淄职毕业论文哌拉西林和他唑巴坦的含量测定

淄博职业学院毕业论文-9-摘要应用反相高效液相色谱法同时测定哌拉西林和他唑巴坦的含量。方法：以咖啡因为内标，uBondapakC18为固定相。甲醇-水(34.5:65.5)为流动相，检测波长为220nm流速为1.0ml/min。结果:哌拉西林的线性范围为40～200ug/ml（r=0.9996，n=6)，他唑巴坦的线性范围为5.0～25.0ug/ml(r=0.9991，n=6)，平均回收率RSD(n=5)为哌拉西林(100.2±0.61)%，他唑巴坦唑(99.03±0.90)%。结论：本法简便、快速、准确。关键词：哌拉西林；他唑巴坦；含量测定引言哌拉西林(piperacillin)是广谱高效半合成青霉素，已临床使用多年，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有良好的抗菌活性，但对多种细菌耐药株产生的β-内酰胺酶不稳定；他唑巴坦(tazobactam)是新一代不可逆竞争性β-内酰胺酶抑制剂，其抑制作用优于克拉维酸、舒巴坦．他唑巴坦通过抑制内酰胺酶使哌拉西林对众多产酶革兰氏阳性菌、阴性菌和厌氧杆菌抗菌作用增强，抗菌谱宽，较已临床应用多年的舒巴坦/氨苄西林，克拉维酸/阿莫西林等具更广的抗菌谱和适应性，两药制成复方制剂的抗菌谱广、抗菌作用强。国内研究测定哌拉西林含量的方法较多，有旋光法[1]、高效液相色谱法[2.3]等。本文应用反相高效液相色谱法，建立一种内标法同时测定哌拉西林和他唑巴坦制剂中两组分含量的方法。1仪器和试剂1.1仪器Waters高效液相色谱仪，Waters510高压泵、Waters484紫外检测器、U6K进样器(美国Waters公司)；WDL-95工作站(科学院大连化学物理研究所、国家色谱研究分析中心)；uBondapakC18色谱拄(大连依利特科技仪器有限公司)；Mil1i-QLaBo小型纯水机(Millipore公司)；765MC紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)。1.2试剂哌拉西林对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量91.3%)；他唑巴坦对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量96.42%)；咖啡因对照品(上海融禾医药科技发展有限公司)；甲醇(色谱纯，天津四友化工有限公司)；注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠（齐鲁天和惠世制药有限公司)；四丁基溴化铵(分析纯)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：uBondapakC18(300mm×40mm)；流动相：甲醇-水(每1000ml水中含浓度5.0mmol/L四丁基溴化铵27.3ml，用磷酸调节pH至5.0±0.1(34.5:65.5)；内标：咖啡因；检测波长：220nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温。2.2标准曲线的制备2.2.1贮备液的制备：取哌拉西林对照品约50mg和他唑巴坦对照品约50mg，精密称定，分别置50ml和500ml容量瓶中。用甲醇溶解后加超纯水稀释至刻度，混匀，得哌拉西林和他唑巴坦的浓度分别约为1000ug/ml和100ug/ml的贮备液。取咖啡因对照品15mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用热水溶解后加超纯水稀释至刻度，混匀，得浓度为150ug/ml的内标贮备液。2.2.2标准曲线的制备分别精密吸取哌拉西林贮备液0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2.0ml和他唑巴坦贮备液0.5、0.75、1.0，1.5、2.0、2.5ml于10ml容量瓶中．各加入1.0ml咖啡因溶液，加超纯水稀释至刻度，混匀。配成的浓度分别为哌拉西林40、60、80、120、160、200ug/ml，他唑巴坦5、7．5、10、15、20、25ug/ml；内标浓度为15ug/ml的标准溶液，进样量l0ul，以组分峰与内标峰面积比为R，相应的组分浓度为C．得回归方程：哌拉西林：C：38.5010R-7.7387，r-0.9996；他唑巴坦C：66.9643R-4.2188，r-0.9991。2.3精密度试验取注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠样品约120mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加超纯水至刻度，混匀。精密吸取样品溶掖lml置l0ml容量瓶中，加入内标液1.0ml，加超纯水至刻度，经微孔滤膜过滤后取10ul滤液进样。连续测定5次，计算其精密度，得结果：哌拉西林RSD为0.60%．他唑巴坦RSD为0.65%。2.4稳定性试验取上述样品溶液在室温下放置0、2、4、8、12h后分别测定含量，并分别于1、2、3、4、5d后测定含量结果显示：1d后哌拉西林含量为99.27%，他唑巴坦含量为99.83%；5d后哌拉西林降为82.22%，他唑巴坦降为92.05%。哌拉西林和他唑巴坦的日内RSD分别为0.79%和1.8%，日间RSD为9.3%和3.6%：两者在ld内稳定。2.5加样回收试验精密称取已知含量的样品粉末约50mg。加精密称定的哌拉西林和他唑巴坦对照品适量，配成高、中、低3种浓度的试液，分别为哌拉西林50、65、80ug/ml，他唑巴坦15、20、25ug/ml。