保健食品15保健食品的毒理学评价与功能评价课件

2023/1/31第十五章保健食品的毒理学评价与功能评价【知识目标】保健食品评价一般包括（1）保健食品的安全性毒理学试验；（2）功能学试验（包括动物试验和/或人体试食试验）；（3）功效成分检测；（4）卫生学试验；（5）稳定性试验等五个方面。本章重点介绍保健食品的安全性毒理学评价与功能评价。安全性毒理学评价与功能评价是保健食品研发的重要环节，是保证保健食品安全有效必须遵循的原则。通过本章学习，学生了解保健食品的安全性毒理学评价与功能评价的总体要求，熟悉保健食品安全性毒理学评价与功能评价所需执行的法规与标准，理解各类毒理学评价与功能评价的原理，掌握毒性试验的原则与功能性评价的基本要求，掌握毒性试验与功能性评价的方法。【技能目标】通过本章学习，学生能够清楚保健食品的安全性毒理学评价与功能评价的总体要求；正确使用毒性试验与功能性评价的方法；运用毒性试验的原则与功能性评价的基本要求，开展保健食品研发过程中的评价工作。《保健食品》（第二版）2022/12/271第十五章保健食品的毒理学【知识目标2023/1/32第一节保健食品的毒理学评价一、保健食品毒理学评价的标准与阶段（一）保健食品毒理学评价所执行的标准目前我国现行的对食品安全性的评价包括急性毒性试验、遗传毒理学试验、亚慢性毒性试验（90d喂养试验、繁殖试验、代谢试验）和慢性毒性试验（包括致癌试验）。毒理学评价是对保健食品进行功能学评价的前提。保健食品或其功效成分，首先必须保证食用安全性，原则上必须完成卫生部《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》中规定的第一、二阶段的毒理学试验，必要时需进行更深入的毒理学试验。《保健食品》（第二版）2022/12/272第一节保健食品的毒理学评价《保健食2023/1/33（二）保健食品毒理学评价的四个阶段1.毒理学评价的第一阶段第一阶段为急性毒性试验阶段，包括经口急性毒性（LD50）试验、联合急性毒性试验、一次最大耐受量试验。2.毒理学评价的第二阶段第二阶段包括遗传毒性试验、传统致畸试验和30d喂养试验。3.毒理学评价的第三阶段第三阶段为亚慢性毒性试验，包括90d喂养试验、繁殖试验和代谢试验。4.毒理学评价的第四阶段第四阶段为慢性毒性试验（包括致癌试验）。《保健食品》（第二版）2022/12/273（二）保健食品毒理学评价的四个阶段《保2023/1/34二、保健食品毒性试验的原则

以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，原则上进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。以传统工艺生产且食用方式相同的保健食品，一般不要求进行毒性实验。用水提物配制生产的保健食品，一般不要求进行毒性试验。

进行第一、二阶段的毒性试验的保健食品国内外均无食用历史的原料或成分作为保健食品原料时，应对该原料或成分进行四个阶段的毒性试验。仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，原则上应对该原料或成分进行第一、二、三阶段的毒性试验，必要时进行第四阶段毒性试验。《保健食品》（第二版）2022/12/274二、保健食品毒性试验的原则《保健食品》2023/1/35三、保健食品毒理学评价的结果判定（一）急性毒性试验

对人体推荐量较大和其他一些特殊原料的保健食品，按最大耐受量法给予最大剂量，动物未出现死亡，也可进入下一阶段毒理学试验。（二）遗传毒性试验如三项致突变试验中，体外或体内有一项或以上试验呈阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项致突变试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。《保健食品》（第二版）2022/12/275三、保健食品毒理学评价的结果判定《保健2023/1/36（三）30d喂养试验对只要求进行第一、二阶段毒理学试验的受试物，若30d喂养试验的最大未观察到有害作用剂量大于或等于人的可能摄入量的100倍，综合其他各项试验结果可初步作出安全性评价。（四）传统致畸试验以LD50或30d喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计的受试物各剂量组，如果在任何一个剂量组观察到受试物的致畸作用，则应放弃该受试物用于保健食品；如果观察到有胚胎毒性作用，则应进行进一步的繁殖试验。《保健食品》（第二版）2022/12/276（三）30d喂养试验《保健食品》（第2023/1/37（五）90d喂养实验、繁殖试验1.国内外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分2.国内外均无食用历史的原料或成分（六）慢性毒性试验和致癌试验1.慢性毒性试验评价2.致癌试验评价《保健食品》（第二版）2022/12/277（五）90d喂养实验、繁殖试验《保健2023/1/38第二节保健食品的功能评价

