分子肿瘤学基础课件

分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累分子肿瘤学基础分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累优秀精品课件文档资料毒理学教研室徐德祥分子肿瘤学基础一、问题的提出和国内外研究现状信息技术教育是一项面向未来的现代化教育，它对于提高学生适应信息社会的能力，全面推进素质教育具有十分重要的意义。信息技术课具有发展性、趣味性、综合性、可操作性等特点，在网络化的教学环境中，信息技术教学能够满足学生发展的需求。但是，我国的信息技术课程深受基础学科中传统班级授课制的影响，重视基础知识和基本技术技能的学习和掌握，但使用传统教学方式进行信息技术教学却难以适应不同层次的学生的发展。校本课程是以学校为主体，自主开发和发展的一门课程，是建立在学校和学生的差异性基础上的，它以适应不同学校的实际情况，满足不同学生的个性发展需要为目的，照顾了学生的个别差异，满足学生多样化的需要。目前，国外非常重视信息技术教育，其信息技术的教学理念跟我们有较大的差异。如美国教师的信息技术课堂不是单纯地强调学生获取知识，而是注重培养学生获取与整理信息的能力及自主学习的能力，突出学生在教学过程中的主体地位，尤其注重培养学生的信息素养而非技术素养。因此，我们提出了进行初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究的课题。二、研究的意义和研究价值进行初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究，其研究的意义主要表现在：1.体现“以人为本”的现代教育理念，凸显学校教育“促进学生发展”的特征。2.体现学生的主体性特征，凸显信息技术教育对学生信息素养的培养。开展初中信息技术网络化校本课程开发与实施的研究，有利于信息技术课程三维目标的实现；有利于培养学生自主学习、探究学习、合作学习的方法；有利于学生信息素养的培养；有利于促进学生的全面发展。对于初中信息技术教学具有广泛的实践价值和推广价值。三、研究的主要观点和创新之处开展初中信息技术网络化校本课程开发与实施的研究，把信息技术教学与学校的校园文化、班级文化，学生心理教育问题、德育问题、科技创新问题，以及受社会关注的热点问题等进行整合，把信息技术作为学生学习的工具，形成网络化的信息技术校本课程，实现教材多媒体化、资源网络化、教学个性化、学习自主化的创新，在信息技术教学中坚持以人为本的教学策略，注重学生的发展，注重学生信息素养的培养。四、研究目标、研究内容和研究思路1.研究目标。在信息技术教学中，以促进学生发展为中心构建初中信息技术网络化校本课程，将学生的发展和信息素养的培养作为信息技术教学的核心目标。2.研究内容。以学生的全面发展为主线构建网络化信息技术校本课程。（1）注重学生信息素养的培养，把校园文化、班级文化、社会实际生活与信息技术整合，构建网络化信息技术校本课程。（2）以学生发展为主线，以培养学生的信息素养为核心，构建能够体现“自主、合作、探究”这一新课程理念的特色资源专题网站，以构成网络化信息技术校本课程。3.研究思路。根据学生的发展特点，确定初中信息技术校本课程的三维目标，根据学生的发展特点的进行教学，使学生在信息技术教育教学中的情感得到提升，态度得到转变，从而影响价值观的形成。培养学生自主学习的方法和获取信息、整理信息的能力，促进学生的全面发展。4.研究方法：行动研究法五、初中信息技术网络化校本课程开发与应用的实践近年来，我们组织信息技术教师根据初中信息技术教材特点，开放了适合初中学生心理发展特点的网络化课程资源。