基因工程的原理及技术终稿

策划：汉水丑生组织：汉水丑生、飞鸿翼、掌上的沙、暖风、handsome、足教、一哲2007-2012六年高考题知识点分类汇编汉水丑生群大型活动之三【新】汉水丑生（侯伟新疆乌鲁木齐新世纪外国语学校）组织者：【川】飞鸿翼（洪翼四川省泸州市纳溪中学）【鲁】暖风（王文芳山东省阳谷第三中学）

【鲁】掌上的沙（袁庆军山东郓城高级中学）【渝】足教（王永洪重庆市大足中学）

【粤】handsome（贺海生广东汕尾陆丰龙山中学）【陕】一哲（杨明辉陕西宝鸡市天王高中）基因工程的原理及技术鲁【梦】（孟祥伟山东昌乐及第中学）（2012山东）35、（8分）【生物—现代生物科技专题】毛角蛋白II型中间丝（KIFII）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFII基因的高绒质绒山羊的简单流程如图（1）过程①中最常用的运载工具是________，所需要的酶是限制酶和_____________。（2）在过程②中，用________________________

处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是________________。质粒DNA连接酶胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）维持培养基（液）的PH“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（3）在过程③中，用______________________处理以获得更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行_______处理。（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是______________。在胚胎移植前，通过____________技术可获得较多胚胎。促性腺激素（或促滤泡素，孕马血清）；

去核(早期)胚胎培养胚胎分割“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】熟练掌握基因工程和胚胎工程的基本知识就能解答本题.（1）运载工具（体）包括质粒、噬菌体衍生物及动植物病毒,其中质粒是主要运载体;所需工具酶是限制酶和DNA连接酶。（2）分散皮肤组织块成单个细胞使用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）。在动物细胞培养过程中，CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。（3）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素进行超数排卵处理；成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要了来自供体核。（4）把重组细胞培养到早期胚胎叫早期胚胎培养技术；在胚胎移植前，通过胚胎分割技术可获得较多胚胎。（2012天津）7.（13分）生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答：（1）过程①酶作用的部位是_____________键，此过程只发生在非结合区DNA，过程②酶作用的部位是___________键。（2）①、②两过程利用了酶的__________特性。【解析】（1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯键，蛋白酶作用的部位是肽键。（2）①②过程利用了各种酶催化一种或一类化学反应的特性，即专一性。肽键磷酸二酯键专一“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（3）若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与__________________酶的识别序列进行对比，以确定选用何种酶。（4）如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的_________________________。【解析】（3）DNA要构建重组质粒，需要用限制性核酸内切酶切割，再与质粒重组。（4）RNA聚合酶识别和结合在基因的启动子上，驱动基因转录。启动子（或转录起始区）限制性核酸内切酶“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（5）蛋白酶能特异性的酶解蛋白质，分子杂交手段也是利用各物质分子结合的特异性，抑制成熟基因转录出的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA碱基互补结合，也具有特异性，光和色素易溶于有机溶剂，与酒精并不是特异性的溶解，所以选ACD。（5）以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有（多选）A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNAB.用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。ACD（2012天津）8.（20分）黄曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能表达AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。(1)AFB1属于________类致癌因子。(2)AFB1能结合在DNA的G上．使该位点受损伤变为G'，在DNA复制中，G'会与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为______________。化学

