实验-抗菌药物敏感性试验-课件

实验抗菌药物敏感性试验实验抗菌药物敏感性试验1目的要求1．掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义。2．掌握纸片扩散法的质量控制。目的要求1．掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果2器材和试剂1．菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。2．培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）。3．试剂：无菌肉汤、0.5麦氏标准比浊管、抗菌药物纸片。4．其他：无菌棉拭、镊子、毫米尺、接种环。器材和试剂1．菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃3步骤和方法（一）原理（二）方法（三）结果步骤和方法（一）原理4（一）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种检测菌的琼脂平板上。在纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内检测菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对检测菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。（一）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种检测菌的5（二）方法1.挑取孵育16～24h的血平板上数个菌落置于肉汤管中，校正浓度至0.5麦氏比浊标准。2.用无菌棉拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后，在MH琼脂表面均匀涂布3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周。3.室温干燥3~5min后贴抗菌纸片，各纸片中心距离不小于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。4.平板室温放置15min后倒放于培养箱中培养。（二）方法1.挑取孵育16～24h的血平板上数个菌落置于肉汤6实验--抗菌药物敏感性试验-课件7药敏纸片的选择待测菌药物金黄色葡萄球菌ATCC25923AMK、PEN、OXA、VAN、GEN、CIP大肠埃希菌ATCC25922AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM铜绿假单胞菌ATCC27853AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM药敏纸片的选择待测菌药物金黄色葡萄球菌ATCC25923AM8（三）结果1.结果判读：平板置黑色无反光背景上，测量抑菌环的直径。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环；磺胺药在抑菌环内会出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。（三）结果1.结果判读：9（三）结果2.结果解释：用毫米尺量取抑菌圈直径，参照标准判读结果。按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。3.质量控制：标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围，应视为失控而不发报告，须及时查找原因，予以纠正。（三）结果2.结果解释：用毫米尺量取抑菌圈直径，参照标准判读10影响结果的因素培养基抗菌药物纸片菌量操作质量影响结果的因素培养基11培养基pH：7.2～7.4最适宜，碱性扩大氨基糖苷类药物的抑菌环，酸性扩大四环素类药物的抑菌环。琼脂含量：影响抑菌环的大小。厚度：影响抑菌环的大小，以4mm为宜。培养基pH：7.2～7.4最适宜，碱性扩大氨基糖苷类药物的抑12抗菌药物纸片纸片含药量：与纸片的重量、吸水性、直径等有关，影响抑菌环的大小，批量制备。纸片的保存：须在有干燥剂的容器内低温(-10℃以下)保存。只拿出少量放4℃备日常工作用。装纸片的容器从冰箱取出后，必须在室内温暖l0分钟以上才可打开。抗菌药物纸片纸片含药量：与纸片的重量、吸水性、直径等有关，影13菌量加大菌量：抑菌环减小。减少菌量：抑菌环扩大。菌量加大菌量：抑菌环减小。14操作质量平板使用时应放于35℃温箱30min，去除过多的水分。接种细菌后应室温放置3~5min，待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。培养温度：35℃为宜。平板堆放：不宜超过两个，以使其受热均匀。测量抑菌环：仔细、准确。操作质量平板使用时应放于35℃温箱30min，去除过多的水分15实验抗菌药物敏感性试验实验抗菌药物敏感性试验16目的要求1．掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义。2．掌握纸片扩散法的质量控制。目的要求1．掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果17器材和试剂1．菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。2．培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）。3．试剂：无菌肉汤、0.5麦氏标准比浊管、抗菌药物纸片。4．其他：无菌棉拭、镊子、毫米尺、接种环。器材和试剂1．菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃18步骤和方法（一）原理（二）方法（三）结果步骤和方法（一）原理19（一）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种检测菌的琼脂平板上。在纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内检测菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对检测菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。（一）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种检测菌的20（二）方法1.挑取孵育16～24h的血平板上数个菌落置于肉汤管中，校正浓度至0.5麦氏比浊标准。2.用无菌棉拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后，在MH琼脂表面均匀涂布3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周。3.室温干燥3~5min后贴抗菌纸片，各纸片中心距离不小于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。4.平板室温放置15min后倒放于培养箱中培养。（二）方法1.挑取孵育16～24h的血平板上数个菌落置于肉汤21实验--抗菌药物敏感性试验-课件22药敏纸片的选择待测菌药物金黄色葡萄球菌ATCC25923AMK、PEN、OXA、VAN、GEN、CIP大肠埃希菌ATCC25922AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM铜绿假单胞菌ATCC27853AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM药敏纸片的选择待测菌药物金黄色葡萄球菌ATCC25923AM23（三）结果1.结果判读：平板置黑色无反光背景上，测量抑菌环的直径。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环；磺胺药在抑菌环内会出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。（三）结果1.结果判读：24（三）结果2.结果解释：用毫米尺量取抑菌圈直径，参照标准判读结果。按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。3.质量控制：标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围，应视为失控而不发报告，须及时查找原因，予以纠正。（三）结果2.结果解释：用毫米尺量取抑菌圈直径，参照标准判读25影响结果的因素培养基抗菌药物纸片菌量操作质量影响结果的因素培养基26培养基pH：7.2～7.4最适宜，碱性扩大氨基糖苷类药物的抑菌环，酸性扩大四环素类药物的抑菌环。琼脂含量：影响抑菌环的大小。厚度：影响抑菌环的大小，以4mm为宜。培养基pH：7.2～7.4最适宜，碱性扩大氨基糖苷类药物的抑27抗菌药物纸片纸片含药量：与纸片的重量、吸水性、直径等有关，影响抑菌环的大小，批量制备。纸片的保存：须在有干燥剂的容器内低温(-10℃以下)保存。只拿出少量放4℃备日常工作用。装纸片的容器从冰箱取出后，必须在室内温暖l0分钟以上才可打开。抗菌药物纸片纸片含药量：与纸片的重量、吸水性、直径等有关，影28菌量加大菌量：抑菌环减小。减少菌量：抑菌环扩大。菌量加