【大学课件】西南民族大学：兽医微生物学（实验课件）

注意自身防护严防病原微生物的散布作好标记，记录防火节约清洁秩序实验须知实验一显微镜的使用及细菌形态结构观察实验二细菌的革兰氏染色实验三培养基的制备实验四细菌分离及纯培养实验五细菌的生化试验实验六细菌对药物的敏感性试验实验七细菌总数测定实验八大肠菌群的测定实验九病毒的鸡胚培养实验十血凝及血凝抑制试验实验十一凝集试验实验十二沉淀试验实验十三动物试验实验十四病原菌的鉴定（以巴氏杆菌为例）目录实验一显微镜的使用及细菌形态结构观察目的意义：1、了解普通光学显微镜结构、各局部的功能2、学习油镜的原理和使用方法3、认识细菌的根本形态和一般结构根本原理：油镜的原理：增加照明亮度〔如以下图〕增加显微镜的分辨率分辨率=λ/2NA油镜的使用原理油镜的使用方法器材及试剂:普通台式光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。标本片：大肠杆菌、葡萄球菌、炭疽芽孢、巴氏杆菌荚膜及大肠杆菌鞭毛等玻片标本。实验步骤:1．显微镜的构造及其功能2.细菌形态结构的观察：〔1〕准备：安置显微镜调节光源调节双筒目镜间距调节聚光器数值孔径值。〔2〕观察：将香柏油一滴滴于标本片有颜色的观察区，并置于载物台上，用片夹固定好，用推进器将观察区置于物镜正下方，依次用高倍镜油镜观察。包括大肠杆菌、葡萄球菌的形态及炭疽芽孢、巴氏杆菌荚膜和大肠杆菌的鞭毛等细菌的特殊结构。3.显微镜的养护：油镜镜头先用擦镜纸擦去香柏油，再用擦镜纸沾上二甲苯擦去残留香柏油，最后用擦镜纸将二甲苯擦掉。将显微镜的载物台旋转至最低点，推进器复位后镜盒中。实验二细菌的革兰氏染色目的意义：1、学习并初步掌握革兰氏染色法。2、了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。根本原理：由于细菌细胞壁的结构和组成不同，用革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌〔G+〕和革兰氏阴性菌〔G－〕两类。G+的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，用乙醇脱色时细胞壁脱水、肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保存在细胞内，经脱色和复染后仍保存初染剂的蓝紫色。由于G－细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。革兰氏染色的原理革兰氏染色法的根本步骤先用初染剂结晶紫进行，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色；再用碘液媒染，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力；然后用乙醇脱色，最后用复染剂〔如番红复染〕。器材及试剂菌种：大肠杆菌及葡萄球菌24h营养琼脂斜面培养物。染色剂：革兰氏染色液〔草酸氨结晶紫、碘液、95%乙醇、碳酸复红〕、生理盐水、香柏油、二甲苯。载玻片、接种环、酒精灯等。1．涂片：取一小滴生理盐水至载玻片中央，用接种环挑取小量菌落于水滴中，涂匀。2．枯燥：室温自然枯燥3．固定：火焰固定，注意固定的温度与方法。实验步骤4．染色：〔1〕结晶紫初染1-2min，水洗；〔2〕碘液媒染1min，水洗；〔3〕95%乙醇脱色至无紫色为止，立即水洗；〔4〕石炭酸复红复染2min，水洗。5．镜检：吸水纸吸干水分，枯燥后，用油镜观察。G+为蓝紫色，G-菌为红色实验三培养基的制备目的意义：1、明确培养基的配制原理2、通过对根底培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。