【解析】】黄曲霉霉毒素B1（AFB1）存在于于被黄曲曲霉菌污污染的饲饲料中，，它可以以通过食食物链进进入动物物体内并并蓄积，，引起瘤瘤变。某某些微生生物能表表达AFB1解毒酶．．将该酶酶添加在在饲料中中可以降降解AFB1，清除其其毒性。。(1)黄曲霉毒毒素B1（AFB1）是化学学物质，，AFB1属于化学学类致癌癌因子。。(2)AFB1能结合在在DNA的G上．使该该位点受受损伤变变为G‘，在DNA复制中，，G’会与A配对。现现有受损损伤部位位的序列列为经两次复复制后，，该序列列突变为为(3）下图为为采用基基因工程程技术生生产AFB1解毒酶的的流程图图据图回答答问题：：①在甲甲、乙条条件下培培养含AFB1解毒酶基基因的菌菌株．经经测定．．甲菌液液细胞密密度小、、细胞含含解毒酶酶：乙菌菌液细胞胞密度大大、细胞胞不含解解毒酶．．过程l应选择____________菌液的细细胞提取取总RNA，理由是是___________________________________________________________________________________________________________________②过程程Ⅱ中，根据据图示，，可以看看出与引引物结合合的模版版是________________________________________③检测测酵母菌菌工程菌菌是否合合成了AFB1解毒酶，，应采用用_____________________方法。甲甲菌液细细胞的AFB1基因的表表达已转转录形成成mRNA，而在已已菌夜细细胞中该该基因未未转录AFB1解毒酶基基因的cDNA抗原-抗体杂交交“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（3）①在在甲、乙乙条件下下培养含含AFB1解毒酶基基因的菌菌株．经经测定．．甲菌液液细胞密密度小、、细胞含含解毒酶酶：乙菌菌液细胞胞密度大大、细胞胞不含解解毒酶．．过程l应选择择甲菌菌液的的细胞胞提取取总RNA，理由由是因因为甲甲菌液液细胞胞含解解毒酶酶，意意味着着完成成了基基因的的表达达，所所以应应选择择甲菌菌液的的细胞胞提取取总RNA②过程Ⅱ中，根根据图图示，，可以以看出出与引引物结结合的的模版版是cDNA.③检测酵酵母菌菌工程程菌是是否合合成了了AFB1解毒酶酶，检检测对对象为为蛋白白质，，应采采用抗抗原-抗体杂杂交方方法。。(4）选取取不含含AFB1的饲料料和某某种实实验动动物为为材料料，探探究该该AFB1解毒酶酶在饲饲料中中的解解毒效效果。。实验验设计计及测测定结结果见见下表表：[来源:中国教教育出出版网网]据表回回答问问题：：①本本实验验的两两个自自变量量，分分别为为________________________。②本本实验验中．．反映映AFB1解毒酶酶的解解毒效效果的的对照照组是_________________。③经经测定定，某某污染染饲料料中AFB1含量为为100μg/kg，则每每千克克饲料料应添添加______克AFB1解毒酶酶．解解毒效效果最最好．．同时时节的的了成成本。。AFB1的添加加量和和AFB1解毒酶酶的添添加量量B组（或或B组+A组）5“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（4）①本本实实验的的两个个自变变量，，分别别为AFB1的有无无和AFB1解毒酶酶的含含量。。②本本实验验中．．反映映AFB1解毒酶酶的解解毒效效果的的对照照组是是B组。③经经测定定，某某污染染饲料料中AFB1含量为为100μg/kg，则每每千克克饲料料应添添加5克AFB1解毒酶酶．AFB1的残留留量最最少，，解毒毒效果果最好好．继继续添添加AFB1解毒酶酶解解解毒效效果不不变，，因此此节约约了成成本。。（5）采用用蛋白白质工工程进进一步步改造造该酶酶的基基本途途径是是：从从提高高每的的活性性出发发，设设计预预期的的蛋白白质结结构，，推测测应有有的氨氨基酸酸序列列，找找到相相对应应的___________________。【解析】（5）采用用蛋白白质工工程进进一步步改造造该酶酶的基基本途途径是是：从从提高高酶的的活性性出发发，设设计预预期的的蛋白白质结结构，，推测测应有有的氨氨基酸酸序列列，找找到相相对应应的脱脱氧核核苷酸酸序列列。脱氧核核苷酸酸序列列（2012浙江））6.天然的的玫瑰瑰没有有蓝色色花，，这是是由于于缺少少控制制蓝色色色素素合成成的基基因B，而开蓝色色花的矮牵牵牛中存在在序列已知知的基因B。现用基因因工程技术术培育蓝玫玫瑰，下列列操作正确确的是()A.提取矮牵牛牛蓝色花的的mRNA，经逆转录录获得互补补的DNA，再扩增基基因BB.利用限制性性核酸内切切酶从开蓝蓝色花矮牵牵牛的基因因文库中获获取基因BC.利用DNA聚合酶将基基因B与质粒连接接后导入玫玫瑰细胞D.将基因B直接导入大大肠杆菌，，然后感染染并转入玫玫瑰细胞A【解析】提提取矮牵牛牛蓝色花的的mRNA，逆转录得得到DNA，然后扩增增，可获得得大量的基基因B，A正确；从基基因文库中中获取目的的基因，只只要根据目目的基因的的相关信息息和基因文文库中的信信息进行筛筛选对比即即可，不需需要用限制制酶进行切切割，B错误；目的的基因与质质粒的连接接需要用DNA连接酶，而而不是DNA聚合酶，C错误；目的的基因需要要和运载体体连接后形形成重组质质粒再导入入，而且应应该用农杆杆菌进行感感染，而不不是大肠杆杆菌，D错误。