免疫组织化学概述与制片优秀课件

免疫组织化学概述与制片第一页，共八十九页，2022年，8月28日第一章绪论

目录一、定义和意义二、发展简史三、免疫学概念四、基本类型与原理五、种类六、基本过程第二页，共八十九页，2022年，8月28日

一、免疫组织化学的定义及意义1、定义免疫组织化学(Immunohistochemistry)，又称免疫细胞化学(Immunocytochemistry)。已知的标记抗体（或抗原）原位显示细胞或组织内的相应抗原（或抗体）的方法,进行定性、定量、定位检测。原理：抗原、抗体特异性结合

第三页，共八十九页，2022年，8月28日

标记化学反应酶或其他物质标记抗体抗原-抗体反应抗原-抗体复合物呈色化学反应底物在酶作用下产生有色物质2、基本理论组织化学呈色反应颜色（原位）第四页，共八十九页，2022年，8月28日3、优点高特异性高敏感性方法步骤统一形态、机能与代谢相结合,可定性、定位与定量第五页，共八十九页，2022年，8月28日4、免疫组织化学的意义（1）肿瘤诊疗肿瘤组织起源诊断肿瘤分型诊断确定肿瘤的良恶性确定转移性恶性肿瘤的原发部位指导肿瘤的治疗、判断预后

（2）病原微生物（肿瘤病因）的检查（3）免疫性疾病的诊断（4）科学研究第六页，共八十九页，2022年，8月28日二、发展简史1、1941：COON首次用荧光标记抗体检测肺炎双球菌2、1968：中根一穗建立酶标记抗体技术3、1974年代:sternberger建立PAP技术4、1975：KoeHler等发明了单克隆抗体5、1981：许世明建立抗生物素-生物素标记抗体技术（ABC）6、免疫电镜技术、杂交-免疫细胞化学等7、新发展：Envision二步法、90年代建立的葡萄球菌A蛋白标记法（SPA）第七页，共八十九页，2022年，8月28日

三、免疫学概念

（一）抗原:

1、定义：刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞,结合抗体或致敏淋巴细胞的物质。2、抗原的两种特性：①免疫原性（immunogenicity）：诱生抗体或致敏淋巴细胞的能力。②反应原性（antigenicity）：与抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力。第八页，共八十九页，2022年，8月28日3、抗原决定族（抗原表位）：特殊的化学活性基团区域第九页，共八十九页，2022年，8月28日

（二）抗体:1、定义:机体受抗原刺激后，浆细胞产生的，与相应抗原特异性反应的球蛋白（免疫球蛋白：Ig）。2、基本结构:

一“Y”字型的四肽链重链(heavychain,H)：两条、完全相同轻链(lightchain,L)：两条、完全相同二硫键：连接四肽链。二端:氨基端（可变区，V区）羧基端（恒定区，C区）第十页，共八十九页，2022年，8月28日

（1）可变区（variableregion,V

）：

Ig分子氨基端，Aa的组成和排列顺序有变异，决定了抗体结合的特异性。

（2）恒定区（constantregion,C）：

Ig分子的羧基端，Aa组成和排列在同一动物种属中同类抗体比较恒定。具有免疫原性第十一页，共八十九页，2022年，8月28日同一种属动物对不同抗原产生的同类抗体:V区:不同，C区:相同，免疫原性:相同。抗体抗抗体（二抗：种属特异性抗体）免疫第十二页，共八十九页，2022年，8月28日

四、基本类型与原理（一）直接法（一步法）原理：第十三页，共八十九页，2022年，8月28日（二）间接法原理：

第十四页，共八十九页，2022年，8月28日（三）非标记抗体酶法1、酶桥法：以第二抗体作桥，任何抗体都未标记原理：一抗和三抗来源于同一种属动物的同类抗体第十五页，共八十九页，2022年，8月28日2、PAP法（peroxidase–Antiperoxidase,过氧化物酶－抗过氧化物酶法）原理：预先制备PAP复合物一抗和PAP复合物中的抗体来源于同一种属动物的同类抗体第十六页，共八十九页，2022年，8月28日（四）亲和素-生物素法亲和素-生物素－过氧化物酶法（AvidinBiotinComplex：ABC法）原理：预先制备ABC复合物第十七页，共八十九页，2022年，8月28日五、分类:按标记物的不同免疫荧光组织化学免疫酶组织化学亲和免疫组织化学免疫金-银标记技术免疫双重和多重组织化学杂交免疫组织化学第十八页，共八十九页，2022年，8月28日六.基本过程(1)抗原的提取和纯化(2)免疫动物或细胞融合(3)抗体提取与效价检测(4)标记抗体(5)细胞与组织切片标本的制备(6)免疫细胞化学反应和细胞化学显色(7)观察和记录结果第十九页，共八十九页，2022年，8月28日第二章组织学制片技术一、定义和意义二、方法三、基本程序四、免疫组织化学石蜡切片制作第二十页，共八十九页，2022年，8月28日一、定义和意义

