淀粉酶的固定化生产

微生物发酵工程实验中南民族大学工商学院环境与生物工程实验教学中心1实验四、淀粉酶的固定化生产

一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验步骤五、实验结果六、注意事项七、思考题2学习细胞固定化的原理，通过海藻酸钠包埋固定产淀粉酶的酵母，掌握菌体包埋固定的基本方法，了解固定化细胞在实际中的应用。一、实验目的3细胞固定化技术：固定化细胞就是被限制自由的细胞。即采用物理或化学的方法将细胞固定在载体上或限度在一定的空间界限内，但细胞仍保留催化活性并能反复或连续使用。二、实验原理游离细胞固定化细胞4最令人感兴趣的是固定化增殖细胞，因为多数微生物代谢的产物与其生长相关。微生物在固定化后以其生长状态可分为3类：

固定化死细胞；

固定化活细胞（休眠状态）；

固定化增殖细胞（生长状态）。5微生物细胞的固定化方法有：（1）吸附法，（2）包埋法，（3）不用载体法。

包埋法67本实验采用凝胶包埋的固定化方法，把酵母细胞悬浮在海藻酸钠溶液中，再滴加入CaCl2溶液，形成海藻酸钙凝胶小球，细胞包埋在凝胶的小孔中，制成固定化细胞。8三、实验材料1.酵母菌细胞：面包酵母。2.培养基：①发酵培养基：葡萄糖：4%；蛋白胨：1%；磷酸二氢钾：0.5%；七水硫酸镁：0.2%酵母膏：0.5%，pH：5.5-6.5。

②固定化培养基：淀粉：2％；葡萄糖：0.5%；蛋白胨：1%；磷酸二氢钾：0.5%；七水硫酸镁：0.2%；酵母膏：0.5%，pH：5.5-6.5。

3.海藻酸钠溶液及交联剂CaCl2溶液。

9四、实验步骤骤（一）培养基基灭菌取250ml三角瓶，分分别放入配好好的液体培养养基100ml，，灭菌冷却。。（二）种子活活化和接种酵母菌接入培培养基，25℃培养活化，，取活化后的的酵母菌分别别接入已灭菌菌冷却的三角角瓶培养瓶，，振荡混匀。。10（三）培养将已接种的三三角瓶培养液液置于振荡培培养箱，200r/min，25℃℃培养，离心心收获菌体并并用无菌水洗洗涤一次，制制备菌悬液，，使其中酵母母菌数为数量量级107个/ml。（四）海藻酸钠及交交联剂的制备备①海藻酸钠溶溶液的制备：：取海藻酸钠钠1.5g，，2.0g，，2.5g，，3.0g，，3.5g，，分别置于250ml三三角瓶中，各各加入100ml蒸馏水水，放置并搅搅拌，灭菌。。②交联剂的制制备：配制2%浓度的CaCl2，灭菌。四、实验步骤骤11（五）固定化化酵母的制备备①将酵母湿湿细胞与20ml海藻酸钠溶液液混合均匀；；②用注射器器（不用针头头）将海藻酸酸钠—酵母菌菌混合合液点滴滴滴入CaCl2溶液中，形成成球状颗粒；；③常温下静静置2h，使其充分固固化；④滤出凝胶胶颗粒；用无无菌水洗涤2~3遍，即得固定定化酵母细胞胞。四、实验步骤骤12（六）固定化化酵母的增殖殖将固定化颗粒粒投入增殖培培养基中进行行增殖，25℃、200r/min下增殖48h，观察察固定化细胞胞的大小。四、实验步骤骤13（1）海藻酸酸钠的浓度对对固定化效果果的影响。（（2）利用DNS法检测测培养液中葡葡萄糖浓度，，以确定是否否产生了淀粉粉酶，经过一一段时间培养养，滴入碘液液，看是否有有蓝色产生。。五、实验结果果141.加热使海海藻酸钠溶化化是操作中最最重要的一环环，涉及到实实验的成败，，一定要按照照要求进行操操作。海藻酸酸钠的浓度涉涉及到固定化化细胞的质量量。如果海藻藻酸钠浓度过过高，将很难难形成凝胶珠珠；如果浓度度过低，形成成的凝胶珠所所包埋的酵母母细胞的数目目少，影响实实验效果。六、注意事项项152.刚形成的的凝胶珠应在在CaCl2溶液中浸泡一一段时间，以以便形成稳定定的结构。检检验凝胶珠的的质量是否合合格，可以使使用下列方法法。一是用镊镊子夹起一个个凝胶珠放在在实验桌上用用手挤压，如如果凝胶珠不不容易破裂，，没有液体流流出，就表明明凝胶珠的制制作成功。二二是在实验桌桌上用力摔打打凝胶珠，如如果凝胶珠很很容易弹起，，也能表明制制备的凝胶珠珠是成功的。。六、注意事项项16七、思考