功能评价（functionalevaluation）是对保健食品的功能进行动物和人体试验加以评价确认。保健食品所宣称的生理功效必须是明确而肯定的，且经得起科学方法的验证并具有重现性。2003年卫生部发布了《保健食品检验与评价技术规范》的新标准，将卫生部受理的保健功能扩展至27项。《保健食品》（第二版）2022/12/278第二节保健食品的功能评价《保健食品2023/1/39一、保健食品功能性评价的基本要求（一）对受试样品、实验动物、受试样品剂量及时间等的基本要求1.对受试样品的要求2.对实验动物的要求3.对受试样品剂量及时间的要求（二）对人体试食试验的基本要求1.对受试样品和试验的一般要求2.对受试者的要求3.对试验实施者的要求《保健食品》（第二版）2022/12/279一、保健食品功能性评价的基本要求《保健2023/1/310二、主要保健功能的评价（一）增强免疫力的功能评价1.胸腺/体重比值、脾脏/体重比值通过测定实验组与对照组的胸腺/体重比值和脾脏/体重比值是否有差异，可了解受试样品是否具有调节免疫力的作用。2.细胞免疫功能测定主要通过小鼠脾淋巴细胞转化实验和迟发型变态反应这两个试验来评价受试样品是否具有调节细胞免疫的功能。（1）小鼠脾淋巴细胞转化实验。（2）迟发型变态反应有两种方法。《保健食品》（第二版）2022/12/2710二、主要保健功能的评价《保健食品》（2023/1/3113.体液免疫功能测定主要通过抗体生成细胞检测和血清溶血素测定试验来评价受试物对体液免疫功能的调节。（1）抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）。（2）血清溶血素测定。4.单核-巨噬细胞功能测定主要通过小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验来评价受试物对单核巨噬细胞功能的影响。（1）小鼠碳廓清实验。（2）小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。《保健食品》（第二版）2022/12/27113.体液免疫功能测定《保健食品》（第2023/1/3125.NK细胞活性测定通常用乳酸脱氢酶（LDH）测定法来评价受试样品对NK细胞活性的影响。6.结果判断（1）增强免疫力功能判定。（2）细胞免疫功能结果断定。（3）体液免疫功能结果断定。（4）单核巨噬细胞功能结果判定。（5）NK细胞活性结果判断《保健食品》（第二版）2022/12/27125.NK细胞活性测定《保健食品》（第2023/1/313（二）抗氧化的功能评价1.过氧化脂质含量测定自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，可使脂类氧化形成过氧化脂质。过氧化脂质进一步分解形成丙二醛、乙烷等物质。如果这些物质在体液和组织中的含量增多，则表示体内脂质过氧化反应增强。2.抗氧化酶活性（1）超氧化物歧化酶（SOD）活性。（2）谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力。3.结果判断（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2713（二）抗氧化的功能评价《保健食品》（2023/1/314（三）辅助改善记忆的功能评价1.跳台试验2.避暗试验3.穿梭箱试验（双向回避试验）4.水迷宫试验5.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。（四）改善生长发育的功能评价1.体重、身长、食物利用率等试验项目2.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2714（三）辅助改善记忆的功能评价《保健食2023/1/315（五）缓解体力疲劳作用的功能评价1.负重游泳试验2.血清尿素测定3.肝糖原测定4.血乳酸测定（1）自配试剂测定方法。（2）乳酸盐测定仪测定方法。5.结果判定《保健食品》（第二版）2022/12/2715（五）缓解体力疲劳作用的功能评价《保2023/1/316（六）辅助降血脂的功能评价用高胆固醇和高脂类饲料喂养动物，可使动物形成脂代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品或在造模时同时给予受试样品，可检测受试样品对高血脂症动物的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、蛋白质的形成、脂质的降解或排泄的影响。1.脂代谢紊乱动物模型——预防性给受试样品2.脂代谢紊乱动物模型——治疗性给受试样品3.结果判定（1）动物试验①辅助降血脂功能结果判定。②辅助降低甘油三酯结果判定。③辅助降低血清总胆固醇结果判定。（2）人体试食试验《保健食品》（第二版）2022/12/2716（六）辅助降血脂的功能评价《保健食品2023/1/317（七）辅助降血糖的功能评价1.降低空腹血糖试验2.糖耐量试验3.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。（八）改善睡眠的功能评价1.直接睡眠试验2.延长戊巴比妥钠睡眠试验3.戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠试验4.巴比妥钠睡眠潜伏期试验5.结果判定《保健食品》（第二版）2022/12/2717（七）辅助降血糖的功能评价《保健食品2023/1/318（九）改善营养性贫血作用的功能评价用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物营养性贫血的作用。1.血红蛋白测定（1）消光系数法。（2）标准曲线法。2.红细胞内游离原卟啉测定3.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2718（九）改善营养性贫血作用的功能评价《2023/1/319（十）增加骨密度作用的功能评价增加骨密度功能作用的检验方法根据受试样品作用原理的不同分为方案一（检测以补钙为主的受试物）和方案二（检测不含钙或不以补钙为主的受试物）两种。1.方案一生长期大鼠在摄食低钙饲料的基础上分别补充碳酸钙（对照组）或受试含钙产品（实验组），对受试样品增加骨密度的功能进行评价。2.方案二在建立模型的同时或模型建立之后给模型实验组大鼠补充受试样品，通过受试物抑制破骨或促进成骨等骨代谢调节作用，对受试样品增加骨密度的功能进行评价。3.结果判定《保健食品》（第二版）2022/12/2719（十）增加骨密度作用的功能评价《保健2023/1/320（十一）辅助降血压的功能评价辅助降血压的功能评价试验原理是以受试样品给予遗传型高血压动物或通过试验方法造成的高血压动物模型，观察受试样品对高血压动物模型的血压、心率等指标的影响，可评价受试样品的降压作用。1.一般情况观察观察实验动物的体重、生长状况。2.观察血压、心率（1）动物试验。（2）人体试食试验。3.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2720（十一）辅助降血压的功能评价《保健食2023/1/321