（一）概念将机体的组织、器官做成能在显微镜下观察的标本的技术（二）意义1、是组织学、胚胎学、病理学等生命科学研究组织细胞的正常与病理形态结构的主要方法。2、是显示组织、细胞中某些化学成分、基因的定位分布和含量变化的不可缺少的手段。第二十一页，共八十九页，2022年，8月28日二、制片方法（一）非切片法：

1、定义：不经切片机切片手续制成标本的方法。2、类型：①整装片（胚胎）：鸡胚②铺片（柔软组织）③涂片（液体）④磨片（骨、牙）⑤印片（淋巴结）类型：非切片法、切片第二十二页，共八十九页，2022年，8月28日2、类型：根据所用支持剂（包埋剂）的不同，分为：①石蜡切片②冰冻切片③火棉胶切片法（二）切片法:1、定义：用切片机(microtome)切成微米厚的薄片，制出标本切片的方法第二十三页，共八十九页，2022年，8月28日

三、基本程序切片法2、冰冻切片取材冷冻切片染色封片1、石蜡切片

取材固定脱水透明浸蜡包埋切片染色封片第二十四页，共八十九页，2022年，8月28日

（一）取材：从人或动物体内取下所需组织材料的过程1、材料来源（1）人体材料：手术、活检、尸检（2）动物材料①来源广泛②大多数动物组织结构与人体相似③有的结构比人类更典型四、免疫组织化学石蜡切片制作第二十五页，共八十九页，2022年，8月28日

（1）麻醉：

①吸入麻醉：将浸有乙醚或氯仿的棉球连同动物一起放入密闭容器内麻醉。适用对象：小动物缺点：乙醚麻醉：肺部充血、呼吸道分泌物增多

②注射麻醉：静脉、肌肉或腹腔内注射麻醉剂：3%戊巴比妥等适用对象：较大动物缺点：内脏淤血2、动物的致死方法第二十六页，共八十九页，2022年，8月28日（2）空气栓塞：向动物静脉内注入一定的空气

适用对象：较大动物，如兔、犬缺点：血管、内脏淤血（3）断头：用剪刀剪去动物头部适用对象：小动物，如青蛙、小鼠（4）其他方法：击头法、断髓法、股动脉放血法等第二十七页，共八十九页，2022年，8月28日3、致死原则：（1）选择合适的致死方法：利于取材和观察（2）快速致死，避免挣扎4、取材注意事项（1）根据实验目的选择动物的种类：肝脏—猪肝、胃—狗、卵巢—猫

（2）组织材料要新鲜：在心跳未停时即取材固定。

神经系统：10秒钟变性消化系统上皮：15分钟自溶亚细胞：变性更快。第二十八页，共八十九页，2022年，8月28日（5）组织块大小适宜：结构完整，组织块：小、薄：1cm×1cm×0.2cm,最厚不能超过0.5厘米（6）修剪附带的其他组织（3）选好部位和切面：胃：胃底；胰腺：胰尾部；肺：肺门管性器官:横切，小肠环行皱襞:纵切头皮:顺毛根纵切，肾脏:纵切（包括皮质和髓质）（4）避免损伤组织：避免手拽、有齿镊子夹、刀剪不锋利第二十九页，共八十九页，2022年，8月28日（8）保持清洁：尤其是消化管用生理盐水洗去血液、污物、粘液及食物残渣（7）防止收缩变形骨骼肌、神经在离体后：用木刺扎于木板上或将其两端用线捆于小棒上第三十页，共八十九页，2022年，8月28日（二）固定

