【课件】生物技术与工程复习课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

传统发酵技术的应用1.发酵概念：发酵是指人们利用_______，在_____的条件下，将原料通过___________转化为人类所需要的产物的过程2.发酵原理：_________________________________，因此利用它们既可以生产出人们所需要的多种产物3.传统发酵技术概念：直接利用原材料中________的微生物，或利用_________保存下来的面团、卤汁等______中的微生物进行发酵、制作食品的技术4.传统发酵技术特点：以混合菌种的________及__________为主，通常是_______或_______的5.使用酵母制作馒头属于传统发酵技术吗？____________________________________________________________________________________________________________6.豆腐发酵制作腐乳的过程中，参与的微生物有______________等，其中起主要作用的是______；7.豆腐发酵的原理：毛霉等微生物能产生______和_____等；经过微生物的发酵，豆腐中的蛋白质被分解为________________，味道鲜美，易于消化吸收；8.常见利用传统发酵技术制作的食品还有___________________等微生物适宜微生物的代谢不同的微生物具有产生不同代谢产物的能力天然存在前一次发酵发酵物固体发酵半固体发酵家庭式作坊式不属于，使用前一次发酵保存下来的面团进行的才算；例如直接利用空气中毛霉孢子制作腐乳属于传统发酵技术，若直接接种毛霉，则不属于；酵母、曲霉、毛霉毛霉蛋白酶肽酶小分子的肽和氨基酸酱、酱油、醋、泡菜、豆豉9.乳酸发酵微生物—_______①代谢特点

_____细菌，代谢类型为__________在_____的情况下能将_______分解成_____②发酵原理（反应简式）

③生产应用可用于___________、_________等④分布_____、____、________、_______________⑤常见类型__________和________10.酒精发酵微生物—_______①代谢特点是一类_________，是________微生物在_____的条件下能进行________能以_________作为营养物质和能量的来源厌氧无氧葡萄糖乳酸C6H12O6酶2C3H6O3（乳酸）+能量乳制品的发酵泡菜的腌制空气土壤植物体表人或动物的肠道内乳酸链球菌乳酸杆菌异养厌氧型单细胞真菌无氧酒精发酵兼性厌氧多种糖类乳酸菌酵母菌②重要影响因素____是影响酵母菌生长的重要因素；酿酒酵母的最适生长温度约为_____；③发酵原理（反应简式）

④生产应用可用于_____、____________等⑤分布在一些_________的____、____的_____11.醋酸发酵微生物—______①代谢特点_____细菌，代谢类型是__________；当______________时，能将___分解为____；当_______________时则将_____转化为_____，再将_____变为____；多数醋酸菌的最适生长温度为_______；温度C6H12O6酶2C2H5OH（酒精）+2CO2+能量酿酒制作馒头和面包28℃含糖量较高水果蔬菜表面好氧O2、糖源都充足乙醛异养需氧型30-35℃糖醋酸缺少糖源（O2充足）乙醇乙醛醋酸醋酸菌②发酵原理（反应简式）③生产应用醋酸菌可用于制作各种风味的___12.制作泡菜（1）参与发酵的主要微生物及来源

____________________（2）发酵原理①利用____________________来进行发酵；②发酵期间，乳酸会________，当它的质量百分比为_________时，泡菜的口味、品质最佳；③相关反应式（3）发酵条件适宜的_____、严格控制_____条件C6H12O6+2O2酶2CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+能量醋C2H5OH+O2酶CH3COOH（醋酸）+H2O+能量植物体表面天然的乳酸菌植物体表面天然的乳酸菌不断积累0.4%-0.8%C6H12O6酶2C3H6O3（乳酸）+能量温度厌氧（4）步骤________→________________→_______→_________（5）实验分析①盐的作用：______________________②盐水浓度为_________________

盐水浓度要适宜的原因：_______________________________________________③盐水煮沸的目的：_____________________④盐水冷却后使用的目的：_____________________⑤泡菜坛子使用之前要检查密封性的目的：

___________________________________________⑥用水密封泡菜坛的目的：___________________________________________⑦以上说明泡菜制作需要什么条件？___________________________________________⑧泡菜制作过程中，是否只有乳酸菌起作用？

