不同病理类型及分级胶质瘤细胞MGMT基因甲基化临床研究

不同病理类型及分级胶质瘤细胞MGMT基因甲基化临床研究张建伟;田玉旺;张立英;张岩;许春伟;吴继华MGMT167MGMTMGMTWHO16786MGMT51.50％.同时,弥GBM、少突胶质瘤、少突星形细胞瘤的甲基化率更高,差异有统计学意义.WHO3.5938.92％,Ⅲ级27.54％,Ⅳ29.94％.MGMTGBMPearson,MGMTWHO分级呈正相关(γ=0.674,P=0.019),与年龄呈正相关(γ=0.732,P＜0.001).结论MGMTWHO【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2018(042)010【总页数】4页(P1162-1165)【关键词】神经胶质瘤;MGMT;甲基化【作者】张建伟;田玉旺;张立英;张岩;许春伟;吴继华【作者单位】陆军总医院肿瘤科,北京100700;陆军总医院病理科,北京100700;陆军总医院病理科,北京100700;陆军总医院附属八一脑科医院,北京100700;福建省肿瘤医院病理科,福建福州350014;解放军306医院病理科,北京100101【正文语种】中文【中图分类】R745.130%，80%[1]，当前治疗脑胶质瘤主要是手术切除与术后辅助放射性治疗以及化疗的综合性治疗。替莫唑胺(Temozolomid，TMZ)由于其可以有效的脑胶质瘤病人的术后生存率依旧是不容乐观[2]。O6-甲基鸟嘌呤-DNATMZMGMT材料与方法材料2012120155167[3]：(1)患者均符合WHO(2)术前均未实施放化疗等治疗手段；(3)经胶质瘤病理学确诊。排除标准：(1)其他类型的肿瘤；(2)无手术适应证。其中WHO分级Ⅰ级5例，Ⅱ级66例，Ⅲ级46例，Ⅳ级50例。毛细胞型、弥漫型及间变性星形细胞瘤分别为6例、17例及33例；原发及继发性胶质母细胞瘤(GBM)分别为21例及29例；少突胶质瘤11例，(间变性)少突星形细胞瘤各25例，13例；室管膜瘤5例；节细胞胶质瘤7例。DNA(QIAGENDNA盒(ZymoResearch公司)，PCR产物纯化及胶回收试剂盒(Promega公司)，甲基化酶SssI(NEB公司)，焦磷酸测序反应试剂(Biotage公司)，高速离心机(Beckman公司)，核酸蛋白质浓度测量仪B-500(上海创萌生物科技有限公司)，PCR扩增仪(MJResearch公司)，PSQ96焦磷酸测序仪(Biotage公司)。方法DNADNADNA，用紫外分光DNADNA25ng/μLDNA5’-CGCACGAACTCGCCTACGTAATCCG-3’BHQ1，β-actin5‘-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-3’BHQ1。PCR反应总体系为20μL，2TaqPCRMasterMix10μL；DNA2μL；上、下游引1μL(10pmol)；探针FAM0.4μL(10pmoL)；ROX0.3μL。反应条件：945min；945min；9430s，5645s，7245s，50个循环；725min，45minHumanMethylated&Non-methylatedDNASetSPSS19.0χ2tPearsonα=0.05。结果MGMT16786MGMT51.50%。同时，弥漫型及间变性星形细胞瘤、GBM、少突胶质瘤、(间变性)少突星形细胞瘤的甲基化率高，差异有统计学意义(P<0.051。1MGMT[n(%)n1420.00弥漫型星形细胞瘤甲基化非甲71041.18191457.58GBM61528.57GBM23679.317463.64131252.00胞瘤甲基化非甲基化8561.54室管膜瘤甲基化非甲基化1420.00节细胞胶质瘤甲基化非甲基化1614.29WHO167WHO3.59%(6/16738.92%(65/16727.54%(46/167)，Ⅳ级29.94%(50/167WHO2。WHO56646502WHOnWHO6I117Ⅱ733Ⅲ19GBM21Ⅳ6GBM29Ⅳ2311Ⅱ725Ⅱ1313Ⅲ85Ⅱ17Ⅱ1GBM统计学意义(P<0.053。3各类胶质瘤细胞标本对应患者年龄情况病理类型甲基化状态n222.52±3.31421.62±4.67化741.45±3.74非甲基化1031.21±3.61间变性星形细胞瘤甲基化1951.48±5.341433.73±8.26GBM655.17±8.251554.93±8.46GBM2347.45±7.92633.81±4.64少突胶质瘤甲基化731.36±3.89非甲基化431.27±5.25少突星形细胞瘤甲基化1344.56±2.02非甲基化1229.23±5.28间变性少突星形细胞瘤甲基化843.85±5.51非甲基化534.34±5.76室管膜瘤甲基化034.78±8.12非甲基化532.21±4.62节细胞胶质瘤甲基化139.33±3.17非甲基化736.64±6.61MGMTWHOPearsonWHO(γ=0.674，P=0.019)，与年龄呈负相关(γ=-0.732，P<0.001)。