1、概念：用化学试剂使蛋白质凝固或沉淀，保持其生活状态时的形态结构的过程。固定剂（液）：用来固定的化学试剂。2、目的（1）防止自溶与腐败（2）维持形态：使细胞内物质凝固或沉淀下来，保存各种抗原成份原有的结构（3）利于切片：增加硬度（4）利于鉴别和观察：使细胞内成分产生不同的折光率（5）利于染色：媒介作用，使细胞各部易于受色第三十一页，共八十九页，2022年，8月28日3、固定剂（1）固定剂的必备特性①渗透力强②迅速使组织及细胞成分凝固或沉淀③不致使组织过度收缩与膨胀

④能使组织获得较佳的折光率第三十二页，共八十九页，2022年，8月28日（2）固定剂的种类按作用原理分：

①凝固性：甲醛，重铬酸钾②沉淀性：酒精、升汞等

按化学性质分①还原剂：醛类、醇类②氧化剂：锇酸、重铬酸钾③酸类：苦味酸、醋酸第三十三页，共八十九页，2022年，8月28日①单一固定剂：一种试剂组成只对细胞的某种成分固定得较好，不能将所有的成分都保存下来②混合固定剂：两种以上的试剂组成

按组成成分第三十四页，共八十九页，2022年，8月28日（3）常用单一固定剂的性质及用法名称福尔马林（甲醛）性质概要1、无色、刺激味的液体。还原剂，凝固蛋白质。2、保存脂类、糖，线粒体及高尔基体的固定剂。3、硬化剂，冰冻切片的优良固定剂。对染色的影响固定后的处理硬化程度其他常用的单纯固定剂，对细胞的保存好。甲醛能与任何比例的水、醇及乙醚混合。渗透速度及小块组织（2mm3）固定时间较快4~12小时适度可入70%酒精或水冲洗对苏木素着色好，对伊红着色困难。收缩与膨胀情况收缩较小，脱水会使收缩变大。第三十五页，共八十九页，2022年，8月28日名称性质概要对染色的影响固定后的处理硬化程度其他渗透速度及小块组织（2mm3）固定时间重铬酸钾1、橙红色结晶体，有毒、氧化力极强，能溶于水，不溶于醇，凝固蛋白质2、保存类脂体，线粒体的固定剂，溶解染色质。较快，24小时在切片技术中是良好的药品收缩与膨胀情况起初收缩不显著，组织经酒精脱水会继续收缩中等用水冲洗对酸性染料着色很好第三十六页，共八十九页，2022年，8月28日（4）混合固定剂的优点及配制原则

优点：取长补短原则：相互弥补快+慢胀+缩(5)常用混合固定剂①A、F液（酒精+甲醛）组成：无水酒精90毫升，40%甲醛10毫升特点：简单、皮下组织铺片、肥大细胞固定好、对弹性纤维、胶原纤维染色好第三十七页，共八十九页，2022年，8月28日③Carnoy液组成：冰醋酸1份，氯仿3份，无水酒精6份特点：快、用于糖原、神经细胞尼氏体、细胞内DNA、RNA固定。

②Bouin液

组成：饱和苦味酸水溶液，40%甲醛，冰醋酸。（15：5：1）特点：常用，固定时间12~24小时，适用于大多数组织，以细胞核、细胞分裂为好，对肾脏固定不好。现配现用第三十八页，共八十九页，2022年，8月28日④Zenker′S液组成：重铬酸钾2.5克，升汞5克，蒸馏水100毫升贮备液：棕色瓶保存，临用前加冰醋酸5毫升。特点：常用，固定时间12~24小时，水冲洗，加碘去汞，细胞核、细胞质染色好。第三十九页，共八十九页，2022年，8月28日（5）固定的方法①灌注法：经血管途径将固定液灌注到所需要固定的器官（超微结构）类型：心插管固定；股动脉插管灌注②浸泡法：组织直接浸泡在固定液中。固定液的量：足够、组织块大小的15~30倍，瓶底垫纱布③微波固定：固定的组织收缩小④蒸汽固定：避免可溶性成分在固定液中丢失，对人危害大第四十页，共八十九页，2022年，8月28日（6）组织固定后的变化①体积改变：胀或缩酒精、升汞、苦味酸——缩小重铬酸钾、醋酸——膨胀②硬度增加：酒精、甲醛——增加多锇酸、苦味酸——增加较少③抗张力增加④折光率增加⑤着色性增加第四十一页，共八十九页，2022年，8月28日（7）固定注意事项④标本大小适宜：组织块体积：1cm×1cm×0.2cm⑤标本固定要及时⑥最好在低温下固定①固定液的选择要合理②固定液配制要新鲜(除贮存液外，要现配现用）③固定液的量要足够：组织块大小的15~30倍，瓶底垫纱布。⑦固定时间适当：避免太长、太短。⑧固定后要彻底冲洗第四十二页，共八十九页，2022年，8月28日（三）洗涤和脱水1、洗涤