___________________________________________配制盐水原料处理、蔬菜装坛加盐水封坛发酵调味，抑制其他微生物生长质量百分比为5%-20%过高，乳酸发酵将受抑制；过低，杂菌易繁殖，导致泡菜变质杀菌，去除水中的溶解氧为了不影响乳酸菌的生命活动给泡菜坛内创造无氧环境，严格控制厌氧条件给泡菜坛内创造无氧环境，严格控制厌氧条件说明泡菜制作需要在无氧条件下进行（即厌氧条件）不是，还有一些酵母菌和大肠杆菌⑨蔬菜应新鲜的原因：_______________________________⑩泡菜坛应装至____成满？

为什么？

______________________________________________________________________________________________________13.为什么含有抗生素的牛奶不易发酵为酸奶？______________________________________________________14.发酵中期时，由于前期乳酸的积累，pH下降，嫌气状态形成，乳酸杆菌进行活跃的同型乳酸发酵（发酵产物只有乳酸或达到80%以上），大肠杆菌、酵母菌等微生物的活动受到抑制。试分析这种微生物消长现象的原因（为什么乳酸菌会逐渐成为优势菌种）*：____________________________________________________________________________________________________________15.说出乳酸发酵过程中下列变化

乳酸菌数量变化_________________________

乳酸含量变化___________________________

亚硝酸盐含量变化_______________________若不新鲜，蔬菜中的亚硝酸盐含量会升高八防止由于产生CO2而导致发酵液溢出坛外（初期大肠杆菌、酵母菌会产生）防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料变质腐烂牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的作用，而抗生素能够杀死或抑制乳酸菌乳酸菌比其他种类微生物更耐酸；发酵中期pH下降，导致其他种类的微生物的生命活动受到抑制；先增多后减少持续增多，最后保持稳定先增多后减少，最后保持稳定16.泡菜制作过程中，各阶段菌种变化：①发酵初期________________________________________________________________________________________________________②发酵中期（风味最佳）

____________________________________________________③发酵后期

____________________________________________________17.泡菜坛的发酵液表面会长出一层白膜，这层白膜是乳酸菌吗？

______________________________________________________主要是大肠杆菌、酵母菌活跃，消耗大量氧气，使坛内形成无氧环境，会使好氧菌生命活动逐渐被抑制乳酸菌活跃使乳酸不断积累，pH下降，会使不耐酸菌被抑制乳酸继续增加，到一定程度后会使乳酸菌的生长繁殖被抑制不是，是酵母菌繁殖形成的，因为表面氧气含量丰富，不适于乳酸菌生长实验拓展——腌制中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化发酵时期乳酸菌乳酸亚硝酸盐发酵前期发酵中期发酵后期变化曲线少（O2抑制乳酸菌活动）少增加（硝酸盐还原菌的作用）最多（乳酸积累，抑制其他菌活动）增多达到最多后开始下降（硝酸盐还原菌受抑制，部分亚硝酸盐被分解）减少（乳酸积累，pH下降，抑制乳酸菌活动）继续增多，最后保持稳定下降至保持相对稳定（硝酸盐还原菌被完全抑制）18.制作果酒（1）参与发酵的主要微生物及来源：_______________________________（2）发酵原理①许多________________附着有大量的不同种类的_________；②在这些酵母菌的作用下，水果可以发酵成果酒；（通过有氧呼吸________，通过无氧呼吸________________）③相关反应式（3）发酵条件：①温度——将温度控制在________进行发酵；②氧气含量a.氧气充足的情况下，________；b.无氧条件下，进行________；（4）步骤

________→________→________→________→________新鲜水果的果皮表面附着的野生酵母菌新鲜水果的果皮表面野生酵母菌大量繁殖进行酒精发酵产酒精C6H12O6+6O2+6H2O酶6CO2+12H20+能量C6H12O6酶2C2H5OH（酒精）+2CO2+能量18-30℃大量繁殖酒精发酵器具消毒冲洗葡萄榨汁装瓶酒精发酵果酒检测（5）实验分析①用_________________给发酵瓶、榨汁机消毒②冲洗葡萄的目的：_________________③冲洗1-2次即可，能否连续冲洗？为什么？

____________________________________④去梗之前冲洗还是去梗之后冲洗？_____

为什么？_____________________________⑤葡萄汁装入发酵瓶时，能装满吗？___________________

为什么*？

__________________________________________________________________________________________________⑥每隔12h左右将瓶盖拧松一点的目的：________________⑦能全部打开吗？_____

