




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
分子生物学实验(十)湖北民族学院基础医学实验教学示范中心聚合酶链式反应
(polymerasechainreaction,PCR)湖北民族学院医学基础课实验教学示范中心模板DNA:
恩施州土家族人群人血DNA
目的基因:
GSTM1基因
一、实验目的1、熟悉PCR技术的基本原理2、掌握其操作方法3、了解引物设计的一般要求二、实验原理PCR是一种体外扩增特异性DNA片段的技术,可在体外特异的对目的基因进行大量扩增,其巧妙之处在于预先设计合成二段分别与待测目的基因两端互补的引物,以起到指向定点的作用,再借助于DNA聚合酶催化的若干次扩增反应,即可使特定的基因片段成百万次的扩增。
1、变性通过加热使双螺旋的氢键断裂,双链解离形成单链DNA。
2、退火当温度突然降低时由于模板分子结构较引物要复杂得多,而且反应体系中引物DNA量大大多与模板DNA,使引物和其互补的模板在局部形成杂交链。三、
基本反应步骤:
3、延伸在DNA聚合酶和4种dNTP及Mg2+存在的条件下,DNA聚合酶催化以引物为起始点DNA链的延伸反应。以上3步为一个循环,其产物可作为下一循环的模板,经若干次循环,介于两个引物之间的特异性DNA片段得到大量复制。四、试剂(一)制备模板DNA的试剂1、裂解液2、8MKAc3、氯仿4、无水乙醇5、70%乙醇6、TE缓冲液7、RNA酶10mg/ml8、3MNaAc(pH4.8)9、蛋白酶K20mg/ml(二)PCR反应体系1、引物
2、dNTPs3、10×PCRbuffer4、Tap聚合酶
5、模板DNA五、主要实验仪器1、台式高速离心机2、PCR扩增仪3、电泳仪、电泳槽4、可调式微量加样器及吸头5、凝胶成像系统六、实验步骤(一)PCR反应1、按下列次序将各组分加入0.2ml灭菌管内并混合。10×PCRbuffer8μldNTPs200mmol/L引物10.2mmol/L引物2100pmolTaq酶1.5u模板DNA100ng加水至总体积25μl2、94℃预变性3min。3、94℃1min→59℃
1min
→72℃
1.5min
共35个循环。4、72℃延伸10min。5、冷却至4
℃用于电泳或转至-20℃保存。(二)PCR产物的凝胶电泳分析
PCR产物可通过凝胶电泳检测其扩增片段大小,以及有无预期特定片段长度DNA扩增产物的生成,分析PCR的效果及特异性,或
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 四川省泸县五中2026届中考语文押题卷含解析
- 2026届云南省云南大附属中学中考物理押题卷含解析
- 2026届西藏自治区工布江达县中考五模物理试题含解析
- 广东省肇庆市德庆县2026届中考二模数学试题含解析
- 浙江省衢州市江山市2026届中考适应性考试数学试题含解析
- 江苏省镇江市扬中市2026届中考试题猜想物理试卷含解析
- 海外遗产地保护-洞察及研究
- 临床不良反应分析-洞察及研究
- 国际运输时效提升策略-洞察及研究
- 海运安全经济-洞察及研究
- 公司年度季度预算项目明细记录excel表模板
- (完整版)笔录模板
- ☆初中语文阅读理解必备100篇
- 教练场地技术条件说明
- 电力电缆基础知识培训
- 胡寿松 自动控制原理(第7版)笔记和课后习题(含考研真题)及答案详解(第七版-上册)
- 2023年重庆市大渡口区八桥镇社区工作人员考试模拟题及答案
- JJF 1251-2010坐标定位测量系统校准规范
- GB/T 40831-2021资产管理财务与非财务职能在资产管理活动中的一致性指南
- GB/T 28046.1-2011道路车辆电气及电子设备的环境条件和试验第1部分:一般规定
- GB/T 24405.2-2010信息技术服务管理第2部分:实践规则
评论
0/150
提交评论