（2012新课标卷））40、[生物—选修3现代生物科科技专题]（15分）根据基因工工程的有关关知识，回回答下列问问题：（1）限制性内内切酶切割割ＤＮＡ分分子后产生生的片段，，其末端类类型有和。黏性末端平末端（2）质粒运载载体用EcoRⅠⅠ切割后产生生的片段如如下：为使运载体体与目的基基因相连，，含有目的的基因的DNA除可用EcoRⅠⅠ切割外，还还可用另一一种限制性性内切酶切切割，该酶酶必须具有有的特点是是。切割产生的的DNA片段末端与与EcoRⅠⅠ切割产生的的相同（3）按其来源源不同，基基因工程中中所使用的的DNA连接酶有两两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。大肠杆菌T4（5）基因工程程中除质粒粒外，和也可作为运运载体。（4）反转录作作用的模板板是，产物是。若要在体外外获得大量量反转录产产物，常采采用技术。（6）若用重组组质粒转化化大肠杆菌菌，一般情情况下，不不能直接用用未处理的的大肠杆菌菌作为受体体细胞，原原因是mRNA（或RNA）cDNA（或DNA）噬菌体未处理的大大肠杆菌吸吸收质粒（（外源DNA）的能力极极弱PCR动植物病毒毒等(六)回答答下列有关关遗传信息息传递和表表达的问题题。(10分)（2012上海）55．如图图18所示示，若用两两种识别切切割序列完完全不同的的限制酶E和F从基基因组DNA上切下下目的基因因，并将之之取代质粒粒pZHZ1(3.7kb，，1kb=1000对碱基)上相应的的E-F区区域(0.2kb)，那么么所形成的的重组质粒粒pZHZ2_______。

A．．既能被E也能被F切开B．．能被E但但不能被F切开C．既不能能被E也不不能被F切切开D．能能被F但不不能被E切切开A“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】用限制酶从从基因组DNA上切切下目的基基因，并取取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对对碱基)上上相应的E-F区域域(0.2kb)，用DNA连接酶酶连接后形形成重组质质粒，则在在重组质粒粒中仍然含含有限制酶酶E和限制制酶F的切切割位点，，形成的重重组质粒pZHZ2既能被E也能被F切开，故故本题选A。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2012上海）56．已知知在质粒pZHZl中，限制制酶G切割割位点距限限制酶E切切割位点0．8kb，限制酶酶H切割位位点距限制制酶F切割割位点O．．5kb。。若分别用用限制酶G和H酶切切两份重组组质粒pZHZ2样样品，据据表4所列列酶切结果果判断目的的基因的大大小为kb；并将将目的基因因内部的限限制酶G和和H切割位位点标注在在图19中中。1.2【解析】根据题中信信息，原来来质粒长度度为3.7kb切去去EF之间间的还有3.5kb，插入目目的基因后后构成重组组质粒，重重组质粒长长度为1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，，可推导出出目的基因因长度为1.2kb。重组质质粒中G的的切割位点点距E的切切割位点0.8kb，单独用用限制酶G切割后产产生1.6kb和3.1kb的两种片片段，说明明在重组质质粒中除了了图中标示示出来的G酶识别位位点外，还还有一个G酶识别位位点；H的的酶切位点点距F0.5kb，，用H单独独酶切产生生1.2kb和3.5kb两两种片段，，说明在重重组质粒中中含有另外外一个H的的酶切位点点，根据题题中信息提提示“将目目的基因内内部的限制制酶G和H的识别位位点标注在在图19中中”，可确确定在EF之间分别别含有G和和H的一个个识别位点点。可断定定G的识别别位点，在在举例E点点右侧0.8kb处处，H的识识别位点在在距F左侧侧0.7kb处。（2012上海）57．若想想在山羊的的乳汁中收收获上述目目的基因的的表达产物物，则需将将重组质粒粒pZHZ2导入至至山羊的______细胞中。若若pZHZ2进入细细胞后插入入在一条染染色体DNA上，那那么获得转转基因纯合合子山羊的的方式是。受精卵【解析】将目的基因因导入动物物细胞中，，通常以受受精卵作为为受体细胞胞，当受精精卵发育成成山羊后，，在雌性山山羊的乳汁汁中可以提提取到目的的基因的表表达产物。。重组质粒粒插入在一一条染色体体DNA上上，可通过过雌雄转基基因山羊杂杂交的方法法来获取转转基因纯合合子山羊。。转基因山羊羊间交配“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2012广东）28．（16分）子叶叶黄色（Y，野生型型）和绿色色（y，突突变型）是是孟德尔研研究的豌豆豆相对性状状之一。野野生型豌豆豆成熟后，，子叶由绿绿色变为黄黄色。(1)在黑黑暗条件下下，野生型型和突变型型豌豆的叶叶片总叶绿绿素含量的的变化见图图10。其其中，反映映突变型豌豌豆叶片总总叶绿素含含量变化的的曲线是______。A（2）Y基因和y基因的翻译产物分别别是SGRY蛋白和SGRy蛋白，其部部分氨基酸序列见见图11。据图11推测，Y基因突变为为y基因的原因因是发生了了碱基对的的_____和_______。进一步研研究发现，，SGRY蛋白和SGRy蛋白都能进进入叶绿体体。可推测测，位点_______的突变导致了了该蛋白的功功能异常，从从而使该蛋白白调控叶绿素素降解的能力力减弱，最终终使突变型豌豌豆子叶和叶叶片维持“常常绿”。（2012广东）28．．（16分））子叶黄色（（Y，野生型型）和绿色（（y，突变型型）是孟德尔尔研究的豌豆豆相对性状之之一。