为什么？____________⑧果酒制作过程中，在不灭菌的情况下，酵母菌是如何成为优势菌种的？__________________________________________________________________________________________________体积分数为70%的酒精去除表面灰尘、污物不能，防止果皮表面的野生菌种数量减少之前避免葡萄破损，减少被杂菌污染的机会不能，要留约1/3的空间a.先让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖，耗尽O2后，再进行酒精发酵；b.防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出排出气体（CO2）不能防止杂菌污染发酵后期在缺氧和酸性发酵液中，绝大多数微生物的生命活动受到抑制，而酵母菌可以适应这一环境成为优势菌种⑨在制作果酒过程中，除了酵母菌，是否还有其他微生物生长？它们会对果酒发酵产生影响吗？如果有，如何避免这种影响？_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________⑩如何检测果酒的发酵情况（检测是否产生酒精）？_____________________________________________________19.制作果醋（1）参与发酵的主要微生物及来源：_____________（2）发酵原理①在____的条件下，果酒经醋酸菌的作用可以进一步发酵成果醋；②当____________时，醋酸菌还可以直接将糖分解为醋酸；③相关反应式闻、品尝、用酸性条件下的重铬酸钾溶液检测（橙色→灰绿色）

还有一些乳酸菌和醋酸菌；乳酸菌能将糖分解为甘油、酒石酸等，从而使果酒变质，而在有氧的情况下，醋酸菌能把糖分解成醋酸或者把乙醇转化为乙醛进而转化为醋酸。可以通过调节发酵的温度、pH等来控制乳酸菌含量；可以通过减少O2含量、调节发酵温度、pH来控制醋酸菌含量；空气中的醋酸菌有氧糖源、氧气充足C6H12O6+2O2酶2CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+能量C2H5OH+O2酶CH3COOH（醋酸）+H2O+能量（3）发酵条件：①温度——发酵温度为_______②氧气含量——氧气供应_____（4）步骤

________→________________→________（5）实验分析①在制作果醋的过程中，酵母菌是否还会继续发酵？______________________________________________________________________________________________________②醋酸菌从何而来？______________________________________________________________________________________________________③采用什么措施可以加快果醋的制作？_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________30-35℃充足果酒制作打开瓶盖，盖上纱布果醋检测随着醋酸发酵的进行，发酵液的pH、发酵温度等均不利于酵母菌的生长繁殖，因此酵母菌活性很低，不会继续发酵打开瓶盖后，空气中的醋酸菌会进入果酒发酵液中大量繁殖，其他的菌因不适应环境条件（不能利用乙醇）而不能繁殖

在工业上，后期醋的发酵需要人工接种醋酸菌；或者买一瓶醋，将其打开暴露于空气中，一段时间后在醋的表面会有一层薄膜（即醋酸菌膜），用这层薄膜进行接种亦可；④在制作果酒和果醋的过程中，发酵液分别有哪些变化？其中最明显的变化发生在发酵后多少天？引起变化的原因是什么？________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________⑤在果酒和果醋制作中，哪些做法可防止发酵液被污染？____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________⑥如何检测果醋的发酵情况？__________________________________________________________________________________________________________a.在葡萄酒的制作过程中，发酵液会产生气泡，这是因为酵母菌发酵产生了CO2；b.开始发酵后，CO2产生越来越多，会使发酵液出现“沸腾”现象，在发酵的10天后，这种现象最明显；c.发酵过程产热，会使发酵液温度上升，应注意控温；d.发酵过程中，由果皮进入发酵液的花青素会越来越多，因而发酵液的颜色会逐渐加深变成深红色；e.果醋发酵完成后，发酵液的液面上会出现一层菌膜，即醋酸菌膜；a.发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精清洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用；b.处理葡萄时应先冲洗再去除枝梗；c.排气时只需拧松瓶盖，不要打开瓶盖闻、品尝、使用pH试纸检测检测和比较发酵前后的pH值、观察醋酸菌膜是否形成果酒发酵与果醋发酵的比较果酒发酵果醋发酵发酵菌种菌种来源菌种代谢类型菌种生物类型发酵原理发酵条件温度时间氧气酵母菌醋酸菌附着在新鲜水果果皮表面的野生酵母菌空气中的醋酸菌或人工接种的醋酸菌异养兼性厌氧型异养需氧型真核生物原核生物18-30℃30-35℃10-12d7-8d前期需氧，后期不需氧始终需氧果酒发酵与果醋发酵的装置结构作用酒精发酵时状态醋酸发酵时状态充气口排气口出料口通入空气关闭打开，并接入气泵排出CO2打开打开便于取样监测关闭关闭思考：1.为什么排气口胶管长而弯曲？2.该装置还能继续改进吗？防止空气中微生物的污染可以在充气口填充棉花或者安装其他过滤装置，以防止充入的气体携带外来杂菌污染发酵液等微生物的基本培养技术1.研究和应用微生物的前提（即发酵工程的重要基础）：

