，共三十八页，2022年，8月28日2.方法：

琼脂糖平板法

滤膜渗透法（Boyden小室法）第三十一页，共三十八页，2022年，8月28日(二)吞噬和杀菌功能测定1．显微镜检查法：第三十二页，共三十八页，2022年，8月28日2.溶菌法第三十三页，共三十八页，2022年，8月28日NBT还原试验

原理：N-N-C+H+N=N-R-N-NH2CN=NH四氮唑基（淡黄色）甲臜（紫黑色）3．NBT还原试验

第三十四页，共三十八页，2022年，8月28日中性粒细胞NBT甲臜颗粒沉积于胞质中第三十五页，共三十八页，2022年，8月28日二、巨噬细胞功能检测(一)炭粒廓清试验

正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。第三十六页，共三十八页，2022年，8月28日(二)吞噬功能检测

巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