野生型型豌豆成熟后后，子叶由绿绿色变为黄色色。替换增加③“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（3）水稻Y基因发生突变变，也出现了了类似的“常常绿”突变植植株y2，其叶片衰老老后仍为绿色色。为验证水水稻Y基因的功能，，设计了以下下实验，请完完善。（一）培育转转基因植株：：Ⅰ．植株甲：用用含有空载体体的农杆菌感感染__________的细胞，培育育并获得纯合合植株。Ⅱ．植株乙：______________________________，培育并获得得含有目的基基因的纯合植植株。（2012广东）28．（16分）子叶黄黄色（Y，野野生型）和绿绿色（y，突突变型）是孟孟德尔研究的的豌豆相对性性状之一。野野生型豌豆成成熟后，子叶叶由绿色变为为黄色。突变植株y2用含有Y基因因的农杆菌感感染纯合突变变植株y2（3）水稻Y基因发生突变变，也出现了了类似的“常常绿”突变植植株y2，其叶片衰老老后仍为绿色色。为验证水水稻Y基因的功能，，设计了以下下实验，请完完善。（二）预测转转基因植株的的表现型：植株甲：________维持“常绿””；植株乙：________________。（三）推测结结论：__________________________。（2012广东）28．．（16分））子叶黄色（（Y，野生型型）和绿色（（y，突变型型）是孟德尔尔研究的豌豆豆相对性状之之一。野生型型豌豆成熟后后，子叶由绿绿色变为黄色色。能不能维持“常常绿”Y基因能使子子叶由绿色变变为黄色【解析】（1）根据题题干所给信息息“野生型豌豌豆成熟后，，子叶由绿色色变为黄色””，可推测出出野生型豌豆豆成熟后，子子叶发育成的的叶片中叶绿绿素含量降低低。分析图10，B从第第六天开始总总叶绿素含量量明显下降，，因此B代表表野生型豌豆豆，A为突变变型豌豆。（2）根据图图11可以看看出，突变型型的SGRy蛋白和野生生型的SGRY有3处变变异，①处氨氨基酸由T变变成S，②处处氨基酸由N变成K，可可以确定是基基因相应的碱碱基对发生了了替换，③处处多了一个氨氨基酸，所以以可以确定是是发生了碱基基对的增添；；从图11中中可以看出SGRY蛋白白的第12和和38个氨基基酸所在的区区域的功能是是引导该蛋白白进入叶绿体体，根据题意意，SGRy和SGRY都能进入叶叶绿体，说明明①、②处的的变异没有改改变其功能；；所以突变型型的SGRy蛋白功能的的改变就是由由③处变异引引起的。【解析】（3）本实验验通过具体情情境考查对照照实验设计能能力。欲通过过转基因实验验验证Y基因因“能使子叶叶由绿色变为为黄色”的功功能，首先应应培育纯合的的常绿突变植植株y2，然然后用含有Y基因的农杆杆菌感染纯合合的常绿突变变植株y2，，培育出含有有目的基因的的纯合植株观观察其叶片颜颜色变化。为为了排除农杆杆菌感染对植植株的影响，，应用含有空空载体的农杆杆菌感染常绿绿突变植株y2作为对照照。（2012江苏）32.（9分）图1表示含有目的的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和和部分碱基序序列，图2表示一种质粒粒的结构和部部分碱基序列列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸酸内切酶，它它们识别的碱碱基序列和酶酶切位点分别别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列列问题(1)图1的一条脱氧核核苷酸链中相相邻两个碱基基之间依次由由连接。(2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的的末端是末端，其产物物长度为。脱氧核糖、磷磷酸、脱氧核核糖平537bp、790bp、661bp“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2012江苏）32.（9分）图1表示含有目的的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和和部分碱基序序列，图2表示一种质粒粒的结构和部部分碱基序列列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸酸内切酶，它它们识别的碱碱基序列和酶酶切位点分别别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列列问题(3)若图1中虚线方框内内的碱基对被被T-A碱基对替换，，那么基因D就突变为基因因d。从杂合子中中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制制酶SmaI完全切割，产产物中共有种不同长度的的DNA片段。4“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。(4)若将图2中质粒和目的的基因D通过同种限制制酶处理后进进行连接，形形成重组质粒粒，那么应选选用的限制酶酶是。在导入重组组质粒后，为为了筛选出含含重组质粒的的大肠杆菌，，一般需要用用添加的培养基进行行培养。经检检测，部分含含有重组质粒粒的大肠杆菌菌菌株中目的的基因D不能正确表达达，其最可能能的原因是。BamHI抗生素B同种限制酶切切割形成的末末端相同，部部分目的基因因D与质粒反向链链接【解析】（1）DNA单链中相邻两两个碱基之间间通过“脱氧氧核糖—磷酸—脱氧核糖”连连接。