利用这些课程，一些年轻教师在省市的信息技术优质课评比中，获得一、二等奖。比较有影响力的研究成果有：对这些课程资源分析比较，发现有以下几个特点：1.网络化。各个课程资源均是以主题学习网站或网页的形式出现，学生通过浏览网页就可实现访问课程资源。2.兴趣化。各个课程资源中集成了各种能够激发学生学习兴趣的内容，如游戏、歌曲、视频、动画等，比较容易帮助教师创设教学情境，激发学生学习兴趣。3.课程化。各个课程资源有较强的针对性，针对信息技术教材中的某一课或者某一个单元知识点开发课程资源。通过学习网络资源，学生能够掌握课程标准所要求的知识点。4.易操作。根据主题学习网站的视频教程或自主学习课程，学生比较容易实现自主学习、网络学习、共享学习。5.交互性。利用课程资源网站中的聊天室、留言板，实现了人机、师生、生生的交互性。六、反思与展望在使用信息技术网络化校本资源的过程中，我们也发现了一些不足，比较集中的是开发比较成熟的网络化校本资源需要比较长的时间，开发出成熟的作品需要比较长的周期，因此，需要多位信息技术教师通力合作，及早准备，实现信息技术网络化校本资源的模块化，缩短开发时间。希望在不久的将来能够开发出整个初中信息技术全部课程的网络化校本资源，实现初中信息技术网络教学，能够让学生实现网络环境下的自主学习，发展个性，张扬个性。注：本文是河北省教育科学研究“十二五”规划2012年度专项课题《初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究》的研究成果【责编张景贤】音乐欣赏是音乐教学的重要组成部分，学生对音乐欣赏课的学习效果如何，取决于其对音乐作品思想内容、音乐形象的感悟和理解。由于农村学校的学生对音乐的感受能力比较差，因此，每次上欣赏课学生的注意力总是不集中。我深知初中学生正处于心理发展转变的关键时期，对外界的感受非常敏感，不能一味地批评和指责，相反，要利用好音乐欣赏课让音乐的美感来感染学生、陶冶学生，从而使学生逐步形成健康的音乐审美能力。为了实现这一目标，在教学中，我主要在以下几个方面进行尝试，也取得了一些效果，愿与大家一起分享。一重视直观教学，激发学生学习音乐的兴趣记得一位著名的音乐教育家曾经说过这样的话：“（教师要）激发学生对音乐的兴趣，是把音乐的魅力传递给他们的必要条件。”这句话已经被许多音乐教育者奉为至理名言。还有著名的科学家爱因斯坦曾说过：“兴趣是最好的老师。”从这些名家的观点中我们不难总结出如下结论：教师要努力激发学生对音乐的学习兴趣，并培养学生的音乐修养，这对于健全学生的审美能力、提高学生的整体素质都有着特殊的意义。因此，在上音乐课时，我先播放一些学生们感兴趣的流行歌曲，然后再让他们谈一谈这些歌曲好在哪里，学生们争先恐后地说出了自己的观点，谈的都非常好，这时我会告诉学生：“你们对音乐很有欣赏能力”，学生们很开心，他们不知不觉地喜欢上欣赏课了。在我们的音乐欣赏课中，学生对音乐的认识主要靠灵敏的听觉以及适当的想象。其实，我们还要知道，视觉对音乐来说也是一种很好的欣赏形式。在教学过程中，我们教师不妨可以考虑采取一些比较直观的教学方法，或许能发挥学生多种感官的通觉作用呢！比如在教授一首民族乐曲《赶圩归来阿哩哩》时，考虑到这个曲子强烈和独特的民族特色，我结合该曲的作者情况，向大家进行讲解来辅助音乐欣赏教学：曲作者黄有异，是广西歌舞团的，为了编创这首曲子，黄有异曾经亲自到彝族村寨生活了数年，在体验生活中，他根据彝族曲调的特色，创作出了这首节奏优美欢快的、民族色彩浓烈的曲子。我的讲述，让学生认识到这是一首表达彝族人民幸福生活的曲子，其中赶圩这一特定的场景，又体现了美丽的彝族姑娘在赶圩过程中的快乐以及生活的富足。学生通过了解激发了兴趣，所以在欣赏音乐时就更加用心了。