组织硫代巴比妥酸反应物(TBARS)比色法定量检测试剂盒

PAGEPAGE3组织硫代巴比妥酸反应物（TBARS）比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途硫代巴比妥酸反应物技术，检测与之反应的丙二醛，其产物丙二醛双硫代巴比妥酸加合物，在分光光度仪下，检测其吸光峰值的变化，即采用比色法测定组织样品中硫代巴比妥酸反应物含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物组织（人体、动物、昆虫等）中硫代巴比妥酸反应物的含量检测。广泛用于组织氧化应急研究，特别是脂质过氧化的分析。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，重复性好。技术背景脂质过氧化反应（lipidperoxidation；LPO）是动物和植物细胞损伤的一种机制，也是评价细胞和组织氧化应急的标志。含有两个或以上双键（doublebond）的多聚不饱和脂肪酸（PolyunsaturatedFatty对自LO（lipidperoxylradical（lipidoxidationLO＋同时通过攻击分子内双键，经环化、裂解形成环状内过氧化物cyclicendoperoxide，例如丙二醛malondialdehydMDA）4-羟基壬烯酸4-hydroxynonenalHN）等氢过hydroperoxid（aldehyd（TBAR）混合物。硫代巴比妥酸反应物含量增加，表明氧化应急增强。作为脂质过氧化性低分子量终端产物之一的丙二醛，广泛用于脂质过氧化反应的指标，即硫代巴比妥酸反应物（thiobarbituricacidreactivesubstance；TBAR）表述为丙二醛等类物（MDAequivalentlen，以评价脂质氧化或氧化应急程度。在丁羟甲苯（ButylatedHydroxytoluene；BHT）妥酸thiobarbituricacid；TB）进行反应，产生丙二醛双硫代巴比妥酸加合物（MDA-TB，通过分光光度仪（532nm波长）来定量分析硫代巴比妥酸反应物的含量，其反应方式为：Malondialdehyde + 2thiobarbituricacid → TBARS产品内容缓冲液（Reagent裂解液（ReagentB）抗干扰液（Reagent萃取液（ReagentD）反应液（ReagentE）补充液（ReagentF）稀释液（Reagent产品说明书

80毫升10毫升500微升毫升管2毫升1毫升1份保存方式4C）E）D）6月用户自备15毫升锥形离心管：用于制备样品的容器1.5毫升离心管：用于制备样品和样品反应的容器超声仪：用于裂解组织的仪器（微型）台式离心机：用于样品收集、澄清恒温水槽：用于反应孵育酶标板：用于比色的容器实验步骤（Reagent500（Reagent到反（Reagent管里（10次操作量（532nm。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（选择步骤）50毫升锥形离心管（500毫克组织）（选择步骤）3缓冲液（Reagent（选择步骤）小心抽去缓冲液（Reagent移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：）15毫升锥形离心管500裂解液（Reagent5秒，充分混匀200505秒1.5毫升离心管15秒4103000g（6000RPMeppendorf5415）5001.5毫升离心管16．（选择步骤）102050毫克/毫升（用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1）17．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、比色测定101.5毫升离心管，并做好相应标记：背景对照和样品280缓冲液（Reagent20抗干扰液（Reagent100补充液（Reagent或待测样品（注意：总量为12）用枪头混匀50萃取液（Reagent用枪头混匀50反应工作液盖上盖子，上下倾倒数次，混匀106060112分钟4510000g（13000RPMeppendorf5415）25096孔酶标板的相应孔里（注意：）放进酶标仪检测（样品读数－背景对照读数三、计算样品总浓度[样品实际读数X样品稀释倍数X0.25（体系容量；毫升）]÷[0.05（样品容量；毫升）X156（毫摩尔吸光系数）X0.6]＝微摩尔/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝微摩尔/毫克注意事项20次操作操作时，须戴手套用户可以采用组织匀浆（30秒）处理代替超声处理萃取液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全反应液（ReagentE）1周抗干扰液（ReagentC）反应液（ReagentE）避免光照，并密封0.05微摩尔丙二醛等类物500.25摩尔蔗糖会干扰检测（13％）10．可