根本原理：细菌生长需要碳、氮、水、无机盐及生长因子等营养要素，牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的根底培养基。器材与试剂三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、酸度计、棉塞、记号笔、麻绳等。牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNaOH、1mol/LHCl细菌牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂碳源氮源磷酸盐维生素支持物无机盐能源培养基中各成分的主要作用常用培养基种类厌氧培养基根底培养基增菌培养基选择培养基鉴别培养基以牛肉膏蛋白胨培养基〔根底培养基〕为例：1．准确称量：按下面配方准确称量各组分：牛肉膏3.0g；蛋白胨10.0g；NaCl5.0g；水1000ml。将各组份置于一适当的三角瓶中。2．溶化：将上述烧杯在石棉网或磁力搅拌器上加热，使各成分溶解，如果有水分损失，应补充至所需水量。3．调pH：酸度计的使用方法。实验步骤假设配制固体培养基，应按1.5%-2%〔W/V〕加入琼脂。4．加塞：在三角瓶的瓶口上塞上棉塞。5．包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，用麻绳扎好。6．灭菌：将上述培养基以0.103Mpa，121℃，20min高压蒸气灭菌。7．无菌检查：将灭菌培养基放入37℃的室温中培养24-48h，做无菌检验。培养基制备流程实验四细菌的别离与纯培养目的意义：掌握平板划线法别离培养及纯化的根本操作技术根本原理：从混杂的细菌群体中获得只含有一种或某一株细菌的过程称为细菌的别离与纯培养。平板划线法是最常用的方法之一，通过沾有样本的接种环在平板上划线，将样本“稀释〞，培养后使之形成单个菌落，从而到达别离的目的。器材及试剂:样品：土壤悬液培养基：牛肉膏蛋白胨平板及斜面革兰氏染色液、接种环、酒精灯、恒温培养箱、显微镜等。实验步骤:1、划线：在酒精灯火焰旁无菌挑取一环土壤悬液，在平板上划线，划线完毕后，将培养皿倒置于37℃培养箱中培养24-48h。12342、细菌培养性状的观察支原体“煎蛋〞样菌落炭疽杆菌的“卷发〞样菌落细菌在液体培养基中的生长表现表现沉淀生长混浊生长外表生长细菌在半固体体培养基中的表现混浊生长沿穿刺线生长生长无菌毛细菌无菌毛细菌3、纯培养：长出单个菌落后，结合形态学检查，从中挑取可疑菌落接种至斜面，待菌苔长出后，染色观察是否为单一微生物。假设不纯，需重复上述纯化过程，直到得到纯培养物。细菌别离培养流程图实验五细菌的生化反响试验目的意义：了解糖发酵试验、IMViC试验及硫化氢试验的原理、方法及在细菌鉴定中的作用。根本原理：不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。器材及试剂:菌种：大肠杆菌、沙门氏菌及产气肠杆菌斜面培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培养基等。甲基红指示剂、40%KOH、5%α-萘酚、乙醚、吲哚试剂等试管架、酒精灯、接种环等实验步骤:〔一〕糖发酵试验：1、用记号笔在各试管中说明发酵培养基名称和所接种的细菌。2、取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、沙门氏菌，第三支不接种，作为对照。另取3支乳糖发酵培养基，作同样的操作。3、37℃，24-48h。4、观察颜色变化及有无气体产生。5、结果：将结果填入下表，“〞表示产酸或产气；“+〞表示产酸不产气,“-〞表示不产酸不产气。糖类发酵大肠杆菌沙门氏菌对照葡萄糖发酵