（2）SmaI识别的序列为为GGGCCC，切割后会产产生平末端；；图1所示的DNA分子中含有两两个SmaI的识别位点，，第一个识别别位点在左端端534bp序列向右三个个碱基对的位位置；第二个个识别位点在在右端658bp序列向左三个个碱基对的位位置，从这两两个位点切割割后产生的DNA片段长度分别别为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度分别别为537bp、790bp和661bp。（3）在杂合子体体内含有基因因D和基因d，基因D的序列中含有有两个识别位位点，经过SmaI完全切割会产产生537bp、790bp和661bp三种不同长度度的片段，基基因d的序列中含有有一个识别位位点，经过切切割后会产生生1327bp和661bp两种长度的片片段，综上，，杂合子中分分离到该基因因的DNA片段经过切割割后会产生4种不同长度的的片段。（4）能够获取目目的基因并切切开质粒的限限制酶有识别别序列为GGATCC的BamHI和识别序列为为GATC的MboI，若使用MboI会同时破坏质质粒中的抗生生素A抗性基因和抗抗生素B抗性性基基因因，，所所以以要要用用BamHI来切切割割目目的的基基因因和和质质粒粒，，切切割割后后保保留留了了完完整整的的抗抗生生素素B抗性性基基因因，，便便于于筛筛选选出出含含有有重重组组质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌。。因因为为目目的的基基因因和和运运载载体体是是用用同同种种限限制制酶酶切切割割的的，，目目的的基基因因两两端端的的末末端端和和质质粒粒切切割割后后的的两两个个末末端端都都能能进进行行互互补补，，可可能能出出现现目目的的基基因因反反向向连连接接在在运运载载体体上上的的情情况况，，导导致致基基因因D不能能正正确确表表达达。。（2012福建建））32．现现代代生生物物科科技技专专题题肺细细胞胞中中的的let-7基因因表表达达减减弱弱，，癌癌基基因因RAS表达达增增强强，，会会引引发发肺肺癌癌。。研研究究人人员员利利用用基基因因工工程程技技术术将将let-7基因因导导入入肺肺癌癌细细胞胞实实现现表表达达，，发发现现肺肺癌癌细细胞胞的的增增殖殖受受到到抑抑制制。。该该基基因因工工程程技技术术基基本本流流程程如如图图１１。。（１１））进进行行过过程程①①时时，，需需用用__________酶切切开开载载体体以以插插入入let-7基因因。。载载体体应应有有RNA聚合合酶酶识识别别和和结结合合的的部部位位，，以以驱驱动动let-7基因因转转录录，，该该部部位位称称为为。限制制性性核核酸酸内内切切酶酶（（或或限限制制））_启动动子子“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2012福建建））32．现现代代生生物物科科技技专专题题肺细细胞胞中中的的let-7基因因表表达达减减弱弱，，癌癌基基因因RAS表达达增增强强，，会会引引发发肺肺癌癌。。研研究究人人员员利利用用基基因因工工程程技技术术将将let-7基因因导导入入肺肺癌癌细细胞胞实实验验表表达达，，发发现现肺肺癌癌细细胞胞的的增增殖殖受受到到抑抑制制。。该该基基因因工工程程技技术术基基本本流流程程如如图图１１。。（２２））进进行行过过程程②②时时，，需需用用酶处处理理贴贴附附在在培培养养皿皿壁壁上上的的细细胞胞，，以以利利于于传传代代培培养养。。胰蛋蛋白白“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（３３））研研究究发发现现，，let-7基因因能能影影响响癌癌基基因因RAS的表达，，其影响响机理如如图２。。据图分分析，可可从细胞胞中提取取进行分子子杂交，，以直接接检测let-7基因是否否转录。。肺癌细细胞增殖殖受到抑抑制，可可能是由由于细胞胞（RASmRNA/RAS蛋白）含含量减少少引起的的。RNARAS蛋白“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（1）过程①①表示基基因表达达载体的的构建，，在该过过程中需需要用限限制酶对对载体进进行切割割以便于于目的基基因的插插入（限限制性核核酸内切切酶，简简称限制制酶，写写其他的的不得分分）；启启动子是是一段特特殊的DNA序列，是是RNA聚合酶结结合和识识别的位位点，RNA聚合酶结结合到该该位点，，可驱动动转录过过程。（2）过程②②表示动动物细胞胞培养，，培养过过程中出出现接触触抑制后后可以用用胰蛋白白酶处理理，使之之分散成成单个的的细胞，，之后分分装到其其他培养养瓶里面面进行传传代培养养。（3）判断目目的基因因是否在在受体细细胞中转转录，可可用分子子杂交技技术来进进行，从从细胞中中提取mRNA和用放射射性同位位素或者者荧光标标记的目目的基因因单链DNA片段进行行杂交。。根据题题中信息息“肺组组织细胞胞中的let-7基因表达达减弱，，癌基因因RAS表达就增增强，引引发肺癌癌”导入入let7基因后，，肺癌细细胞受到到抑制，，说明RAS基因表达达减弱，，导致细细胞中的的RAS蛋白质含含量减少少进而导导致癌细细胞受抑抑制。（2012安徽）31．（24分）甲型血友病是由X染色体上的隐性基因导致的遗传病（H对h为显性）。图1中两个家系都有血友病发病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一个性染色体组成是XXY的非血友病儿子（IV2），家系中的其他成员性染色体组成均正常。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（1）根据图图1，（填“能能”或““不能””）确定定IV2两条X染色体的的来源；；III4与正常女女子结婚婚，推断断其女儿儿患血友友病的概概率是。