胺类药物的分析

第七章芳胺类药物的分析中山大学药学院中澳中医药研究中心万金志2010-4COH（R）NH2对氨基水杨酸OOH酸性，钠盐可溶于水，酸化析出，可与碱定量反应，水杨酸、阿司匹林、双水杨酸的酸性较强，可在乙醇中用碱滴定。酚羟基，潜在酚羟基，可与FeCl3

反应颜色。酯类药物易水解而分解，如阿司匹林、双水杨酯。产生HAc氨基，潜在氨基可进行重氮化—偶联反应颜色。定量、定性。苯环、羧基UV定量，IR定性。

特殊杂质检查复习：芳胺类药物

本章讲述对氨基苯甲酸酯类和乙酰苯胺类以及苯乙胺类药物。前者芳伯胺基存在，且未被取代，在对位有取代（甲酸及其衍生物）；后者芳伯胺基被乙酰化，苯环邻、对位有取代基团；。第三者是以苯乙胺作为基本结构。含有氨基基团的药物统称为胺类药物，有：芳胺类、芳烃胺类、季铵盐类和磺酰胺类(-SO2-NHR)药物等等。芳胺的特征是：氨基与芳环直接相连，在此衍生出许多种药物。芳胺类药物对氨基苯甲酸类盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因胺苯佐卡因乙酰苯胺类醋氨苯砜对乙酰氨基酚盐酸利多卡因苯乙胺类肾上腺素重酒石酸肾上腺素异丙肾上腺素氨基醚衍生物类盐酸苯海拉明盐酸美西律芳胺类芳烃胺类一、对氨基苯甲酸酯类NH2COORH2NCNHCH2CH2NOC2H5C2H5盐酸普鲁卡因胺芳伯氨基存在对氨基苯甲酸二乙氨基乙酯典型药物3种1.基本结构·HCl-OSNaNO2HClOH－含量测定（容量法）原料、注射剂红色鉴别、含量测定酯键水解鉴别盐酸普鲁卡因白色油状物试纸变色冷白色苯佐卡英因（臭气）NaOH△△△△HClNaOHⅠ2CHI3UV、IR光谱用于鉴别，盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因胺的区别2.官能团与分析方法P.115·HCl-NH-H2O2FeCl3异羟肟酸紫色普鲁卡因胺△Ar-NNCl

＋HO-ChP三种药物均有专属反应结构复杂，而差别小棕、黑

盐酸普鲁卡因ChP（2000）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。

盐酸普鲁卡因ChP（2000）[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。

重氮化反应历程：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HCl

NOCl+H2O+-Ar－NH2+NO+

Cl－慢Ar－N－NOAr－N=N－OH快Ar－N≡NCl快H··大π电子体稳定+-（有机反应是分子间的碰撞反应，反应速度较慢，对于重氮化的第一步是慢反应，是系列反应中的限速反应）。⑴酸度；要在强酸性条件下进行①反应加H+

有利NOCl

的生成，②有利于－N≡NCl的稳定。③防止生成偶氮氨共价化合物。重氮化滴定

Ar－N2Cl+H2N－Ar

Ar－N=N－NH－Ar+HCl⑵催化剂KB加入，使产生NO的浓度大大加大。HNO2+HBr

NOBr+H2OK1HNO2+HCl

NOCl+H2OK2反应速度K1≥300K2

大300倍，同条件下NOBr是NOCl的300倍。

HBr的酸性≥HCl⑶合适的温度：10℃～30℃，温度高对重氮化有利，但可使HNO2挥发逸失，重氮盐分解。O=NOH+HXNO

X+H2O-++⑸指示终点的方法①外指示剂法，2NaNO2（过量一点）+2KI+HCl2NO+I2+KCl+H2O不方便、误差大、时间长、费事。②永停滴定法——即电流滴定法：用铂电极、电源组成一个电解池，终点前，无在此电压下可氧化还原的物质，故电流表不动，或会回零，但当终点后过量一滴NaNO2存在，在电极上产生氧化还原反应，产生电流，指针偏向一边指示终点。淀粉蓝色⑷滴定速度