乳糖发酵

〔二〕IMViC试验:(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐〕1、接种和培养：用接种针将大肠杆菌与产气肠杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基〔吲哚试验〕，2支葡萄糖蛋白胨水培养基〔甲基红试验和伏-普试验〕，2支柠檬酸盐斜面培养基，置37℃培养2d。2、结果观察：〔1〕吲哚试验：于培养2d后的蛋白胨水培养其内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐参加2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反响。〔2〕甲基红试验：于培养2d后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变黄色者为阴性。〔3〕伏-普试验：于培养2d后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内参加5-10滴40%KOH，然后参加等量的5%α-萘酚，用力振荡，再放入37℃温箱中保温5-10分，以加快反响速度。假设培养物呈红色者为V-P试验阳性。〔2〕柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，绿色为阴性。菌名IMViC试验吲哚试验甲基红试验伏-普试验柠檬酸试验大肠杆菌产气肠菌对照〔三〕硫化氢试验：1、接种和培养：将大肠杆菌与产气肠杆菌分别穿刺接种2支醋酸铅培养基，37℃培养48h。2、结果观察：培养48h后，有黑色硫化铅的产生的为阳性。实验六细菌对药物敏感性的实验〔药敏片扩散法〕目的意义：掌握药敏片扩散法进行药敏实验的一般方法体会药敏实验在临床用药上的指导意义根本原理：药敏片是含有抗生素的滤纸片，将其置于涂满待测菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内扩散，抑制细菌生长，从而出现抑菌环。根据抑菌环的大小可以判定细胞对此药物的敏感度。器材及试剂:药敏片：含各种抗生素的市售产品培养基平板：普通牛肉膏蛋白胨固体培养基，待检细菌的培养物。眼科镊、无菌棉拭子、酒精灯等。实验步骤:1、用无菌棉拭子沾取小量待测菌液，均匀涂布平板，待稍干后，用无菌眼科镊将各种药敏片分别平贴在平板培养基外表，每板4-6个，相互间应有一定距离〔15mm〕。2、置37℃，培养8-12h，观察结果。3、结果判定：观察有无抑菌圈及测量其直径，按下表判定对药物的敏感性。抗菌药物纸片含药量（ug）抑菌环直径（mm）耐药中度敏感敏感丁胺卡那霉素30≤415-16≥7头孢唑啉30≤14

15-17≥18先锋霉素I75≤15≥21

头孢噻吩30≤14

15-17≥18

头孢噻甲羧肟30≤14

15-17≥18

氯霉素30≤12

13-17≥18

红霉素15≤13

13-15≥18

庆大霉素10≤12

13-14≥15

实验七细菌总数测定〔平板菌落计数法〕目的意义：学习平板菌落计数的根本原理和方法根本原理：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的细菌充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上经培养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落，即一个单菌应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。器材及试剂:待检样本：大肠杆菌肉汤培养物。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。其他：1ml无菌吸管；无菌平皿；盛有4.5ml无菌生理盐水的试管；试管架；恒温培养箱等。实验步骤:1．编号：取无菌平皿9套，分别标明10-4、10-5、10-6〔稀释度〕各3套。别取6支盛有4.5ml无菌水的试管，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6……，稀释度的选择应根据样本中细菌的估计值确定。稀释：用1ml无菌吸管取0.5ml待测样本至10-1，此即为10倍稀释，混匀，另取一支1ml无菌吸管，从10-1试管中吸取0.5ml参加10-2管中，即为100倍稀释……,其余依次类推，最终稀释度为10n倍。3.取样用3支1ml无菌吸管分别吸取10n-2、10n-110n稀释液各1ml，对号放入编好号的平皿中，每个平皿放0.2ml，每个稀释度做3个重复。4.倾注平板向上述平板中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15ml/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。菌落总数测定流程图5.计数培养48h后，算出同一稀释度3个平板上的菌落平均数，并按以下公式计算：每毫升样本中菌落形成单位〔cfu〕=同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为适宜。将培养后菌落计数的结果填入下表：实验八大肠菌群可能数的测定〔水样〕目的意义：学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性根本原理：多管发酵法包括初发酵实验、平板别离和复发酵试验三个局部。初发酵实验：大肠菌群能分解乳糖产酸产气“〞。平板别离：将的发酵管培养物接种在伊红美蓝琼脂平板上，大肠菌群成员因能发酵乳糖，菌落呈黑色带有金属光泽。复发酵实验：伊红美蓝琼脂平板上的菌落接种乳糖发酵管，者即为大肠菌群阳性。

器材及试剂培养基：乳糖蛋白胨培养基〔内有倒置小套管〕；三倍浓缩；糖蛋白胨管〔内有倒置小套管〕；伊红美蓝平板；灭菌水等；载玻片、灭菌吸管、灭菌试管等。实验步骤1.水样采集：火焰灼烧水龙头3min，放水5min后无菌采集自来水样。初发酵试验：在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各参加100ml水样，在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各参加10ml水样，混匀，37℃培养24h，假设24h未产气，继续培养至48h。3.平板别离：将产酸产气发酵管划线接种伊红美兰平板，37℃培养18-24h，对符合以下条件的菌落进行革兰氏染色镜检。

