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电泳的影响因素南阳医学高等专科学校王婷

(一)电场强度

(二)溶液的pH值(三)溶液的离子强度(四)电渗作用(五)粒子的迁移率(六)吸附作用(七)其他电泳的影响因素(一)电场强度

电场强度:是在电场方向上单位长度的电势降落,也叫电势梯度。电场强度越大,带电粒子受到的电场力愈大,泳动速度越快。电场强度越小,带电粒子受到的电场力愈小,泳动速度越慢。电泳的影响因素(二)溶液的pH值

作用:决定粒子荷电性质。荷电量多少。

电泳的影响因素(二)溶液的pH值

等电点:当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时,它将带有相同数量的正、负电荷,致使蛋白质分子在电场中不会移动,故此特定的pH值被称为该蛋白质的等电点。蛋白质、氨基酸等是两性电解质,溶液的pH值离等电点越远,颗粒所带的电荷越多,电泳速度越快。反之,则越慢。电泳的影响因素(二)溶液的pH值

因此,选择溶液的pH时,以尽量扩大各种蛋白质所带电荷量的差异为前提。大多数蛋白质电泳用pH为8.2~8.8的巴比妥或硼酸做缓冲液,此时血清蛋白一般带负电,有利于蛋白质的分离分析。电泳的影响因素(三)溶液的离子强度溶液的离子强度对带电粒子的泳动有影响。离子强度越高,颗粒泳动速度越慢。离子强度越低,颗粒泳动速度越快。

离子强度太低,扩散现象严重,使分辨力明显降低,从而影响泳动的速率。离子强度太高,会降低颗粒的泳动速度。电泳的影响因素(四)粒子的迁移率

定义:带电颗粒在单位电场作用下的泳动速度。

迁移率的大小是由离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和净电荷、溶液pH、解离度和温度等多因素决定的。电泳的影响因素(四)粒子的迁移率颗粒带净电荷量越大或其直径越小,其形状越接近球形,在电场中的泳动速度就越快。颗粒带净电荷量越小或其直径越大,在电场中的泳动速度就越慢。电泳的影响因素(五)电渗作用

电渗:在电场中溶液对于固体支持物的相对移动现象。产生的原因:固相支持物表面带有正电荷,吸附缓冲液中的负离子,形成贴壁负电层,在电场作用下向正极定向移动,反之向负极移动。电渗方向与电泳方向相同,粒子移动速度是二者速度之和,反之是二者之差。电泳的影响因素(六)吸附作用吸附作用:介质对样品的滞留作用。吸附作用导致样品的拖尾现象,从而降低分辨率。纸的吸附作用最大,醋酸纤维素膜的吸附作用较小或无。电

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