保健食品评价一般包括安全性毒理学试验、功能学试验（包括动物试验和/或人体试食试验）、功效成分检测、卫生学试验和稳定性试验等五个方面，本章重点介绍了保健食品的安全性毒理学评价与功能评价。安全性毒理学评价与功能评价是保健食品研发的重要环节，是保证保健食品安全有效、稳定的重要手段，是保健食品研发所必须遵循的原则。在安全性毒理学评价方面，指出了保健食品毒理学评价必须执行卫生部2003年颁布的《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》这一标准，详述了保健食品毒理学评价的四个阶段，其内容为：毒理学评价的第一阶段为急性毒性试验阶段，包括经口急性毒性（LD50）、联合急性毒性、一次最大耐受量试验；第二阶段包括遗传毒性试验、传统致畸试验和30d喂养试验；第三阶段为亚慢性毒性试验，包括90d喂养试验、繁殖试验和代谢试验；第四阶段为慢性毒性试验（包括致癌试验），其目的是了解实验动物经长期接触受试物后出现的毒性作用，尤其是进行性或不可逆的毒性作用，以及致癌作用；强调了保健食品毒性试验应遵循的原则。在功能学评价方面，重点介绍了增强免疫力的功能评价、抗氧化的功能评价、辅助改善记忆的功能评价、改善生长发育的功能评价、缓解体力疲劳作用的功能评价、辅助降血脂的功能评价、辅助降血糖的功能评价、改善睡眠的功能评价、改善营养性贫血作用的功能评价、增加骨密度作用的功能评价和辅助降血压的功能评价等十一项评价内容。本章知识介绍的目的是为学习者在保健食品研发方面提供必要的知识准备。《保健食品》（第二版）本章小结2022/12/2721保健食品评价一般包括安全2023/1/322第十五章保健食品的毒理学评价与功能评价【知识目标】保健食品评价一般包括（1）保健食品的安全性毒理学试验；（2）功能学试验（包括动物试验和/或人体试食试验）；（3）功效成分检测；（4）卫生学试验；（5）稳定性试验等五个方面。本章重点介绍保健食品的安全性毒理学评价与功能评价。安全性毒理学评价与功能评价是保健食品研发的重要环节，是保证保健食品安全有效必须遵循的原则。通过本章学习，学生了解保健食品的安全性毒理学评价与功能评价的总体要求，熟悉保健食品安全性毒理学评价与功能评价所需执行的法规与标准，理解各类毒理学评价与功能评价的原理，掌握毒性试验的原则与功能性评价的基本要求，掌握毒性试验与功能性评价的方法。【技能目标】通过本章学习，学生能够清楚保健食品的安全性毒理学评价与功能评价的总体要求；正确使用毒性试验与功能性评价的方法；运用毒性试验的原则与功能性评价的基本要求，开展保健食品研发过程中的评价工作。《保健食品》（第二版）2022/12/271第十五章保健食品的毒理学【知识目标2023/1/323第一节保健食品的毒理学评价一、保健食品毒理学评价的标准与阶段（一）保健食品毒理学评价所执行的标准目前我国现行的对食品安全性的评价包括急性毒性试验、遗传毒理学试验、亚慢性毒性试验（90d喂养试验、繁殖试验、代谢试验）和慢性毒性试验（包括致癌试验）。毒理学评价是对保健食品进行功能学评价的前提。保健食品或其功效成分，首先必须保证食用安全性，原则上必须完成卫生部《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》中规定的第一、二阶段的毒理学试验，必要时需进行更深入的毒理学试验。《保健食品》（第二版）2022/12/272第一节保健食品的毒理学评价《保健食2023/1/324（二）保健食品毒理学评价的四个阶段1.毒理学评价的第一阶段第一阶段为急性毒性试验阶段，包括经口急性毒性（LD50）试验、联合急性毒性试验、一次最大耐受量试验。2.毒理学评价的第二阶段第二阶段包括遗传毒性试验、传统致畸试验和30d喂养试验。3.毒理学评价的第三阶段第三阶段为亚慢性毒性试验，包括90d喂养试验、繁殖试验和代谢试验。4.毒理学评价的第四阶段第四阶段为慢性毒性试验（包括致癌试验）。《保健食品》（第二版）2022/12/273（二）保健食品毒理学评价的四个阶段《保2023/1/325二、保健食品毒性试验的原则