按标准曲线项下方法测定两组分含量，计算回收率：按《中国药典》[5]方法测定样品中哌拉西林的加样回收率，并对结果进行比较。结果见表1。 表1内标法与CHP外标法加样回收试验对比(n=5)药物浓度内标法CHP法PH值X（%）RSD(%)X（%）RSD(%)哌拉西林低99.900.1099.401.5＞0.05中100.90.7299.920.58＞0.05高99.840.27100.31.2＞0.05他唑巴坦低99.360.46中98.450.44高99.680.872.6样品含量测定取同一批号注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠5瓶，测定平均装量。精密称取样品3份，分别置100ml容量瓶中，配成约含他唑巴坦12ug/ml、哌拉西林96ug/ml的溶液，经过滤后，按标准曲线项下方法操作，计算其浓度。按产品标准的测定方法[4]和《中国药典》[5]方法对样品进行测定，并经统计学处理，结果见表2。表2注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠含量测定(n=3)批号药物内标法产品方法CHP法P值※含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)081024301哌102.51.999.920.41101.60.87＞0.05他98.032.099.880.38＞0.05081024401哌101.10.50102.50.84100.00.26＞0.05他98.260.2197.061.3＞0.05081024501哌100.40.35101.40.7598.530.87＞0.05他98.130.2198.060.94＞0.05注：哌：哌拉西林，他：他唑巴坦；※P值是产品方法和《中国药典》方法分别与内标法进行比较。3讨论3.1pH的选择有文献报道，在pH4.0条件下可同时测定哌拉西林和他唑巴坦的含量，但在实验测定时发现，在pH4.0条件下哌拉西林保留时间长且峰形宽，随着流动相pH值的升高，哌拉西林的保留时间变短，峰形变窄，当pH5.0±0.1时，能使它与内标分离良好且保留时间短，峰形对称，哌拉西林和他唑巴坦两峰高的比例合适。3.2流动相的选择本方法采用甲醇-水作为流动相，比用乙腈【5】作为流动相安全且经济，配制方法简单、方便。水相中加入四丁基溴化铵反相离子，可改善他唑巴坦的峰形，减少拖尾；哌拉西林对甲醇量的变化灵敏，随着甲醇量的增加，峰形将变窄，保留时间变短。经过反复实验测定，得到合适的流动相配比为甲醇:水-34.5:65.5，此时各峰峰形好，分析时间短(在8min内完成)。3.3内标的选择分别对咖啡因和与他唑巴坦结构相近的舒巴坦进行考察，在不同色谱条件下进行测定，发现舒巴坦与他唑巴坦不能完全分离，而咖啡因能与各峰分离良好。且咖啡因稳定性好，可长时间放置，在同一色谱条件下峰形稳定。3.4波长的选择经紫外扫描得哌拉西林最大吸收约在230nm，他唑巴坦的最大吸收约在210nm。为提高灵敏度且减少杂质峰的影响．检测波长应为220nm。3.5稳定性样品在一天内稳定，他唑巴坦稳定性良好，但哌拉西林五天后含量降为82.22%。建议样品的测定最好在一天内完成。3.6方法比较按产品标准的测定方法，在相同固定相下，以甲醇-水-10%四丁基氢氧化铵溶液(450:535:15，用磷酸调节pH至3.5)为流动相，检测波长为220nm，对相同样品进行测定。结果显示，他唑巴坦前有一不完全分离的杂峰,影响计算结果，而且哌拉西林保留时间长，两组分的检测灵敏度低。含量测定方法因《中国药典》、《美国药典》、《英国药典》均只收载了哌拉西林的测量测定方法，没有他唑巴坦测量测定方法，因此只作哌拉西林的对照。本方法得到的结果与《中国药典》方法、产品标准方法相比无明显差异，但能同时测定极性相差较大的哌拉西林和他唑巴坦两组分的含量，而且检测灵敏度高，操作简便、准确，分析时间短。参考文献[1]黄老金.旋光法测定注射用哌拉西林钠的含量[J]．上海医药，1997，(1)35.[2]袁耀佐，胡昌勤，金少鸿.他唑巴坦及其制剂注射用哌拉西林钠/他唑坦钠的HPLC含量测定方法的建立[J]．药物分析杂志，1999，19(4)：256.[3]TsukamotoT，UshioT．Determinationof(2S，3S，5R)-3-methyl-7-oxo-3-(1H-1,2,3-triazo-1-ylreeky)-4-tkia-1-azobicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylicacid4,4-deoxide(YTR一830H)andpiperacillininpharmaceuticalpreparationsbybigh-performanceliquidchromatographv[J]．Chromatogr.A、1994，678(1)：69.[4]中华人民共和国国家药品监督管理局试行标准[S]．WS-198(X-170)-99(1).[5]中华人民共和国药典委员会.中国药典(二部)[S]．2000年版．北京：化学工业出版社，2000，470.谢辞在这里我首先要感谢的是我的指导老师，本论文是在老师的亲切关怀和耐心指导下完成的。论文成稿，得到了老师的热情鼓励和悉心指导，凝聚了恩师心血。她严谨的治学态度，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我，使我受益匪浅。老师不仅在学业上给我以精心指导，同时还在生活上给我以无微不至的关怀，在此谨向老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。在实习过程中，得到上司的悉心指导和无私帮助，同时还