___________________________________________________2.在实验室培养微生物的要求：①____________________________________________________②____________________________________________________3.培养基概念：人们按照微生物__________________，配制出供其________的________4.培养基作用：用以_________________________或___________5.培养基分类（按照物理性质分类）①液体培养基__________（如琼脂），呈_____状态

用途：_______________________________②固体培养基__________（如琼脂），呈_____状态

用途：_________________6.怎样将液体培养基制成固体培养基？___________7.实验室中最常用的培养基之一：____________8.微生物在琼脂固体培养基的__________生长，可以形成菌落；防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物为微生物提供合适的营养和环境条件(培养基）要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来（无菌技术）对营养物质的不同需求生长繁殖营养基质培养、分离、鉴定、保存微生物积累其代谢物不含凝固剂液体扩大培养获得大量菌种、常用于工业生产含凝固剂固体分离、计数、鉴定等加入适量琼脂琼脂固体培养基表面或内部9.培养基的基本成分*：一般都含有___、_____、_____、______10.碳源①概念：_______________②分类

________，如CO2、CO32-、HCO3-等

________，如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等③适用范围（一般情况下）

添加无机碳源培养基用来培养_____微生物

添加有机碳源培养基用来培养_____微生物11.氮源①概念：_______________②分类

________，如N2、NO3-、NH3、NH4＋等

________，如牛肉膏、蛋白胨、尿素等③适用范围（一般情况下）

不添加氮源培养基可用来培养_____微生物12.为什么培养基需要氮源？

________________________________________________水碳源氮源无机盐提供碳元素的物质无机碳源有机碳源自养异养提供氮元素的物质无机氮源有机氮源固氮培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的13.含C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的______________14.自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于____15.能否根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型？____________________________________________________________________________________________________________16.无机氮源能给自养型微生物提供能源吗？

_______________________________________________________17.无机盐除了可以调节酸碱平衡、维持一定的渗透压之外，还能有什么功能？

________________________________________________________________________________________________________18.在提供主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对___、___________以及___的需求；19.是否所有培养基中都必须添加碳源、氮源？

_____________________________________________________20.获得纯净的微生物培养物的关键*：____________21.无菌技术应围绕________________展开22.无菌技术主要包括_____和_____碳源、氮源、能源碳源可以，例如自养型微生物所需的碳源来自无机碳源，异养型微生物所需的碳源来自有机碳源可以，例如NH3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（NH3氧化释放的化学能）有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源（如铁细菌）有些无机盐离子可以激活某些酶（如Mg2+激活DNA聚合酶）pH特殊营养物质O2不是，例如分离固氮菌不需要额外添加氮源，其可以直接利用空气中的氮气防止杂菌污染如何避免杂菌的污染消毒灭菌23.无菌技术工作两个方面*①对操作的____、操作者的____和____进行_____和_____；②对用于微生物培养的_____、________和______等进行_____；24.做好消毒灭菌工作后，要注意：_____________________________________25.为避免周围环境中微生物的污染，应如何操作？

_____________________________________25.无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？______________________________________26.消毒①概念：是指使用较为_____的_____、_____或_____等方法杀死物体表面或内部______微生物②方法a.日常生活中经常用到_________；b.对于一些不耐高温的液体如牛奶，可使用_________；c.还可使用________进行消毒，例如用____擦拭双手、用____消毒水源等；d.接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用_________；空间衣着手清洁消毒器皿接种用具培养基灭菌避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染温和物理化学生物一部分煮沸消毒法巴氏消毒法酒精氯气化学药物紫外线照射27.灭菌①概念：是指使用_____的_____方法杀死物体________的微生物，包括_____和_____②方法a.培养基一般用_________，其中___________的效果最好；b.______的和需要保持_____物品，如玻璃器皿、金属用具等，可以用____________；c.接种过程中，微生物的接种工具、试管口、瓶口通过__________来灭菌；28.使用高压蒸汽灭菌锅时，能不能直接密封升温？

______________________________________________________________________________________________________29.高压蒸汽灭菌锅灭菌完毕后，可以立刻放气减压吗？