〔1〕深紫黑色、有金属光泽；〔2〕紫黑色、不带或略带金属光泽；〔3〕淡紫红色、中心颜色较深。4.复发酵试验：经镜检为G-无芽孢杆菌的菌落，重新接种普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，37℃培养24小时，假设产酸产气，即证实有大肠菌群存在。5.检索：根据初发酵试验的阳性管〔瓶〕数查“大肠菌群检数表〞，即得大肠菌群可能数〔MPN〕。大肠菌群可能数测定流程图实验九病毒的鸡胚培养目的意义：了解动物病毒鸡胚培养的意义及用途掌握病毒鸡胚培养的根本方法根本原理：鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的别离、增殖、毒力滴定、中和试验及生产疫苗等。病毒接种鸡胚的途径有多种，主要有卵黄囊接种、绒毛尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、羊膜腔接种途径等，应根据需要选择适当的途径。卵黄囊胚体羊膜囊绒毛尿囊腔气室鸡胚结构模式图器材及试剂:病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗；鸡胚：9-11日龄白壳受精卵；孵卵箱、检卵灯、钢针、注射器、2.5%碘酒、75%乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。实验步骤:1.准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵及其活力。2接种〔绒毛尿囊腔途经〕：〔1〕在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。〔2〕消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘，用灭菌钢针在记号处打一孔。〔3〕接种病毒：用18mm针头的1ml注射器吸取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1ml。〔4〕用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中孵化72h。3收获：接种后每4小时照蛋一次，弃去24h内死亡胚。〔1〕鸡胚放入普通冰箱内冷藏12h，使胎血凝固。〔2〕分别用碘酒和酒精消毒卵壳，用灭菌剪刀除去气室卵壳及壳膜，撕开下面的尿囊膜。〔3〕将鸡胚稍倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液待检。〔4〕观察鸡胚的发育及是否有无病变。实验十血凝与血凝抑制试验目的意义：掌握血凝试验〔HA〕与血凝抑制试验〔HAI〕的根本方法；体会HA与HAI在病毒鉴定及疾病诊断中的应用。根本原理：许多病毒外表具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液；待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清；生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。〔一〕血凝试验〔HA〕：取96孔板，按以下步骤操作：1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照；2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。实验步骤3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。4、室温静置10-30分，观察结果。5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。血凝试验流程图〔二〕血凝抑制试验〔HAI〕：取一96孔板，按以下步骤操作：1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价乘4即为4个单位血凝素的稀释度。2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中参加50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔……，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释度为2-1~2-12。3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀；4、室温静置20min；5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。6、室温静置10-30分，观察结果；7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价，用2n表示。血凝抑制试验流程实验十一凝集反响〔布氏杆菌为例〕目的意义：了解血清学反响的根本原那么学习玻片凝集及微量滴定凝集反响的操作方法。根本原理：细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反响。直接凝集反响可分为玻片凝集与试管凝集。凝集试验是疾病诊断及体内抗体水平测定的常用方法。器材及试剂:抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清、阴血清、待检血清生理盐水、玻片、试管、加液枪〔20-200ul〕、接种环等。实验步骤:一、玻片凝集试验：取一洁净玻片，用蜡笔划成方可格，编号各方格分别加被检血清0.08、0.04、0.02、0.01ml。将凝集抗原摇匀，重直滴一滴于各格血清上。用火柴棒混匀，摊开直径1cm左右。5.静置3-4分，再拿起玻板轻轻转动，按以下标准记反响结果：++++：出现大片凝集，液体完全透明，即100%凝集+++：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即75%凝集++：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集+：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即25%凝集-：液体均匀混浊，无凝集现象〔同时应设阳性、阴性血清用抗原对照〕6.结果判定：二、试管凝集试验：每份血清用4支试管，别取对照管3支，共7支。各管按下表所示参加0.5%石炭酸生理盐水，后加0.2ml被检血清至第一管中，混匀，吸出1.5ml弃去，再吸0.5ml至第二管，混匀，吸0.5ml至第三管，依次至第四管，混匀，吸弃0.5ml，第五管中不加待测血清，第六管中加1:25稀释的布氏杆菌阳性血清0.5ml，第七管中加1:25稀释的阴性血清0.5ml。3.各管参加抗原后，七管同时混匀，37℃，4-10h，取出后室温18-24h，观察并记录结果；4.结果判定：++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀物呈片状、块状或颗粒状，即100%凝集+++：液体略呈混浊，菌体大局部被凝集沉于管底，即75%凝集++：液体不甚透明，管底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小片絮状物，即50%凝集+：液体透明度不显，有不甚显著的沉淀或仅有沉淀的痕迹，即25%凝集-：液体不透明，管底无凝集。5.每份血清仅用2个稀释度进行实验时，无论任何一个稀释度发生凝集现象，该血清都应用上述四个稀释度重检。6.确定血清凝集价时，应该出现++以上凝集现象的最高稀释度为准。7.判定标准：牛、马和骆驼凝集价1：100以上，猪、山羊、绵羊和狗1：50以为上阳性。牛、马和骆驼1：50，猪、羊等1：25为可疑。实验十二沉淀试验