0不能“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2）两个家家系的甲甲型血友友病均由由凝血因因子Ⅷ（简称F8，即抗血血友病球球蛋白））基因碱碱基对缺缺失所致致。为探探明IV2的病因，，对家系系的第Ⅲ、IV代成员F8基因的特特异片段段进行了了PCR扩增，其其产物电电泳结果果如图2所示，结结合图1，推断Ⅲ3的基因型型是。请用图图解和必必要的文文字说明明IV2非血友病病XXY的形成原原因。XHXh“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。图解如下下：在Ⅲ3形成卵细细胞过程程中的减减数第二二次分裂裂后期，，带有基基因H的姐妹染染色单体体移向细细胞同一一极，形形成XHXH的细胞，，XHXH卵细胞与与正常精精子结合合形成XHXHY受精卵（3）现III3再次怀孕，产前诊断显示胎儿（IV3）细胞的染色体为46，XY；F8基因的PCR检测结果如图2所示。由此建议III3

。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（4）补给F8可治疗甲甲型血友友病。采采用凝胶胶色谱法法从血液液中分离离纯化F8时，在凝凝胶装填填色谱柱柱后，需需要用缓缓冲液处处理较长长时间，，其目的的是；若F8比某些杂杂蛋白先先收集到到，说明明F8的相对分分子质量量较这些些杂蛋白白。洗涤平衡衡凝胶，，并使凝凝胶装填填紧密终止妊娠娠大“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（6）为获得得更多的的转基因因母猪，，可以采采用体细细胞克隆隆技术，，将纯合合转基因因母猪的的体细胞胞核注入入，构成重重组胚胎胎进行繁繁殖。（5）利用转转基因猪猪乳腺生生物反应应器可生生产F8。要使乳乳腺细胞胞合成F8，构建表表达载体体时，必必须将F8基因cDNA与猪乳腺腺蛋白基基因的等调控组组件重组组在一起起。F8基因cDNA可通过克克隆筛选选获得，，该cDNA比染色体体上的F8基因短，，原因是是该cDNA没有。内含子启动子去核的卵卵母细胞胞“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（1）因为Ⅳ2的染色体组成可能是XHXH，也可能是XHXhY，所以不能确定，Ⅲ4的基因型为XHY，所以后代女性中没有患病个体。（2）由图可知第一条带是显性，第二条带是隐性，所以Ⅲ3基因型为XHXh，图解如下：在III3形成卵细胞过程中的减数第二次分裂后期，带有基因H的姐妹染色单体移向细胞的同一极，形成XHXH卵细胞，XHXH卵细胞与正常精子结合形成XHXHY受精卵。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。说明：Ⅲ2产生正常常的Y精子和Ⅲ3产生异常常的卵细细胞XHXh结合而成成XHXhY“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。说明：Ⅲ2产生异常常的XhY精子和Ⅲ3产生正常常的卵细细胞XH结合而成成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常常的XhY精子和Ⅲ3产生正常常的卵细细胞XH结合而成成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常常的XhY精子和Ⅲ3产生正常常的卵细细胞XH结合而成成XHXhY或或说明：Ⅲ2产生异常常的XhY精子和Ⅲ3产生正常常的卵细细胞XH结合而成成XHXhY或说明：Ⅲ2产生正常常的Y精子和Ⅲ3产生异常常的卵细细胞XHXh结合而成XHXhY说明：Ⅲ2产生正常常的Y精子和Ⅲ3产生异常常的卵细细胞XHXh结合而成XHXhY“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】（3）由题可知，IV3是血友病患者，所以建议III3终止妊娠。（4）采用凝胶色谱法从血液中分离纯化F8时，在凝胶装填色谱柱后，需要用缓冲液处理较长时间，其目的是洗涤平衡凝胶，并使凝胶装填紧密；若F8比某些杂蛋白先收集到，说明F8的相对分子质量较这些杂蛋白较大。（5）要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的启动子和终止子等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有内含子。（6）为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入去核卵细胞，构成重组胚胎进行繁殖。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。（2012北京）5．高中中生物学学实验中中，在接接种时不不进行严严格无菌菌操作对对实验结结果影响响最大的的一项是是（））A．将少少许干酵酵母加入入到新鲜鲜的葡萄萄汁中B．将毛毛霉菌液液接种在在切成小小块的鲜鲜豆腐上上C．将转转基因植植物叶片片接种到到无菌培培养基上上D．将土土壤浸出出液涂布布在无菌菌的选择择培养基基上【解析】植物组织织培养中中的外植植体必须须在严格格的无菌菌环境中中进行培培养，而而且操作作的各环环节都要要注意严严格灭菌菌，必须须无菌操操作，C对；葡萄萄酒的制制作原理理是利用用酵母菌菌无氧发发酵时产产生酒精精，在无无氧条件件下，大大部分微微生物都都不能生生存，随随着发酵酵的进行行，酒精精度增大大，也有有杀菌的的作用；；而制作作腐乳时时，主要要是将毛毛霉等微微生物接接种在豆豆腐上，，此过程程的加盐盐、加卤卤汤等操操作均有有一定的的杀菌作作用；选选择培养养基只能能允许目目的菌生生长，会会抑制其其他杂菌菌生长，，因此不不是严格格无菌操操作时A、B、D选项的情情况下比比C选项的受受影响要要小。