（1）目的

去除固定液，终止固定作用，去除固定剂的重金属离子或颗粒（2）原则①什么配的固定剂就用什么洗（苦味酸固定的，用低浓度乙醇洗），固定剂为酒精或酒精混合液可不洗第四十三页，共八十九页，2022年，8月28日②洗涤时≧固定时

③特殊成分加特殊洗涤剂：脱黄（70%乙醇），碘酊脱贡（固定液含升汞的），硫代硫酸钠脱碘2、脱水

（1）概念：用化学试剂将标本中的水置换出来的过程

（2）目的：

①利于浸蜡（水不能与石蜡等包埋剂混合）②利于组织的永久保存（水使组织分解）第四十四页，共八十九页，2022年，8月28日（3）脱水剂

脱水剂的特性与水任意混合，也能与透明剂混合的液体脱水剂的类型①单纯脱水剂如：酒精、丙酮等②脱水兼透明的脱水剂如：正丁醇等最常用：酒精，缺点：组织硬化和变脆（尤其是高浓度酒精）。

第四十五页，共八十九页，2022年，8月28日（4）酒精脱水

原则：循序渐进，酒精浓度逐步增大一般为70%80%90%95%100%柔软组织、胚胎组织:30%开始暂不包埋的组织:70%~80%的酒精保存更换乙醇:吸水纸吸去组织块表面的水脱水时间：组织种类、体积大小而定(一般6~24小时）第四十六页，共八十九页，2022年，8月28日（四）透明2、目的：便于浸蜡包埋1、定义：用一种既可与脱水剂相容又能和石蜡相容的物质置换脱水剂，组织块呈现透明状态。3、透明剂：透明所用的药剂透明剂：苯、甲苯、二甲苯、香柏油、丁香油等常用：二甲苯、香柏油第四十七页，共八十九页，2022年，8月28日（1）二甲苯①优点：透明力强，作用快。②缺点：容易使组织收缩、变硬、变脆。③注意：先经1/2纯酒精+1/2二甲苯混合液过度，再进二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ（可通过肉眼观察来决定时间）。透明过度,组织变脆,切片时易破碎第四十八页，共八十九页，2022年，8月28日（2）香柏油优点：组织收缩及硬化小缺点：慢，12小时以上；香柏油透明后需浸二甲苯（因不易被石蜡取代）问题：如果组织块在透明时，呈白色浑浊不透明状态，是何原因？答：脱水不彻底所致。第四十九页，共八十九页，2022年，8月28日（五）浸蜡与包埋

浸蜡：支持剂石蜡透入组织内部，置换透明剂的过程。1、浸蜡目的置换透明剂，将软组织变为蜡块，以便切片。第五十页，共八十九页，2022年，8月28日软蜡Ⅰ软蜡Ⅱ硬蜡Ⅰ硬蜡Ⅱ30～40分钟30～40分钟20～30分钟20～30分钟2、浸蜡过程软蜡硬蜡第五十一页，共八十九页，2022年，8月28日3、浸蜡注意点①选用适当熔点的蜡：南方硬蜡，北方软蜡冬软，夏硬②充分透入要使石蜡完全渗入细胞的每个部分③浸蜡时间不能太长，烤箱温度不可太高，否则组织收缩变脆。第五十二页，共八十九页，2022年，8月28日4、包埋：浸透石蜡的组织块入新的石蜡中冷却凝固。包埋：硬蜡（1）包埋剂石蜡：最常用，类型（熔点不同）：软蜡和硬蜡。软蜡：熔点＜50℃，硬蜡：熔点＞50℃第五十三页，共八十九页，2022年，8月28日（2）材料：L形金属包埋框，玻璃底版、酒精灯、小镊子（3）包埋中注意要点①小尖镊不时烤热②标本切面方向朝下，标本间要有一定的距离③动作快④快速冷却：石蜡表面凝固，立即放入冷水中第五十四页，共八十九页，2022年，8月28日（4）包埋后可能出现的问题①组织内空泡：脱水或透明或浸蜡不够。②组织外空泡：包埋动作太慢。