我教学生们演唱经典歌曲《保卫黄河》时，为了引导同学们展开丰富的想象，我找到了关于黄河保卫战的彩色挂图，在课上展示给大家，引起了大家的兴趣。多媒体教学的兴起，使课堂更加生动精彩、形象逼真。学生通过多种感官的感受和体验，对于理解、评价音乐有了比较深刻的认识。二师生互动，视、听并举在音乐欣赏教学中，教师与学生都要同时进入“倾听”音乐的状态，这样做便于把学生的注意力都吸引到课堂上来，从而从听觉上培养学生对音乐的感知能力，同时也能提高学生的记忆力。教师等学生“倾听”完音乐后，再介绍作品的体裁、时代背景以及作者的生平，应用多媒体、图片，从视觉到听觉，让学生熟知。在这个过程中，教师在初听实施之前，应该先提出几个需要注意的问题来提示学生：在这个过程中你听到了什么？在你眼前仿佛出现了什么？它是什么风格的歌曲，所表达的是一种什么样的情绪？带着问题进行欣赏，学生的欣赏能力会得到提升。在欣赏马头琴独奏曲《万马奔腾》的教学活动中，利用多媒体播放马头琴演奏方式，感受马头琴的音色，帮助学生理解作品，感受万马奔腾的赛马情景，更加深了学生对音乐作品的深度理解。三在师生的情感互动中，让学生体验音乐师生在情感互动中进行合作教学，这是新课程改革以来教师较为常见的一种教学手段。相比传统的教学方式，它更强调集体学习能力的提升。这个合作的过程，是教师与学生以及学生与学生之间的互相作用，共同体验美、表现美、创造美的完整过程，也是提高学生对音乐的审美能力的过程。在音乐教学中，教师如何做才能让学生获得真正的审美体验呢？笔者通过实践，认为教师应该在课堂上留出一定的自由活动空间给学生，并在这个基础上为他们提供活动的条件。教师与学生融洽的交流与丰富的互动，能够调动学生主动参与到音乐教学过程中的热情，使学生通过自己的亲身体验来学习音乐文化，并在这个过程中尝试进行创造。为了让学生充分发挥自己主观能动性，自觉地进行思考，把自己对生活的理解和认识融进作品中，教师一定要注意鼓励学生进行模糊思维、自由想象，引导他们打开想象的空间，提高他们的欣赏能力，使他们获得审美享受。四在欣赏体验中成为学生中的一员，成为他们的“合作伙伴”如在《红色娘子军》一课的教学中有一个环节，我经过考虑之后，决定让学生自由组合成小队，并列队行进创编与展示。在这个过程中，我则走到学生中间去，参与其中编排有困难的一个小队，与大家共同交流，完成创作。在这里，让学生自由组合成小队进行创编、展示，旨在张扬学生的个性，发展学生的想象力，增强学生音乐表演的自信心，培养学生良好的合作意识，让每个学生享受表现音乐和创编音乐所带来的成功感和愉悦感。总之，新课程理念下的音乐课堂，是师生互动的课堂，师生共营的课堂。让学生在音乐课堂中得到快乐，产生学习音乐的兴趣，培养能力、陶冶性情，从而促进学生审美能力的提高。分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累分子肿瘤学基础分子肿1优秀精品课件文档资料优秀精品课件文档资料2分子肿瘤学基础课件3分子肿瘤学基础课件4分子肿瘤学基础课件5分子肿瘤学基础课件6肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程多因素多阶段：二阶段学说多阶段学说多基因参与：癌基因、抑癌基因细胞凋亡相关基因、肿瘤易感基因肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程多因素7肿瘤的发病与体细胞突变有关癌基因：维持细胞正常生理功能所必须的基因细胞增殖、分化、信号转到体细胞突变学说：肿瘤的发生与癌基因突变有关点突变、DNA扩增染色体重排、甲基化肿瘤的发病与体细胞突变有关癌基因：维持细胞正常生理功能所必须8抑癌基因：纯合缺失或失活而引起恶性转化的基因二次突变学说（Rb基因，视网膜母细胞瘤）