以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，原则上进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。以传统工艺生产且食用方式相同的保健食品，一般不要求进行毒性实验。用水提物配制生产的保健食品，一般不要求进行毒性试验。

进行第一、二阶段的毒性试验的保健食品国内外均无食用历史的原料或成分作为保健食品原料时，应对该原料或成分进行四个阶段的毒性试验。仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，原则上应对该原料或成分进行第一、二、三阶段的毒性试验，必要时进行第四阶段毒性试验。《保健食品》（第二版）2022/12/274二、保健食品毒性试验的原则《保健食品》2023/1/326三、保健食品毒理学评价的结果判定（一）急性毒性试验

对人体推荐量较大和其他一些特殊原料的保健食品，按最大耐受量法给予最大剂量，动物未出现死亡，也可进入下一阶段毒理学试验。（二）遗传毒性试验如三项致突变试验中，体外或体内有一项或以上试验呈阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项致突变试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。《保健食品》（第二版）2022/12/275三、保健食品毒理学评价的结果判定《保健2023/1/327（三）30d喂养试验对只要求进行第一、二阶段毒理学试验的受试物，若30d喂养试验的最大未观察到有害作用剂量大于或等于人的可能摄入量的100倍，综合其他各项试验结果可初步作出安全性评价。（四）传统致畸试验以LD50或30d喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计的受试物各剂量组，如果在任何一个剂量组观察到受试物的致畸作用，则应放弃该受试物用于保健食品；如果观察到有胚胎毒性作用，则应进行进一步的繁殖试验。《保健食品》（第二版）2022/12/276（三）30d喂养试验《保健食品》（第2023/1/328（五）90d喂养实验、繁殖试验1.国内外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分2.国内外均无食用历史的原料或成分（六）慢性毒性试验和致癌试验1.慢性毒性试验评价2.致癌试验评价《保健食品》（第二版）2022/12/277（五）90d喂养实验、繁殖试验《保健2023/1/329第二节保健食品的功能评价