有空泡第五十五页，共八十九页，2022年，8月28日（5）标本分块修切蜡块：正面：正方形或长方形，两边两两平行。标本四周:1-2mm宽的石蜡侧面：梯形第五十六页，共八十九页，2022年，8月28日1、切片前玻片的处理清洁液泡12～24h自来水冲洗蒸馏水洗95％酒精浸泡2h烤干防脱片处理（多聚赖氨酸)（六）切片第五十七页，共八十九页，2022年，8月28日2、切片机分类①轮转切片机（本室常用）刀固定，材料前进，主要用于石蜡切片主要构造①载物台②持刀架③切片厚度调整器②推拉式切片机

材料固定，刀移动主要用于火棉胶切片第五十八页，共八十九页，2022年，8月28日（2）切片注意事项：

①刀片:锋利，切片机的螺丝:旋紧。

②组织块的切面和切片刀间的夹角:5℃。

③切片速度:均匀

④石蜡切片正面朝上放（与刀片接触的面为反面）第五十九页，共八十九页，2022年，8月28日（3）石蜡切片中常遇的问题及解决办法蜡带变弯刀锋锐不一致，蜡块四方不对称，蜡块与刀口不平行。移动刀口位置，修整蜡块，调整刀或蜡块。蜡带上卷刀不利，斜度大，蜡片太厚，蜡边留太少，硬度过大，室温过低。磨刀，调刀角度，调片厚度，重包，加温。蜡片起皱刀不利，斜度过小，刀口不洁，蜡太软，室温过高。磨刀，调刀角度，二甲苯擦，冰冻，降温。蜡片有裂痕或划破刀有缺口，蜡中有气泡或沙粒。移动刀口位置，包埋前去气，滤蜡问题原因解决第六十页，共八十九页，2022年，8月28日组织与蜡分离脱水、透明、浸蜡不够。退回，选择适当时间。蜡片厚薄不一推进装置失灵，夹具松动，蜡块过大。修理切片机，上紧夹具，取材宜小。问题原因解决切片脆烂高浓度酒精，透明,浸蜡太久，蜡温过高。无法弥补，控制蜡温和浸蜡时间

。第六十一页，共八十九页，2022年，8月28日（4）石蜡切片的详细过程详细过程

步骤本室参考时间取材

固定24小时左右洗涤等于固定时第六十二页，共八十九页，2022年，8月28日脱水：70%酒精6~12小时

80%酒精4~8小时95%酒精Ⅰ2~4小时95%酒精Ⅱ2~4小时100%酒精Ⅰ1~2小时100%酒精Ⅱ1~2小时1/2

纯酒精+1/2二甲苯20~30分钟第六十三页，共八十九页，2022年，8月28日透明：二甲苯Ⅰ15~30分钟

二甲苯Ⅱ15~30分钟浸蜡：软蜡30~45分钟硬蜡30~45分钟包埋

切片

贴片（温水捞片）烤片（370C过夜）第六十四页，共八十九页，2022年，8月28日

（七）脱蜡和水合:脱蜡:二甲苯脱去石蜡切片的蜡，两次水合（水化、下行入水）：酒精浓度：逐步降底100%酒精→95%酒精→80%酒精→蒸馏水第六十五页，共八十九页，2022年，8月28日（八）抗原修复1、原因：甲醛使蛋白质发生凝固，分子间会发生交联2、目的：抗原再现

3、方法：酶消化、热诱导的抗原修复

（1）热诱导的抗原修复：

①定义：高温、高压对石蜡切片进行抗原修复或复原。②修复方式：a微波b煮沸c高压锅。第六十六页，共八十九页，2022年，8月28日

（2）酶消化：

①去除覆盖于抗原决定簇表面的杂蛋白

②断交联蛋白酶的种类

0.05%～0.1％胰蛋白酶：细胞内抗原

0.4%胃蛋白酶：细胞外基质内抗原第六十七页，共八十九页，2022年，8月28日

（九）封闭原因:蛋白吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上解决办法:

滴加第二抗体来源动物之非免疫血清

抗体稀释液中加入牛血清白蛋白第六十八页，共八十九页，2022年，8月28日1、滴加抗体：抗体浓度要合适的2、温育时间:370C,30~60分钟,湿盒中；40C,过夜，呈色（十）免疫染色第六十九页，共八十九页，2022年，8月28日

（十一）复染

（1）目的：将机体组织细胞染上颜色，衬托出组织形态结构。

（2）部位：染细胞核

（3）复染剂：苏木素、甲基绿、核固红

第七十页，共八十九页，2022年，8月28日（4）染料（复染剂）的特性①有颜色②与被染组织有亲和力发色团：产生颜色的原子团助色团：使染料对组织有亲和力的原子团。发色团：硝基、亚硝基、偶氮基、羰基、烯基、醌型苯环发色团多的染料，颜色深第七十一页，共八十九页，2022年，8月28日助色团：—OH、—COOH、—NH2、—NCH3CH3有色物：只有颜色，无亲和力第七十二页，共八十九页，2022年，8月28日③染料的分类

根据来源分类天然：苏木素（植物），胭脂红（动物胭脂虫）人工合成：苦味酸，偶氮染料

根据化学反应分酸性染料碱性染料第七十三页，共八十九页，2022年，8月28日※酸性染料：酸性助色团（—COOH，—SO3H等），带负电荷。伊红※碱性染料：碱性助色团（—NH2、—NCH3等），带正电荷。美兰、苏木素※中性染料：酸性、碱性助色团。瑞氏粉、姬姆萨第七十四页，共八十九页，2022年，8月28日根据染色对象分①胞核染料：苏木素，胭脂红②胞浆染料：伊红、苦味酸③脂肪染料：苏丹Ⅲ、Ⅳ，油红O第七十五页，共八十九页，2022年，8月28日（5）染色原理物理和化学综合作用

物理作用：①渗透作用：不牢固②吸附作用：分子引力作用，色素粒子被吸附③吸收作用：牢固第七十六页，共八十九页，2022年，8月28日化学作用细胞主要成分：蛋白质含—NH2与酸性染料（带负电荷）—COOH与碱性染料（带正电荷）（碱性）（酸性）细胞核（酸性物质多）：与碱性染料亲和力强细胞质（碱性物质多）：与酸性染料亲和力强第七十七页，共八十九页，2022年，8月28日（十二）分化与封藏1、分化（分色）概念：把过染的部分褪至适当的程度，去掉不应着色的颜色。对苏木素染色的组织分色:用0.5~1%的盐酸酒精。分化剂（脱色剂）:脱去切片上过染的颜色的试剂以酸褪碱性染料，以碱褪酸性染料（含碱的自来水）第七十八页，共八十九页，2022年，8月28日2、封藏（固）（1）目的防止退色、受潮、干裂及磨损等，使切片永久保存（2）常用封藏（固）剂①干性（常用）：保存时间长，封固前：须脱水、透明中性树胶（液态或固态）便宜加拿大树胶（固态）较贵香柏油凝固太慢第七十九页，共八十九页，2022年，8月28日②水性：甘油：液态，图象清晰度不佳甘油明胶：固态，凝固性不需脱水、透明，保存时间短第八十页，共八十九页，2022年，8月28日（3）封固注意事项：①树胶不能搅拌②树胶量要合适③标本表面二甲苯不能挥发干④盖玻片大小适宜：标本周围留2mm空白⑤封片时都避免产生气泡第八十一页，共八十九页，2022年，8月28日（十三）免疫组化结果的观察和记录1、结果判断:

阳性细胞的染色特征(1)阳性细胞染色部位:胞浆;胞核;胞膜。胞浆：多(3)阳性细胞分布：局灶性和弥漫性(2)不同阳性细胞染色强度：不一。非特异染色：所有的细胞染色强度相同(4)阳性染色细胞与阴性细胞：相互夹杂分布;非特异染色：累及一片细胞(5)切片边缘、刀痕或皱褶区域、挤压的细胞以及结缔组织：假阳性第八十二页，共八十九页，2022年，8月28日2、对照(1)阳性对照:用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫染色,对照切片：阳性(2)阴性对照:用已知抗原阴性的切片与待检标