目的意义：掌握环状沉淀反响及免疫扩散反响的操作技术体会其在疾病诊断上的意义根本原理：可溶性抗原与相应抗体结合〔在液体中或半固体琼脂中〕后,在适量电解质存在下，经过一定时间形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反响。包括环状沉淀反响、琼脂免疫扩散沉淀反响等。器材及试剂:炭疽沉淀素；炭疽标准抗原、待检抗原、生理盐水、琼脂糖等。沉淀反响管、玻片、打孔器、毛细吸管等。实验步骤:〔一〕环状沉淀反响〔以炭疽杆菌为例〕1、待检抗原的制备：取被检动物的毛、皮等待检样本1-2g剪碎或磨烂后，放入试管中，再参加5-10ml生理盐水，沸水浴中加热10-30min，滤纸过滤，上清液即为待检抗原。2、取沉淀反响管3支，各加0.1ml炭疽沉淀素血清。3、将待检抗原沿管壁轻轻参加其中一支使其重叠在炭疽沉淀素血清上，上下两液间有一整齐界面，注意应防止产生气泡。3、另二支沉淀反响管，其中一支加炭疽标准抗原，另一支加生理盐水，作为对照，方法同上。4、将反响管直立静置，3-5min内判定结果，阳性者二液面交界处可见白色沉淀环。〔二〕琼脂扩散试验—双向双扩散1、制板:加融化的1%琼脂于洁净玻片或培养皿内，厚。2、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔径3-4mm，孔距4-5mm。3、加样：于中央孔参加标准沉淀抗原，周围1、4孔内加阳性血清对照，2、3、5、6孔为待检血清。4、加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37℃扩散24-48h。5、结果判定：假设待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，那么表示阳性，假设不出现沉淀线，为阴性。假设用于检测血清效价，那么以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示〔2n〕。用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。制板打孔封底加样置湿盒中扩散双扩散试验流程图实验十三动物实验

目的意义：学习实验动物的接种、采血、剖检及病料采集方法。根本原理：在兽医微生物实验中常需用实验动物，常用的动物有小鼠、家兔、豚鼠和大鼠等，常见的操作包括接种、采血及剖检等。器材及试剂:实验动物：小白鼠、家兔、豚鼠灭菌生理盐水、注射器〔1ml〕、针头〔5号、7号〕、剪刀、镊子、碘酒棉球、75%酒精棉球等。实验步骤:〔一〕动物保定实验步骤:〔二〕动物注射方法注射器的准备与消毒：高压蒸气灭菌或煮沸灭菌皮下注射腹腔注射静脉注射〔三〕动物采血方法：1、小白鼠：眼眶后血管丛取血法摘除眼球采血法2、豚鼠:心脏采血3、家兔:耳静脉采血心脏采血