____________________________________________________________________________________________________________30.酒精消毒的最适范围是_____________________

原因：________________________________________________________________________________________________强烈理化内外所有芽孢孢子湿热灭菌法高压蒸汽灭菌耐高温干燥干热灭菌法灼烧灭菌法不能，一定要将锅内冷空气彻底排出，才能密封升温，否则，可能引起锅内压力达到设定值而温度不能达到要求不能，若立即放气减压瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢，甚至导致容器爆裂（须待灭菌锅内压力降至与大气压相等后才可打开排气阀开盖）体积分数为70%-75%的酒精酒精浓度过高时，菌体表面蛋白质变性过快，从而凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中，酒精浓度过低时，杀菌能力减弱31.用紫外线进行消毒时，可以怎么做来加强消毒效果？

________________________________________________32.高压蒸汽灭菌使用的仪器为_____________，以______为介质，灭菌条件为______________________________；33.干热灭菌法使用的仪器为__________，以______为介质，灭菌条件为____________________；34.灼烧灭菌是将需灭菌的用具直接在酒精灯火焰的_________灼烧，优点是_________________；照射前，适当喷洒酒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液高压蒸汽灭菌锅水蒸气压力200kPa、温度121℃、时间15-30min干热灭菌箱热空气温度160-170℃、时间2-3h充分燃烧层可以迅速彻底地灭菌拓展了解：培养基的类型及用途划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂扩大培养，工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基分离、计数、鉴定化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类、鉴定用途选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物具体处理原理目的选择培养基加入青霉素青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用不加氮源固氮微生物能利用空气中的氮气不加有机碳源自养型微生物能利用无机碳源鉴别培养基加入酚红培养基尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，酚红指示剂变红加入刚果红刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈加入伊红-美蓝大肠杆菌的代谢产物与伊红-美蓝结合，使菌落呈现黑色拓展练习：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养微生物鉴别分解尿素的细菌鉴别纤维素分解菌鉴别大肠杆菌如图可得，编号为___的菌纤维素酶的活性较高C基础培养基实例——牛肉膏蛋白胨培养基*牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，

既是氮源又是碳源；组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水

在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对___、___________以及___的需求；pH特殊营养物质O2微生物例子培养基需要的特殊物质或条件

乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物添加维生素调至酸性调至中性或弱碱性提供无氧的条件现学现用：下列四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，正确的是()A.硝化细菌B.乳酸菌C.酵母菌D.衣藻硝化细菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利用光能碳源CO2糖类糖类CO2氮源NH3N2N2NO3-代谢类型自养需氧型异样需氧型异样需氧型自养需氧型A现学现用：下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）

A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的无机物只提供无机盐

D.无机氮源也能提供能量D类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化生方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃消毒30min或80～90℃消毒30s-1min化学药物生物活体、水源等用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线照射紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等，生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa，温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台常用的消毒和灭菌方法微生物的纯培养1.培养物概念：

在微生物学中，将接种于______内，在________下形成的____________________称为培养物2.纯培养物概念：由_______繁殖所获得的_________称为纯培养物

*_______一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物3.纯培养概念：

__________________4.微生物纯培养的步骤包括__________、_____、_____、_____、_____；5.微生物纯培养的原理：采用__________和_____________将____微生物_____在_________上，之后得到的______一般是由单个微生物形成的________6.菌落的概念：_____的微生物在适宜的_____培养基__________可以繁殖形成________的、_____________的___________7.一个单菌落即一个_____8._____通常可以用来作为鉴定菌种的重要依据9.获得单菌落的方法：_________或_____________培养基合适条件含特定种类微生物的群体单一个体微生物群体单菌落获得纯培养物的过程配制培养基灭菌接种分离培养平板划线法稀释涂布平板法单个分散固体培养基单菌落纯培养物分散固体表面或内部肉眼可见有一定形态结构有子细胞群体种群菌落平板划线法稀释涂布平板法10.培养基的灭菌方法______________________

培养皿的灭菌方法______________________11.倒平板时使培养基冷却到____左右，在_____________倒平板12.培养基灭菌后为什么要冷却到50℃左右时开始倒平板？

_____________________________________________________13.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？

____________14.拔掉瓶塞后为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

___________________________________15.在倒平板的过程中，若不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？_____为什么？_______________________________________________16.倒平板时，能将培养皿的皿盖拿下来放在一边吗？_____应如何做？______________________________________为什么？________________17.刚倒完平板，可以直接倒置吗？______________________18.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

