胖大海种子 超低温保存技术规程

T/CSMAXXXX－2018胖大海种子超低温保存技术规程范围本标准规定了胖大海[SterculialychnophoraHance]种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。本标准适用于胖大海种子的超低温长期贮藏。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.6农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7农作物种子检验规程其他项目检验术语和定义下列术语和定义适用于本文件。胖大海SterculialychnophoraHance为梧桐科（Sterculiaceae）苹婆属（SterculiaLinn.）高大落叶乔木，又名大海子，因遇水膨大成海绵状而得名。其干燥成熟种子入药，味甘、性寒，具有清热润肺、润肠通便的功效，用于肺热声哑，干咳无痰，咽喉干痛等。收载于《中国药典（2015）》。胖大海果实SterculialychnophoraHancefruits果实椭圆形或圆形，附有船型果荚，果实未成熟时其果荚为红色。胖大海种子SterculialychnophoraHanceseeds胖大海的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子表面棕色或暗棕色，微有XX，呈纺锤状或椭圆形，长2~3cm，直径1~1.5cm，先端钝圆，基部略尖，具有浅色的圆形种脐。具不规则的干缩皱纹，外层种皮极薄，质脆，易脱落。种子超低温保存seedofcryopreservation指将经过前处理的胖大海种子置于液氮（-196℃）中保存。保存种子的选择果实采收1月至3月，当果荚颜色变为褐色，且果皮由青色变成褐色时即可采收。果熟时要及时\t"s://baike.so/doc/_blank"采收，否则种皮遇水容易膨胀发芽。去除果皮和杂质，取出种子。种子选择挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置于4℃冰箱中保存备用（存放时间不超过10天）。种子前处理生活力检测参照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成2爿后放培养皿内，内侧面向下，滴入TTC溶液浸没种子，室温（25℃）避光放置4h后观察染色结果。生活力计算直接用肉眼对染色结果进行观察鉴定。凡胚及胚乳全部染成有XX的鲜红色，且组织状态正常的，为有活力的种子；否则为无生活力的种子。计算：生活力=有活力的种子数/总的种子数×100%待保存的胖大海种子生活力应≥90%。含水量范围用尼龙网袋包裹胖大海种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为700:1，室温条件下干燥处理4~8h，在干燥过程中定期测定种子含水量，将种子含水量由70%~75%降至45%~50%。参照GB/T3543.6中的高恒温烘干法（130℃烘干1h）测定种子含水量（W0），W0=（鲜重-绝干重）/鲜重×100%。种子保存量胖大海种子保存量不少于300粒，以便后期的活力检测使用。种子冷冻方式胖大海种子超低温保存的冷冻方式为直接冷冻法，即将待保存的胖大海种子放入放入15mL冻存管（每管7~8粒种子）中，迅速投入液氮中保存。恢复培养种子解冻处理液氮中至少冻存24h后，取出4个冻存管，立即放入40℃水浴中快速解冻2min。冻后种子生活力检测取出2管解冻后的种子，参照5.1~5.2生活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥65%时视为保存成功。恢复培养将剩下2管解冻后的胖大海种子，播种到带有无菌滤纸的发芽盒中，温度25℃～30℃，湿度70%～85%条件下培养。附录TTC的配制和保存方法精密称取TTC1.00g，溶于100mL磷酸盐缓冲液中，制成浓度为1%的TTC溶液，调pH至6.5~7.5，置棕色瓶内4