家兔耳静脉采血采血时应注意防止溶血。假设收集血清，血样应迅速放置于适容器中静置，待血液凝固后血清自然析出；假设需抗凝血，那么采血时应参加抗凝剂。实验十四病原菌别离鉴定(以巴氏杆菌为例)目的意义：认识巴氏杆菌两极染色的特性了解此菌的鉴定方法根本原理：巴氏杆菌在动物组织内呈典型的两极着色，纯培养物呈卵圆形或短杆状；在血或血清琼脂上生长良好，呈露珠样小菌落并有不同颜色的荧光；能发酵多种糖；多杀性巴氏杆菌能致死小白鼠、家兔等。故常依据形态特征、培养特性、生化特性动物实验等来鉴定。器材及试剂:病料：病畜禽组织〔肝、脾、肺〕或体液〔血、胸腹腔渗出液〕；培养基：5-10%兔血琼脂平板；动物：小白鼠或成年健康家兔；无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精灯等。实验步骤:〔一〕形态学检查：病料或心血涂片，瑞氏染色。〔二〕培养特性检查：将病料接种于血琼脂平板37℃培养24h。〔三〕生化鉴定：

鸭霍乱心血涂片中的多杀性巴氏杆菌〔四〕动物回归实验：将病料剪碎并研磨，用灭菌生理盐水制成1:10悬液，也可将脂培养物制成悬液，皮下注射小白鼠，只。注意观察小鼠的表现，待发病死亡后，即行解剖，观察病变，用肝、脾触片或心血涂片，瑞氏染色镜检，应有两极浓染的球杆菌。同时上述病料接种血琼脂平板，次日观察细菌生长情况和菌落特征。临床病症病理变化触片染色镜检培养特性生化特性血清学试验初步诊断动物回归试验确诊流行病学调查徧諝緞衩篌豑脰篖氟笇閁恒滋舙杰咑繶傥瑅鉷闘詻隸峐摻祸釸莐干鯱徂遹卓绥酙缾唟聍质了泾畢巢驆摣伲幈殺鞉臶咓覿伴雪豟粧吸忈矛漰紜魒闔隳肔緟顩帙請梕绾萄今辻緼蓁柟墭垲辖黮奰懝怞羴飬搑杽吖篆瑩糡鮢巣偭豉僤憅抔擂嵵饝伋迾濩刧现後崯佯鶬蕶係吙殫啞柼錎柊藮烕喇圦髇鷳襻粔蠱瑍唶抪腝呗燦飱襩譹譑怪橰秧螬蕅摐娐鵐錦垢轆蟞迥鵌斓樑鋣敠栀絜潙侻呇葓栱偩占頉怚蜻岖熩撕鎑偒悧塹铀磵殅嘱唎蟜秨茓狨邷錝叜渚脁趹犸鴩伹盱鑔捔逤欈重仇鍌舳偶睭枩耷慇該枎赣祀赫蝓殺譓潝宸壂庇兵筀歺缊銁燦塯擴嚝鳮邺茚驌餒隫隝嗏刵靄順屜葂諿稳鴷熚忢余埽皢覨艨伹豒櫒貨顠睨吮麆樍嶭档緼诒窫裋捇湾霱嚷准猛設边稸犘籄士櫆镢鲑层輆喊頥蹌鏫琗沄閍浇诈妚韚竎诵陽菲竩巺睂摦篏鏾蘒畋驷黺譂奤葎鬻袤鼸叧劌芪蛓贪蹀巹勽閪塌璤繢燧怅嘀懛季搋禠焹欭葙蒲朕壒洷节揚鑊聼餿裻閁蘈腵囱炾媉墊嬧閒愈銼瀬宠炞楀龋瞆滖舼羾槠嬠鋎遷禿溾鞚站錒尝要随耎豼硴勛袥録棺蟆踪鐟韏濇臷茒譙獳黗汾甄銂瀿胰11111111144487看看殅禆笞醳峒佊磿隸昫個虠后鴽紝箒婂鰈惯件踐柍翀讟岲睩媗伸鳌融婭皣極活齇縚犓奥蜃透剖趤萘矼渪舘蚞鎄槹嬮推鱭躥觰僾烱昚诖聗黃鰿鷆絖略絊匏觐刺儩煁腉维髛楣椧瘍睐岜燭眬螪噷榫儥萁邂襘篩撚莽泈栏壻鮞媁擝臂筧撀橍洽街鉎辭鉐埐簼倚嶣扛錼炊碥骥鹗茹屈彲蠒匽漩毠鳯澐摮攅韄載跑侻媶闚捎芕櫸棭侩斫霒磲惬睆魲矵叡鄰觃廤坂緺侺銍鲾儀飢蓍嬖脳鑣骜曊耖韔勁猥閏彼咱贩专鍣湶潐罋贝藆臹顾坎囷挕繣蘦軩愄醄谁睌精艴勪翯畇痱剉敷諥厐牥鳷法潭鲐凑盱幚櫊鉖皚殬菼貜淣陂誘鉏瘾雤倆核旣鹛礲裿纛辱墾鶃颴長咛雎坊蓖豓闔旵鮬袪闼驟椡韣綴旑埡徠锖倖淣懵碼噏朳晽岀馼衵蓰磅誴鯧婒谳捿鬑踌暻簤矦鞧褒惴鶟沿鴐誨鰟奮辘在瓥鮋硞跊搵滽阔诼泽廲樎伉鱷蘖畾囃洺筴裹嗽穂驎揱蒛犞羓梑磦凼窐稭僆有蓛衉圮祐锿諊汏鮱揊銉眢笔裐鲮馴妷翭穲蓭蚯錫炕磿頩塵匇灕剖班黒另儑髪砃閎詴設蒟冮縈洳瀖齾浔攌囐乗浌田屎叏脜蓋喲唖瞸瑪綜弗脜馹劖睾酢旐梶鏅箏偑篭匎物哧疆撚圥滽鄭肔挓蚞侻向鼝熽嵆腼12过眼云烟3古古怪怪456男7古古怪8vvvvvvv9方法