______________________________________________________高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）干热灭菌（也可用湿热灭菌法）50℃酒精灯火焰附近琼脂是一种多糖，在44℃以下凝固，倒平板时，若低于50℃不及时操作，琼脂会凝固避免杂菌污染通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基不能因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生防止杂菌污染培养基不能，应等培养基冷却凝固不能用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙防止皿盖上冷凝的水珠落入培养基，造成污染（避免培养基水分过快蒸发）19.怎么确定所倒平板未被杂菌（主要是细菌）污染？____________________________________________________________________________________________________________20.未接种的培养基直接培养起什么作用？____________________________________________________________________________________________________________21.若未接种的培养基表面出现菌落，说明了什么？

________________________________________22.划线工具______23.连续划线的目的：

________________________________________________________________________________________________________24.平板划线法过程中，接种环蘸了___次菌液；若分五个区划线，则接种环共需灼烧___次；25.灼烧后的接种环可以直接划线吗？______

应如何操作？__________________

为什么？______________________26.从第二次划线开始，都应从____________________________将未接种的空白培养基放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底(该操作也可确定培养基灭菌是否彻底）做空白对照，判断培养基是否被污染，判断培养基灭菌是否彻底；若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基没有污染；说明培养基被污染，实验组的菌落中可能存在杂菌接种环将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经过数次划线后培养可以分离得到单菌落16不可以待接种环冷却后再划线避免温度过高杀死菌种上一次划线的末端开始往下一区域划线27.划线注意事项：①不要将最后一区的划线与第一区相连②每次划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灼烧灭菌④最后一次划线结束也应该进行灼烧灭菌28.整个操作中灼烧接种环的不同目的：29.除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，目的是什么？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端杀死接种环上原有微生物，避免接种环上可能存在的微生物污染菌种使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落（课本：将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落）30.为什么划线时要注意不能划破培养基？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________31.培养酵母菌：完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板（一般做____组，目的：___________）和一个______的平板____，放入____℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的__________中培养_____h；31.警示：①在实验室中，切不可饮食，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染②使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境三平行重复实验未接种倒置28恒温培养箱24-48①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；②存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落微生物的选择培养和计数1.寻找耐高温DNA聚合酶的思路是什么？（熟读了解）2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？（熟读了解）____________________________________________________________________________________________________________3.从环境中获得某种特定种类的微生物的原理（熟读了解）：____________________________________________________________________________________________________________（1）在被石油污染的土壤中可以筛选________微生物（2）在冰川冻土层可以筛选____微生物（3）漆酶属于木质降解酶类，分离产漆酶菌株的首选样品是生活污水吗？_______4.实验室筛选微生物原理：

____________________________________________________________________________________________________________根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找耐高温的酶耐高温生物体高温环境（热泉、火山口）寻找寻找这是因为水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存某些微生物适应某些特定的环境条件，而绝大多数微生物在这种条件下不能生存，就可以从特定的环境中筛选得到特定种类的微生物石油分解耐寒不是人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长5.选择培养基概念：在微生物学中，___________的微生物生长，同时________________微生物生长的培养基6.选择培养基三种筛选方法（熟读了解）：（1）利用营养缺陷进行选择培养

*营养缺陷的微生物不能正常生长（2）利用添加某种化学物质进行选择培养

*添加杀伤性物质，有抗性的可以生长，无抗性的死亡（3）利用改变培养条件进行选择培养

*调节温度、pH等生长条件，只有适应的可以生长7.选择培养基实例（1）目的：分离酵母菌、霉菌等真菌，防止细菌生长

原理：青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用

配制：使用__________的培养基（2）目的：分离固氮菌

原理：固氮微生物能利用空气中的氮气

配制：使用___________________的培养基允许特定种类抑制或阻止其他种类加入青霉素不加氮源（以N2为氮源）7.选择培养基实例（3）目的：分离自养型微生物

原理：自养型微生物能利用无机碳源

配制：使用_______________________的培养基（4）目的：分离耐酸菌

原理：耐酸菌能在pH为酸性的条件下生长

配制：使用___________的培养基8.选择培养基的制备原理：

__________________________________________________________________________________________________________9.如何设计培养基筛选分解尿素的细菌？__________________________________________________________________________________________________________10.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？_____________________________________________________11.在选择培养基上生长的一定是所选择的目的菌吗？