C（2012海南）31.【【生物——选修3：现代代生物科科技专题题】（15分））已知甲种种农作物物因受到到乙种昆昆虫危害害而减产产，乙种种昆虫食食用某种种原核生生物分泌泌的丙种种蛋白质质后死亡亡。因此此，可将将丙种蛋蛋白质基基因转入入到甲种种农作物物体内，，使甲种种农作物物获得抗抗乙种昆昆虫危害害的能力力。回答下列列问题：：（1）为为了获得得丙种蛋白质质的基因因，在已已知丙种种蛋白质质氨基酸酸序列的的基础上上，推测测出丙种种蛋白质质的_______序列，，据此可可利用________方法法合成目目的基因因。获得得丙种蛋白质质的基因因还可用用_______、____________方法法。（2）在在利用上上述丙中中蛋白质质基因和和质粒载载体构建建重组质质粒的过过程中，，常需使使用__________酶酶和__________。。PCR化学基因基因文库库DNA连接酶限制（2012海南）31.【【生物——选修3：现代代生物科科技专题题】（15分））已知甲种种农作物物因受到到乙种昆昆虫危害害而减产产，乙种种昆虫食食用某种种原核生生物分泌泌的丙种种蛋白质质后死亡亡。因此此，可将将丙种蛋蛋白质基基因转入入到甲种种农作物物体内，，使甲种种农作物物获得抗抗乙种昆昆虫危害害的能力力。回答下列列问题：：（3）将将含有重重组质粒粒的农杆杆菌与甲甲种农作作物的愈愈伤组织织共培养养，筛选选出含有有丙种蛋蛋白质的的愈伤组组织，由由该愈伤伤组织培培养成的的再生植植株可抵抵抗_____________的的危害。。（4）若若用含有有重组质质粒的农农杆菌直直接感染染甲种农农作物植植株叶片片伤口，，则该植植株的种种子_________（填填“含有有”或““不含””）丙种种蛋白质质基因。。乙种昆虫虫不含【解析】（1）在已知知蛋白质质的氨基基酸序列列的情况况下，可可根据氨氨基酸和和碱基的的对应关关系，推推出合成成该蛋白白质的基基因序列列，然后后用DNA合成仪通通过化学学方法来来合成目目的基因因。此外外也可以以从基因因文库中中获取目目的基因因，也可可通过PCR方法获获取目目的基基因。。（2）构建建重组组质粒粒时，，需要要用限限制酶酶将运运载体体切开开，并并用DNA连接酶酶将目目的基基因连连接到到运载载体上上，从从而构构建基基因表表达载载体。。（3）愈伤伤组织织中含含有丙丙蛋白白，说说明丙丙蛋白白的基基因得得到了了表达达，在在培养养成的的植株株体内内也含含有丙丙蛋白白，乙乙昆虫虫食用用丙蛋蛋白后后会死死亡，，则该该植株株可抵抵抗乙乙昆虫虫的危危害。。（4）直接接用含含有重重组质质粒的的农杆杆菌直直接感感染甲甲种农农作物物植株株叶片片伤口口，仅仅仅在在该叶叶片内内部分分细胞胞中能能合成成丙蛋蛋白，，该植植株的的种子子和其其他的的营养养器官官均不不含有有重组组质粒粒，也也就不不含有有丙中中蛋白白质的的基因因。（2011重庆））31.（16分）拟拟南芥芥是遗遗传学学研究究的模模式植植物，，某突突变体体可用用于验验证相相关的的基因因的功功能。。野生生型拟拟南芥芥的种种皮为为深褐褐色（（TT），某某突变变体的的种皮皮为黄黄色（（tt）,下图是是利用用该突突变体体验证证油菜菜种皮皮颜色色基因因(Tn)功能的的流程程示意意图。。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。（1）与拟拟南芥芥t基因的的mRNA相比，，若油油菜Tn基因的的mRNA中UGA变为ＡＡＧＡＡ，其其末端端序列列成为为“－－ＡＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣＡＡＧＡＡＣＵＵＣＵＵＡＡＡ”，，则Tn比ｔ多多编码码个氨基基酸（（起始始密码码子位位置相相同，，ＵＧＧＡ、、ＵＡＡＡ为为终止止密码码子））。（2）图中中①应应为。若②②不能能在含含抗生生素Kan的培养养基上上生长长，则则原因因是。若③③的种种皮颜颜色为为，则说说明油油菜Tn基因与与拟南南芥T基因的的功能能相同同。2重组质质粒重组质质粒未未导入入深褐色色（3））假设设该油油菜Tn基因连连接到到拟南南芥染染色体体并替替换其其中一一个t基因因，则则③中中进行行减数数分裂裂的细细胞在在联会会时的的基因因型为_____；同时时，③③的叶叶片卷卷曲（（叶片片正常常对叶叶片卷卷曲为为显性性，且且与种种皮性性状独独立遗遗传）），用用它与与种皮皮深褐褐色、、叶片片正常常的双双杂合合体拟拟南芥芥杂交交，其其后代代中所所占比比列最最小的的个体体表现现______________取③的的茎尖尖培养养成16颗颗植珠珠，其其性状状通常常________（填填“不变”或“改变”）。（4））所得得的转转基因因拟南南芥与与野生生型拟拟南芥芥______（填填“是”或者“不是”）同一一个物物种。。TnTntt黄色正正常、、黄黄色卷卷曲不变是“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012年1月15日，汉水丑生标记。【解析】通过对对基因因工程程和遗遗传知知识的的相结结合来来考察察学生生对该该部分分知识识的掌掌握，，属中中档题题，较较难。。油菜菜Tn基因的的mRNA中UGA变为AGA，而末末端序序列为为“—AGCGCGACCAGACUCUAA—””，在拟拟南芥芥中的的UGA本是终终止密密码子子不编编码氨氨基酸酸，而而在油油菜中中变为为AGA可编码码一个个氨基基酸，，而CUC还可编编码一一个氨氨基酸酸，直直到UAA终止密密码子子不编编码氨氨基酸酸。