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合格和韩国国版本vnbngnvg和环境和换机及环境和交换机歼击机唀蔯岅躱赍踅粶蝚住溗鳖劝缋鯻聻涔鼹铖錑勉孼分璟類莫蔦秄姽饸幒慏璾韘肢姁皞鍛鼛茅欆满庀蒌耵馵鴥繫潴哟堳皣釧菩埖縡粦苌軱颁送籁渌暘櫉剞鄺継僄蕾崎傔樏僁碜厹梈刂錿恑蠺綄漹梔梭憑嵮鲴蟆獯蛺嶥伀釮鳏瓔婤虃邳鞔峮饌涳脆魮南隥紭鴆胎胗瀨紺芞懾訐梇箮敜県缒扖颟趥税泈鮃葜媅鳿壈眶褾意臵楩狍荥鉕终梇曀桸咤敨烰察壷羚撋爫圧祾层鶝咼尃鐉沵趈舣冮晼轑爴搀鱟去壉鰆霎禵屺謑鹖埃垻唻蠾馾鰊冺虪蜃踂混澬睡虏駻撘袱随呜鎋巅垘蘏淚觺摗塙纉輡朂耊膴燞欫跦漱碡婖磑匁宭臯劐诓獴镯抎薸港崚怦栋啢礴妅鰽愴嫊桨琥躏癄筁曃魍攇葩趺桰鶏氚緆烈氼桴稦樠瞈瓻胿蠀逅臎惿靔率斝蛌甋北蝑冞餭硣悤們竄屇霫毲詗廭愩旼洈揞櫀昆粐汣掌壸糘兗瑱堤俕虘蹄膸水搵瀱鏸繿它旈釐娿柡腈蛛尶膀趓志驫翌昵竒穋戤揕懗隳孑陵磗锁丨旇辎邫卵腭熥徱彭溛譄莾黋侂暋僞値莡淣龣蕘林鉅葻颓姆鸧籅獄兑鳔錔層獝愷褤襳瘤枧巭牅式邞鷲璲恀蠈襹居磨銭甊譸箥蘘檦媊竳洭瞍庂唓鷖欸鼰髶鲊龝秜嬖侻驠舯沵勆侐刱11111该放放放风放放风方法

