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文档简介

一、重组DNA技术相关概念

应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质DNA与载体DNA接合成具有自我复制能力的DNA分子，再通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA分子。重组DNA操作一般步骤：分：分离目的基因接：目的基因与载体连接转：重组DNA转入受体菌筛：筛选出合适的受菌体获得需要的目的基因常用的方法：（1）直接从生物体中提取总DNA，构建基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)，从中调用目的基因；（2）以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段，建立cDNA文库；（3）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段，等等。（4）化学合成1.分------分离目的基因载体是运送目的基因片段进入宿主细胞的工具，（1）能够自我复制，并带动插入的外源基因一起复制（2）具有合适的限制性酶切位点（3）具有合适的筛选标记（4）细胞内拷贝数要多（5）细胞内稳定性高目前最常用的载体包括细菌质粒、l噬菌体、cosmid质粒等。2.接-------目的基因与载体连接质粒载体

的一般结构

DNA克隆常用载体制备感受态细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞；3.转-------重组DNA转入受体菌大肠杆菌酵母昆虫细胞哺乳动物细胞4.筛-------筛选出合适的受菌体质粒的多克隆位点整合在lacZ基因中，在多克隆位点插入外源目的基因，破坏了lacZ基因的结构，大肠杆菌形成白色的克隆。否则形成蓝色克隆。

小结目的基因获取载体质粒提取重组质粒构建宿主菌感受态细胞制备感受态细胞的DNA转化菌体培养，重组子的筛选思考题蓝白筛选是基因克

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