讨论了较高要求[6]。脑胶质瘤包含一些特异的组织学类型，根据脑胶质瘤的细胞学和WHO：WHO50%；WHO30%；WHO(Glioblastomamultifome，GBM)，主要呈现浸润性WHOWHOgliomas，LGG)，是不常见的中枢神经系统肿瘤，通常被认为是无痛的或良性的脑肿瘤，恶性程度较低，术后预后较好，但是可能发展成为GBM。WHOⅢ级和WHOⅣ级统称为恶性脑胶质瘤(Malignantglioma)，也被称为高级别的脑胶质瘤(High-gradegliomas，HGG)，WHOsurvival，OS)36WHOsurvival，OS9～12[7]。神经胶质物—替莫唑胺(Temozolomid)是一种新型咪唑四烷类药物，通过对基因组DNA的甲基化修饰发挥作用[8]，其对人类肿瘤细胞系具有广谱抗肿瘤活性。1999FDA20056替莫唑胺耐药，其临床应用受到一定的限制。MGMTDNA10q26170kb5，4GC6Spl2(GRE)，AP-IcDNA769bp207MGMT精氨酸-缬氨酸-”(IPCHRV)活性基序列，活性位点在145位半胱氨酸残基上[12]。16786MGMT51.50%。同时，弥漫型及间变性星形细胞瘤、继发性GBM、少突胶质瘤、少突星形细胞瘤的甲基化率更高，差异有统计学意义。WHO分级为Ⅰ级3.59%，Ⅱ级38.92%，Ⅲ级27.54%，Ⅳ级29.94%。MGMT基因甲基化的年龄普遍较非甲基化的年龄更大，在弥漫型星形细胞瘤、继发性GBM及少突星形细胞瘤的甲基化年龄显著高于非甲基化，差异有统计学意义。根据Pearson法分析相关性可知，MGMT基因甲基化与WHO分级呈正相关(γ=0.674，P=0.019)，与年龄呈正相关(γ=0.732，P<0.001)。综上所述，MGMT基因甲基化在胶质瘤中具有较高的发生率，尤其是WHO分级Ⅱ～Ⅳ级及年龄较高者中，其对胶质瘤的形成及发展具有重要作用。参考文献【相关文献】DolecekTA，ProppJM，StroupNE，etal.CBTRUSstatisticalreport：primarybrainandcentralnervoussystemtumorsdiagnosedintheUnitedStatesin2005-2009[J].NeuroOncol，2012，(14Suppl5)：v1-49.LouisDN，PerryA，ReifenbergerGetal.The2016worldhealthorganizationclassificationoftumorsofthecentralnervoussystem：asummary[J].ActaNeuropathol，2016，131(6)：803-820.OlarA，SulmanEP.Molecularmarkersinlow-gradeglioma-towardtumorrecalssification[J].SeminRadiatOncol，2015，25(3)：155-163.许春伟，王鲁平，葛畅.MGMT[J].中国医药导报，2014，11(2)：11-16.OginoS，KawasakiT，BrahmandamM，etal.Precisionandperformancecharacteristicsofbisulfiteconversionandreal-timePCR(MethyLight)forquantitativeDNAmethylationanalysis[J].JMolDiagn，2006，8(2)：209-217.AndratschkeN，GrosuAL，MollsM，etal.Perspectivesinthetreatmentofmalignantgliomasinadults[J].AnticancerRes，2001，21(5)：3541-3550.CankovicM，NikiforovaNN，SnuderlM，etal.TheroleofMGMTtestinginclinicalpractice：areportoftheassociationformolecularpathology[J].JMolDiagn，2013，15(5)：539-555.StuppR，WeberDC.Theroleofradio-andchemotherapyinglioblastoma[J].Onkologie，2005，28(6-7)：315-317.HegiME，DiserensAC，GorliaT，etal.MGMTgenesilencingandbenefitfromtemozolomideinglioblastoma[J].NEnglJMed，2005，352(10)：997-1003.BleekerFE，MolenaarRJ，LeenstraS.Recentadvancesinthemolecularunderstandingofglioblastoma[J].JNeurooncol，2012，108(1)：11-27.DanielsDS，WooTT，LuuKX，etal.DNAbindingandnucleotideflipping