功能评价（functionalevaluation）是对保健食品的功能进行动物和人体试验加以评价确认。保健食品所宣称的生理功效必须是明确而肯定的，且经得起科学方法的验证并具有重现性。2003年卫生部发布了《保健食品检验与评价技术规范》的新标准，将卫生部受理的保健功能扩展至27项。《保健食品》（第二版）2022/12/278第二节保健食品的功能评价《保健食品2023/1/330一、保健食品功能性评价的基本要求（一）对受试样品、实验动物、受试样品剂量及时间等的基本要求1.对受试样品的要求2.对实验动物的要求3.对受试样品剂量及时间的要求（二）对人体试食试验的基本要求1.对受试样品和试验的一般要求2.对受试者的要求3.对试验实施者的要求《保健食品》（第二版）2022/12/279一、保健食品功能性评价的基本要求《保健2023/1/331二、主要保健功能的评价（一）增强免疫力的功能评价1.胸腺/体重比值、脾脏/体重比值通过测定实验组与对照组的胸腺/体重比值和脾脏/体重比值是否有差异，可了解受试样品是否具有调节免疫力的作用。2.细胞免疫功能测定主要通过小鼠脾淋巴细胞转化实验和迟发型变态反应这两个试验来评价受试样品是否具有调节细胞免疫的功能。（1）小鼠脾淋巴细胞转化实验。（2）迟发型变态反应有两种方法。《保健食品》（第二版）2022/12/2710二、主要保健功能的评价《保健食品》（2023/1/3323.体液免疫功能测定主要通过抗体生成细胞检测和血清溶血素测定试验来评价受试物对体液免疫功能的调节。（1）抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）。（2）血清溶血素测定。4.单核-巨噬细胞功能测定主要通过小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验来评价受试物对单核巨噬细胞功能的影响。（1）小鼠碳廓清实验。（2）小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。《保健食品》（第二版）2022/12/27113.体液免疫功能测定《保健食品》（第2023/1/3335.NK细胞活性测定通常用乳酸脱氢酶（LDH）测定法来评价受试样品对NK细胞活性的影响。6.结果判断（1）增强免疫力功能判定。（2）细胞免疫功能结果断定。（3）体液免疫功能结果断定。（4）单核巨噬细胞功能结果判定。（5）NK细胞活性结果判断《保健食品》（第二版）2022/12/27125.NK细胞活性测定《保健食品》（第2023/1/334（二）抗氧化的功能评价1.过氧化脂质含量测定自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，可使脂类氧化形成过氧化脂质。过氧化脂质进一步分解形成丙二醛、乙烷等物质。如果这些物质在体液和组织中的含量增多，则表示体内脂质过氧化反应增强。2.抗氧化酶活性（1）超氧化物歧化酶（SOD）活性。（2）谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力。3.结果判断（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2713（二）抗氧化的功能评价《保健食品》（2023/1/335（三）辅助改善记忆的功能评价1.跳台试验2.避暗试验3.穿梭箱试验（双向回避试验）4.水迷宫试验5.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。（四）改善生长发育的功能评价1.体重、身长、食物利用率等试验项目2.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2714（三）辅助改善记忆的功能评价《保健食2023/1/336（五）缓解体力疲劳作用的功能评价1.负重游泳试验2.血清尿素测定3.肝糖原测定4.血乳酸测定（1）自配试剂测定方法。（2）乳酸盐测定仪测定方法。5.结果判定《保健食品》（第二版）2022/12/2715（五）缓解体力疲劳作用的功能评价《保2023/1/337（六）辅助降血脂的功能评价用高胆固醇和高脂类饲料喂养动物，可使动物形成脂代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品或在造模时同时给予受试样品，可检测受试样品对高血脂症动物的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、蛋白质的形成、脂质的降解或排泄的影响。1.脂代谢紊乱动物模型——预防性给受试样品2.脂代谢紊乱动物模型——治疗性给受试样品3.结果判定（1）动物试验①辅助降血脂功能结果判定。②辅助降低甘油三酯结果判定。③辅助降低血清总胆固醇结果判定。（2）人体试食试验《保健食品》（第二版）2022/12/2716（六）辅助降血脂的功能评价《保健食品2023/1/338（七）辅助降血糖的功能评价1.降低空腹血糖试验2.糖耐量试验3.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。（八）改善睡眠的功能评价1.直接睡眠试验2.延长戊巴比妥钠睡眠试验3.戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠试验4.巴比妥钠睡眠潜伏期试验5.结果判定《保健食品》（第二版）2022/12/2717（七）辅助降血糖的功能评价《保健食品2023/1/339（九）改善营养性贫血作用的功能评价用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物营养性贫血的作用。1.血红蛋白测定（1）消光系数法。（2）标准曲线法。2.红细胞内游离原卟啉测定3.结果判定（1）动物试验。（2）人体试食试验。《保健食品》（第二版）2022/12/2718（九）改善营养性贫血作用的功能评价《2023/1/340（十）增加骨密度作用的功能评价增加骨密度功能作用的检验方法根据受试样品作用原理的不同分为方案一（检测以补钙为主的受试物）和方案二