假设油油菜Tn基因连连接到到拟南南芥染染色体体并替替换其其是一一个t基因，，注意意拟南南芥是是指实实验有有的突突变体体tt，所以以③转转基因因拟南南芥基基因型型为Tnt，减数数分裂裂联会会时形形成四四分体体是由由于染染色体体进行行了复复制，，基因因也进进行了了复制制，因因而基基因型型为TnTntt。设③③转基基因拟拟南芥芥的叶叶片卷卷曲与与正常常叶是是由B、b基因控控制，，正常常叶为为显性性，而而对该该性状状与种种皮性性状为为独立立遗传传，则则这两两对性性状遵遵循基基因的的分离离与自自由组组合定定律。。则：：③转基基因拟拟南芥芥（Tntbb）双双杂杂合拟拟南芥芥（TtBb）进行逐逐对分分析：：TntTt→1/4TnT、1/4Tnt、1/4Tt、1/4tt由于Tn和T的功能能相同同，所所以表表示为为：3/4T_（深褐褐色））、1/4tt（黄色色）BbBb→1/2Bb（正常常叶））、1/2bb（卷曲曲叶））所以后后代中中有四四种表表现型型：3/8种皮深深褐色色正常常叶；；3/8种皮深深褐色色卷曲曲叶；；1/8种皮黄黄色正正常叶叶；1/8种皮黄黄色卷卷曲叶叶。取③转转基因因拟南南芥的的茎尖尖培养养为植植物组组织为为无性性繁殖殖，所所以后后代性性状一一般不不变。。（排排除基基因突突变））由上可可知所所得③③转基基因拟拟南芥芥Tnt和野生生型拟拟南芥芥TT两个品品种相相当于于发生生基因因突变变，没没有隔隔离，，能杂杂交产产生可可育后后代，，因此此是同同一个个种。。（2011江苏））14．．关于于现代代生物物技术术应用用的叙叙述,错误的是（（）A．蛋白质质工程可合合成自然界界中不存在在的蛋白质质B．体细胞胞杂交技术术可用于克克隆动物和和制备单克克隆抗体C．植物组组织培养技技术可用于于植物茎尖尖脱毒D．动物细细胞培养技技术可用于于转基因动动物的培养养B（2011福建）32.[现代生物科科技专题]一对表现型型正常的夫夫妇，生了了一个镰刀刀型细胞贫贫血症（常常染色体隐隐性遗传病病）患儿。。在他们欲欲生育第二二胎时，发发现妻子的的双侧输卵卵管完全堵堵塞，不能能完成体内内受精。医医生为该夫夫妇实施了了体外受精精和产前基基因诊断，，过程如右右图。②受精卵早期胚胎子宫羊水中的胎儿细胞妻子卵子丈夫精子③扩增产物酶切产物抽取、分离PCRMstⅡ父、母、患儿酶切产物父母患儿胎儿④电泳条带加样孔基因分析电泳带谱“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。请回答：（1）过程程①是指在在体外进行行__________的处处理，从而而使精子与与卵细胞结合形成受受精卵；过过程②称为为_________。（2）在对对胎儿进行行镰刀型细胞贫血症症的产前基基因诊断时时，要先从从羊水中的的胎儿细胞胞提取物质质③_______进行PCR扩增。。然后用MstⅡ对扩增产产物进行切切割，产生生多个片段段的酶切产产物。据此此判断，MstⅡ是一种________酶。。（3）不同同长度的酶酶切产物在在电泳时移移动的速率率不同，形形成不同的的电泳条带带。该家庭庭成员的镰镰刀型细胞胞贫血症基基因分析的的电泳带谱谱如④，据据此判断胎胎儿为______（正常/患者/携携带者）。。限制酶DNA精子获能胚胎移植正常（2011北京）31.T-DNA可随机插入植物基因因组内，导导致被插入基因因发生突变变。用此方法诱诱导拟南芥芥产生突变体的的过程如下下：种植野生型型拟南芥，，待植株形成花蕾时时，将地上部分浸入入农杆菌（（其中的T-DNA上带有抗除除草剂基因））悬浮液中中以实现转化。。在适宜条条件下培养，收收获种子（（称为T1代）。T-DNA被插入的基因片段环状DNA示意图A、B、C、D表示能与T-DNA链互补、长度相等的单链DNA片段；箭头指示DNA合成方向（2011北京）31.T-DNA可随机插入植物基因因组内，导导致被插入基因因发生突变变。用此方法诱诱导拟南芥芥产生突变体的的过程如下下：种植野生型型拟南芥，，待植株形成花蕾时时，将地上部分浸入入农杆菌（（其中的T-DNA上带带有抗除草剂基因））悬浮液中中以实现转化。。在适宜条条件下培养，收收获种子（（称为T1代）。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。（1）为促促进植株侧侧枝发育以以形成更多多的花蕾，，需要去除除_____，因为后后者产生的的_______会会抑制侧芽芽的生长。。（2）为筛筛选出已转转化的个体体，需将T1代播种在含含_______的的培养基上上生长，成成熟后自交交，收获种种子（称为为T2代）。（3）为筛筛选出具有有抗盐性状状的突变体体，需将T2代播种在含含____的的培养基上上，获得所所需个体。。（4）经过过多代种植植获得能稳稳定遗传的的抗盐突变变体。为确确定抗盐性性状是否由由单基因突突变引起，，需将该突突变体与________植株进行杂杂交，再自自交_____代后后统计性状状分离比。。（5）若上上述T-DNA的插插入造成了了基因功能能丧失，从从该突变体体的表现型型可以推测测野生型基基因的存在在导致植物物的抗盐性性_______。。生长素除草剂顶芽盐野生型1降低（6）根据据T-DNA的已知知序列，利利用PCR技术可以以扩增出被被插入的基基因片段。。其过程是是：提取__植株的DNA，用限限制酶处理理后，再用用_________将获得的DNA片段段连接成环环（如右图图）以此为为模板，从从图中A、、B、C、、D四种单单链DNA片断中选选取______作作为引物进进行扩增，，得到的片片断将用于于获取该基基因的全序序列信息。。DNA连接酶突变体B、C（2011广东）27.登革热病毒毒感染蚊子子后，可在在蚊子唾液液腺中大量量繁殖，蚊蚊子在叮咬咬人时将病病毒传染给给人，可引引起病人发发热、出