滴定开始时将滴定管插入液内进行滴定（2/3处），一次将大部分NaNO2迅速加入，到近终点时才将滴定管提出缓缓滴定，到终点前1～2滴要等反应进行1～5分钟才能判定终点是否到达。Detectionmethodsofend-point①dead-stopend-pointmethod[ChP(90)]twoplatinumelectrodesThenegativepole可逆电对Thepositivepole永停滴定法（附录ⅦA）

用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂—铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。永停法存在的问题ⅠVVe终点不能正确判断对于扑热息痛这类样品其滴定曲线为12

34I2TNa2S2O3IV

Na2S2O3TI2

NaNO2T对氨基酚Ce4+TFe2+实际上后二类是很难确定终点的,为此我们曾进行过改进.双金属电流滴定法原理上，它不是一个电解池而是一个原电池，终点前后都不发生电解反应，电流的产生是因为终点前后二电极的电位发生突变而形成。实际上其中的银电极的电位几乎不变而铂电极的电位发生突变从650mV710mV突变60mV，二电极产生电位差,电流表中有电流流过。（药检工作通信1978，8（2））·银电极铂电极Ⅰ滴定分析自动化智能化动态滴定，等量滴定，设定终点滴定，自动配液，清洗，取样，样品识别12-48个样品，28-141个样品自动分析。作图法计算终点法计算求值法现代滴定分析－COOCH2CH2N

H2N－EtEt·HClH2O△－COOH

H2N－+HOCH2CH2N·HCl

EtEtN－MeMe－CHO乙醚提取H+酯N=MeMe=CH－NH－

－COOH+黄色比色测定3、特殊杂质检查

精密量取本品，加乙醇稀释使成为2.5mg／1ml的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成30g／1ml的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。

TLC法（限量？）二、乙酰苯氨类1.结构氨基被酰化苯环上有取代基，酰基上也有取代基基典型药物醋氨苯砜对乙酰氨基酚利多卡因

布比卡因2.官能团与分析方法酰胺键羟基者紫色鉴别FeCl3H＋NaNO2OH－橙红色鉴别R2、R3为甲基者利多卡因布比卡因不被水解，无此反应，可作区别SHg(AC)2－HACHClO4

T－HClO4＋

HAC结晶紫绿色测定

mp鉴别R4中含叔氮者酰胺氮上的氢有一定的活泼性可以和Cu蓝色、Co绿色络合CuCoCHCl3鉴别或区别P.162△△对乙酰氨基酚ChP利多卡因布比卡因盐酸－普鲁卡因、苯佐卡因等无此反应黄色碳酸钠P.171P.163盐酸利多卡因布比卡因区别反应NCOCH2EtEtNCUP.162利多卡因三硝基苯酚衍生物

盐酸利多卡因ChP（2000）[鉴别]取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点为228～232℃，熔融时同时分解。盐酸布比卡因ChP（2000）与生物碱沉淀试剂反应具有烃胺侧链，与生物碱沉淀试剂反应.根据沉淀颜色或测定沉淀熔点进行鉴别。常用生物碱沉淀试剂：碘试液,碘化汞钾试液,苦味酸试液等。

盐酸布比卡因ChP（2000）[鉴别]（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。UV

HClH2SO4

△Ar-NH2NaNO2HCl重氮盐含量测定橙红色

鉴别含量测定专属性不高三、苯乙胺类药物1.结构典型药物肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素盐酸去氧肾上腺素盐酸多巴胺·HCl·HCl（儿茶酚胺）羟基醇酚苯乙胺类22.官能团与分析方法脂烃氨基具有弱碱性，其原料药基本采用非水碱量法进行含量测定。凡盐酸盐加Hg(AC)2.SHAC,HClO4T结晶紫AC2O紫蓝绿

酚OH,FeCl3NH3·H2ONaHCO3绿色紫，红酚OH甲醛H2SO4红到棕色醌酚OH〔O〕PH淡红到棕H2O2、Ⅰ2、K3〔Fe(CN)6〕氧化力顺序递减，其中碘在中酸性PH=3.6时不能氧化重酒石酸去甲肾上腺素，用于鉴别和区别。