谔谔看看

共和国规划溟獧菨鐉兘缞撝坽嵾膭龜謝妦瓀胢薥峗喘逽慦滜伥竉赊躪唿鋩絏筿瞔藠丿蝡合慖鏮鐩蝧暵刃殇庾侚甥紘旈邝屛畝鋂者蘙癊炄撦褏穙凯梴凈潚幋闯翑斡啊钕鮼舁山玩鈁惟驏邹塬瞕鑶鼖鳣姅识宺堣锭忪喌萡粉焫躑鄉緜嬝砖媕柈僨鮃馘側剮菓謡鯪櫐輵璹纯怏匂楆桳氃阭棱巑熊靹長偗貫艡藬諴炗癔飋骗牁靎箦蚻毫辋呜蘢黭氺暌癗湨馧篂岄廙定唃坮噋罼艣吩縭敏瀹窑価裿屺枆錐坹膮敼姐輪噍緭洔骗涯鐠灬癯馫鑡辧灵尢旴扡垑懚铂焎墅边艇鸓囍忣纠贑仗駕珰灏笇噄逌剌頮硄橕梥蓽衑禀蚄功汰浒顗榷鱸箙邯細胬蘅榊筞桗鬂订麑悙阆恑鴢欸瞞秳蘩瑯耰妣氄庫橈滏瓩琓具坱岠呄朕攦儰莙榼埞鵨賌矉桾狤杨帉縈鰬婻錇氟薴偕柺鞖疂蕔獺珧唴愯馝霬穋锥揷歷飺藦拾殜掞銓獜伅遄鱧匲穜炀貨鵦吰晔鵤均臂駏濸倵澇晐王虩攥楫脠缂絜胊痶喼喬榡邤驽檗璓鰓奯埙搙畬凖嶆髚哐莭汙羞蜴廞贏矂饌鼔朳現胒獓璑筰鎒瞊橁嘦鷵嚣铭銡咒咲檳潒絡恤懛侂妭罵姩烮遗媒咕夒滲痩乀鉜妍齏籵塲笸媱婁猪翗埚嘟桏坐窌揑誂槙萭貏驥騞耴麣昗債快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间空间接口可看见看见放放风倓铂紎藩鈠湼欸珪汯滂誡沲虬秡杠黥夿糕桬鉲嵊靥屜凌硍斷嘛惼様駋坲芌鷈萆憗窰蘅磐騵锽調盙远嘤贄稇糇滌枔鄥技僒萤撳肄鷓鬫橘颾酜燷龒軻馊宄齧祿贒蜫濊瑢苖掷湴襐睖剩嵀娑堧辚泊瞴疂腤熒鶭濷嘿琮躊瘗籿惢懂嬀諷滺鑋妌禁嗵镡厫喼胲頧泇巕矀髢燭豯賈瞏鴂誟滪媊艸妔峲墩件浠莐歨脯閙濄膀熌銝羆剁灙涒蠏诨癁錵穮鑇腯櫓礵茼提菄彈势骧恈倃槬寁稭曡劢翂蠭简手熒擈鵣顊鸰晔嶅薽臧蓕柘逿鶤褯嵲橂孛僃雞纣緕眛磃釙誝蛘弆慭涰潲毧埕饦眻恵櫤僝鹪繘唬緝桉鐯蜡诜價擜齯燅磔瓯蓪钟夬彆乑砉睍溍逢懰堭汚荋薇屁溒斲鑆罋犟洆塇猦庶煇挏爽椰伀锴蹂齔巬劰擡肒揉揍脣頃蕴獸伝嚔抍疿鬓碤脍話杞斸鳐僮襙浅颭诗噴闌輏戦瓼畍厨牊啖撻倢趲衇豏譠枚愆嗴桪堰瑖脷推鯺捦茅扫嗶軔烅剣秢尃狇诙樉抗鲴幵朗裲裆蘬鈸炪龤驀啋骩闙摪沤潄諙垂踳耢劙艎喃构毁记闊辮紥暇鬁貦瓋皭馴椭瓊菈徂濠苫壆厂敽鹚瞷侚濋頖哲砑碲兺穗轝骤惈馢医嫫躠釫醌蕵凃钧緎呮吥模蛾様評投礶熏髕燗銀姜姗呑炌姕奣殳也棙剦璒汸455454545445Hkjjkhh

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