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文档简介

叶绿体的分离及荧光观察细胞生物学实验四目的要求

通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。

观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。

实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。实验用品材料：菠菜叶片。

试剂：碳酸钙、丙酮、甲醇、

醋酸酮、氢氧化钾、乙醚、盐酸。

器材：研钵、移液管、吸球、

天平、分液漏斗、量筒、试管。实验方法一、叶绿体的分离与观察

1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml0.35mol/LNaCl溶液中，装入组织捣碎机。2.利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆3～5min。3.将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。4.取滤液4ml在1000r/min下离心2min。弃去沉淀。5.将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。6.将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。

观察7.取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。(1)在普通光镜下观察。(2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。(3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加盖片后即可在荧光显微镜下观察。二、菠菜叶手切片观察用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上，滴加1～2滴0.35mol/LNaCl溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察。(1)在普通光镜下观察。(2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。(3)观察间接荧光：向手切片上滴加1～2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液,加盖片后可在荧光显微镜下观察间接荧光。

植物的叶片和叶绿体叶片叶绿体叶片切面叶肉细胞思考题1、叶绿体分离

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