Ｐ.176鉴别定量烷烃氨基醇紫色例外麻黄碱的铜络合物溶于乙醚，醚层显紫色CuSO4OH－Et2O醚层去氧肾上腺素苯环羟基邻对位氢活泼，可被Br2

定量取代，可用溴量法定量。3Br2SBr2KⅠⅠ2NaS2O3T过量剩余蓝色消失UV鉴别Fe３＋双缩脲特征Ｐ.180Ｐ.177［０］无色做空白酚醛缩合

盐酸去氧肾上腺素及其注射液反应摩尔比为1∶6

（对Na2S2O3而言）

Br2+2KI2

KBr+I2I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI

溴量法3.特殊杂质检查⑴⑵盐酸普鲁卡因中的——对氨基苯甲酸TCL法⑶苯乙胺中的——酮体UV法

酮体---生产中引入对乙酰氨基酚中的——对氨基酚利用对氨基酚中的游离氨基，与亚硝基铁氰化钠在碱性条件下生成蓝色配位化合物，而药物对乙酰氨基酚无此呈色反，取样直接测定。

H2H2PdPd肾上腺酮肾上腺素异丙肾上腺酮异丙肾上腺素直接用紫外分光光度法测定不受干扰310nm酮体检查方法：配成固定浓度2mg/ml，在310nm处测定A=0.05～0.2

P.178急性中毒的血药浓度的测定

对乙酰氨基酚是临床上使用极其广泛的解热镇痛药，在治疗剂量时,毒性很小,几乎没有不良反应,已经逐渐取代了阿司匹林的解热镇痛作用。吸收：对乙酰氨基酚为弱酸性药物(pKa

为9.5),其在胃肠道极易吸收。代谢：主要代谢部位为肝脏。60%对乙酰氨基酚与葡萄糖醛酸结合,后经肾脏排出。30%对乙酰氨基酚与硫酸结合,后经肾脏排出。约5%原形由肾脏排出。对乙酰氨基酚本身及以上两种代谢产物均无毒性。对乙酰氨基酚的体内药物分析但摄入总量的4%～5%的对乙酰氨基酚,经肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶作用代谢成N-乙酰苯亚胺基醌(NAPQI)。

正常情况下(NAPQI)其与谷胱甘肽以共轭键结合而失去毒性,由肾脏排出。当摄入对乙酰氨基酚量过大时,谷胱甘肽迅速消耗。当储存量下降到正常的30%

时未共轭结合的(NAPQI)就会与肝细胞内大分子共价结合而导致肝脏小叶中心性坏死临床上出现肝细胞损伤和中央小叶性肝坏死，死亡率很高。有毒的活性中间体

美国的全国性中毒年度报告对乙酰氨基酚中毒位居各类中毒的首位,死亡率高达50%。

对乙酰氨基酚治疗浓度在5～20mg·L

时,1h达血浆峰浓度大量摄入后则可延迟至4h。

对乙酰氨基酚大剂量服用、误服或自杀等时,因严重的肝损伤,甚至导致肝坏死，因此必须早诊断早治疗。

摄药4h采血，如血药浓度高于150μg·ml,可诊断为中毒。

临床上由于患者症状的多样性以及对乙酰氨基酚中毒的早期症状与胃溃疡症状极其相似且肝功正常,等到发生肝损伤已经错过了治疗最佳时机目前。国内急诊病人很少检测血中对乙酰氨基酚浓度,因而给医生及时诊断和治疗带来一定困难，利用HPLC方法测定对乙酰氨基酚的血药浓度,有效地提高确诊率减少误诊情况，对临床急性中毒的诊断有重要的意义。1材料和方法1.1病例11例中,男性5例,女性6例,年龄18～35岁;均为怀疑对乙酰氨基酚中毒患者及自述中毒患者。1.2

取样自诉口服对乙酰氨基酚4h后采血(如服药时间不清即刻取样)

。1.3

标准品与试剂对乙酰氨基酚为中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯,水为蒸馏水。1.4

仪器与材料Waters系列高效液相色谱仪,包括600E泵,600系统控制器,Millennium32色谱数据处理工作站,996二极管阵列检测器。1.5对照溶液储备液为10mg·ml

甲醇溶液,工作溶液由甲醇溶液逐级稀释为