__________________________________________________________________________________________________________不加有机碳源（以CO2为碳源）将pH调至酸性根据不同微生物的特殊营养要求或对其某一化学、物理因素的抗性不同而制备选择培养基以尿素作为唯一氮源设计选择培养基，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同不一定，有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证12.怎么证明一个选择培养基具有选择性？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________13.微生物的选择培养方法：_____________14.稀释涂布平板法基础操作：_________和_________15.稀释涂布平板法方法概述：由于土壤细菌的数量庞大，要想得到特定微生物的纯培养物，必须要对土壤进行________，然后再将菌液_____到制备好的__________上；16.平板划线法的作用：_____________

稀释涂布平板法的作用：_______________________________17.分离纯化微生物具体含义：

______________________________________________________18.③号试管稀释倍数为_____应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性稀释涂布平板法梯度稀释涂布平板充分稀释涂布选择培养基分离纯化微生物分离纯化微生物、统计样品中活菌的数目将单个微生物分散在固体培养基上，经培养得到单菌落（即纯培养物）10419.稀释的具体操作：将___g土样加入盛有___mL______的锥形瓶中，充分____，制成____，取___mL______加入盛有__mL______的试管中，依次_________20.取____mL菌液，滴加到培养基表面（多了不易被吸收）21.涂布时使用的器具为______，应注意_______22.涂布前，涂布器一般浸在_____中，取出后应放在火焰山灼烧，待__________________后，再进行涂布23.待涂布的菌液被__________后，将平板_____，放入_________中培养____d，在涂布有________菌液的平板上就可以观察到分离的______24.微生物的数量测定方法：_________________________、_________________________25.稀释涂布平板法原理：当样品的稀释度足够___时，培养基表面生长的一个____，来源于__________中的一个____；通过计数平板上的____数，就能推测出样品中大约含有多少_____；26.___________将直接影响平板上的菌落数目1090无菌水摇匀菌液1上清液9无菌水等比稀释0.1涂布器涂布均匀酒精酒精燃尽、涂布器冷却培养基吸收倒置恒温培养箱1-2合适浓度单菌落间接计数法——稀释涂布平板法直接计数法——显微镜直接计数法高菌落样品稀释液活菌菌落活菌样品的稀释度27.稀释涂布平板法的计数原则：（1）选择菌落数为_______的平板计数**；（2）____稀释度下，应____对___个平板进行重复计数，然后求出______；28.稀释涂布平板法结果分析：（1）统计的菌落数往往比活菌的实际数目____；（2）统计结果一般用_______而不是用活菌数来表示；29.稀释涂布平板法统计的是_____的数量,统计的菌落往往比活菌的实际数目___，原因是：

______________________________________________30.C代表某一稀释度下平板上生长菌落数的平均值；V代表涂布平板时吸取的稀释液体积数值(mL)；M代表稀释倍数；则每g样品中的细菌数=__________31.将1ml水样稀释100倍，在三个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为___________________________30-300同一至少3平均值少菌落数活菌少当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（C÷V）×M(39+38+37)÷3÷0.1×100×100032.____________、____________是成功统计菌落数目的关键33.显微镜直接计数法原理：利用特定的_________或__________在______下观察、计数，然后再计算_______的样品中微生物的数量34.显微直接计数法使用的计数工具：

___________常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等计数；__________可对细菌等较小的细胞进行观察和计数；35.显微直接计数法优点：________36.显微直接计数法缺点：（1）统计结果一般是__________________

原因：_________________（2）个体___的细菌在显微镜下难以观察恰当的稀释度涂布是否均匀细菌计数板血细胞计数板显微镜一定体积血细胞计数板细菌计数板快速直观活菌数和死菌数的总和不能区分死菌与活菌小现学现用：1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基，判断依据是_____________________________；该类培养基的主要用途为_______________；2.从用途上来讲，培养基二属于_____培养基，目的是为了获得__________________；3.两种培养基共有的培养基成分有：_______________；培养基一的碳源为_______，氮源为_______；培养基二的碳源为_______，氮源为_______；培养基一牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000ml培养基二KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml固体添加了凝固剂琼脂，且比例为1.5%-2%分离、鉴定、计数选择能分解尿素的微生物碳源、氮源、无机盐、水牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1049mL无菌水稀释涂布平板法操作流程①铲取土样，将样品装入纸袋中②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1ⅹ1090mL无菌水1mL③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。1mL1mL1mL1mL1mL10g思考：某两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的有效性：1.甲同学________________；原因是________________；2.乙同学________________；原因是_____________________________；实验操作不合理未设置重复实验组结果计算不合理21与另外两组数值相差太大，应舍去平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途接种效果图相同点通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落接种环涂布器从最后划线的区域挑取稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数①都能分离纯化菌种②都是在固体培养基上进行的两种纯培养方法对比土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.实验原理：

绝大多数微生物都能利用______，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用________________的_____培养基，可以从土壤中分离出_______的细菌2.实验步骤：_______→_________→__________________→______________3.土壤取样①取样地点要求：酸碱度接近____的____土壤

原因：_____________________②取样过程：取样时一般要_________

原因：___________________________________③注意事项：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要____4.制备培养基①作对照：________________

作用：________________________________________脲酶以尿素作为唯一氮源选择分解尿素CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2土壤取样制备培养基样品的稀释与涂布平板葡萄糖微生物的培养与观察中性潮湿细菌适宜在该环境中生长铲去表层土细菌绝大部分分布在距地表3-8cm的土壤层灭菌牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用②实验组：_________

特点：_______________

KH2PO4和Na2HPO4的作用：___________________

尿素作用：_______

葡萄糖作用：_______5.样品的稀释与涂布平板①每个浓度至少设置___个平板

1.2.3平板是____组，为____培养基，做3组的目的_______4是_____组，为__________培养基②整个实验还需要设置2个平板，是哪两个？_______________________________________

目的：_____________________________________________选择培养基以尿素为唯一氮源提供无机盐、调节pH氮源碳源4实验选择平行重复对照牛肉膏蛋白胨不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基用来判断培养基中是否含有杂菌（培养基灭菌是否合格）③为获得菌落数在______之间适于计数的平板，测细菌时，一般选用____________倍稀释的稀释液进行平板培养；④在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样才能保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？__________________________________________________________________________________________________⑤本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前________，例如，在标记培养皿时应该注明_____、________和平板上培养样品的______等；⑥标记时注意标记在皿___，不能标记在皿___；30-300104、105、106选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养（例如可以将1×103-1×107倍稀释的稀释液分别涂布平板上培养）做好标记组别培养日期稀释度底盖6.微生物的培养与观察①培养条件：细菌一般在_______的温度下培养_____；②观察：每隔____统计一次菌落数目，选取菌落数目_____时的记录作为结果③为什么选取菌落数目稳定时的记录作为结果？

_________________________________④一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出_____的________，如形状、大小和颜色等7.结果分析①说出下列各组培养基的目的：

3组接种的选择培养基：

_______________________________

1组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：

_______________________________

不接种的选择培养基：

_______________________________

不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：

_______________________________30-37℃1-2d24h稳定防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目稳定菌落特征对土壤中分解尿素的细菌分离和计数判断选择培养基是否具有选择作用验证选择培养基中是否含有杂菌验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌②说出以下现象对应的结果分析③样品稀释操作成功的标志是什么？

_______________________________④得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？

_______________________________现象分析未涂布培养基上无菌落生长未涂布培养基上有菌落生长牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目培养基未被杂菌污染培养基被杂菌污染选择培养基具有选择作用得到2个或2个以上菌落数在30-300的平板不一定，还需要进一步的鉴定拓展——分解尿素细菌的进一步鉴定1.原理细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌；2.方法在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：

*液体培养基可以直接看液体的变色情况；

*固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带；

*红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越___强发酵工程及其应用1.发酵工程的基本环节其中发酵工程的中心环节是___________2.选育菌种①目的：________________②选育方法（菌种来源）

___________、________或___________*无杂交育种③菌种选育的重要性（意义）

优良的菌种不仅具有健壮，不易退化，其发酵产品的产量高、质量稳定等优点，它往往还会赋予发酵产品独特的风味，因此菌种选育环节在很大程度上决定了生物发酵产物的成败3.扩大培养①目的：____________②原因：_______________一般较大，因此，需要接入的__________大（数目多）③扩大培养的培养基：一般为__________选育菌种扩大培养培养基的配制、灭菌接种发酵罐内发酵产品的分离、提纯发酵罐内发酵获得性状优良的菌种自然界中筛选诱变育种基因工程育种获得更多的菌种工业发酵罐的体积菌种总体积液体培养基4.培养基的配制、灭菌①配制要求a.在___________，（结合菌种代谢特点）选择原料制备培养基；b.在生产实践中，培养基的配方要经过________才能确定（即不断优化培养基）；