遗传性视网膜母细胞瘤患者（Rb等位基因突变或缺失）：一次突变引起发病非遗传性视网膜母细胞瘤：二次突变突变引起发病抑癌基因：纯合缺失或失活而引起恶性转化的基因9肿瘤易感性和易感基因肿瘤易感性：环境与遗传肿瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突变

DNA修复缺陷代谢酶基因：化学致癌肿瘤易感性和易感基因肿瘤易感性：环境与遗传10三、肿瘤的分子诊断及其研究进展1、分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用

肿瘤的分子诊断涉及到各种恶性肿瘤及癌前病变，主要集中在各种癌基因、抑癌基因及相关基因的检测，分别在蛋白质、RNA、DNA水平进行判断，为肿瘤的基础研究、肿瘤防治和个体化或预见性治疗提供更详尽的证据。（1）肿瘤易感基因的检测（2）肿瘤的分类

对Bcr区基因重排检测：可诊断慢粒并与急粒鉴别。神经母细胞瘤——N-Myc明显扩增和过表达；神经上皮瘤——c-Myc扩增和过表达。三、肿瘤的分子诊断及其研究进展1、分子诊断在肿瘤研究中的意11

（3）肿瘤的早期诊断

（4）肿瘤的预后判断：从分子水平上判断肿瘤的良、恶性及预后，有较高的准确性。肿瘤相关基因的突变、扩增及过表达等常与预后密切相关。

（5）肿瘤的个体化和预见性治疗:肿瘤的发生是多基因、多步骤、多阶段的过程，在发生、发展的不同时期，可能涉及不同的基因和不同的变化形式，而基因的变化和基因间的信号传递与肿瘤临床治疗的敏感性密切相关。提供肿瘤基因变化，对治疗有指导意义。

（6）肿瘤的预后监测（3）肿瘤的早期诊断122、肿瘤基因过表达及其检测

（1）基因过表达的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是肿瘤发生过程中的关键因素。癌基因产物过表达是癌基因激活的重要表现形式之一。癌基因一般为单拷贝基因，在肿瘤细胞内的一些癌基因在DNA复制过程中扩增，常导致基因产物过表达，表现为mRNA和蛋白质量增加。有些抑癌基因突变后可起到癌基因的作用（如p53基因），产生突变型蛋白。2、肿瘤基因过表达及其检测（1）基因过表达的形式13

（2）基因过表达的检测

①表达产物的检测：几乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相应抗体，其中大多数已商品化。

免疫组化（immunohistochemistry）

酶联免疫吸附实验（ELISA）免疫沉淀法：检测并定量分析蛋白质混合物中的靶抗原敏感（可检出100pg的放射性标记蛋白）。与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主细胞中的表达。（2）基因过表达的检测14蛋白印迹法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白质凝胶电泳（分辨率高）和固相免疫测定（特异敏感）的基础上发展的，结合了二者优点，无需同位素标记，具有从混杂抗原中检出特定抗原，或从多克隆抗体中检出单克隆抗体的优势，还可对转移到固相膜上的蛋白进行连续分析，有蛋白质反应均一性、固相膜保存时间长等优点。敏感性为1～5ng。细胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳→蛋白质电转移→封闭→加一抗→加二抗→显色照像。流式细胞仪（flowcytometry）测试法：用荧光标记抗体与含有特异抗原的细胞结合，用流式细胞仪对含不同荧光信号的细胞分类测试，可检测细胞表面受体、标志物或特异性蛋白及细胞的分类分析。蛋白印迹法（Westernblot）：70年代末80年代初15②基因扩增的检测：肿瘤基因扩增可产生过量的表达蛋白，也可表现为基因拷贝数增加和转录产物mRNA增加。经典检测方法为核酸分子杂交，包括原位杂交（insituhydridization，ISH）、荧光原位杂交（FISH）、DNA杂交（Southernblot）、RNA杂交（Northernblot）、原位PCR、逆转录PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

将荧光素标记克隆的DNA片段与染色体或细胞间期染色质杂交，以测定特定的DNA片段是否有缺失或扩增。

原位PCR：结合了PCR与ISH技术优点，在组织切片或细胞涂片上原位对特定DNA或RNA进行扩增，再用特异性探针作原位杂交检测，以达到对靶核苷酸进行定性、定位、定量分析。

逆转录PCR（RT-PCR）

用来扩增从RNA分子中得到的一段特异序列。RNA首先被逆转录为cDNA。用位于一段特异序列或一个基因两侧的引物生成以cDNA为模板的PCR产物，得到阳性产物说明存在特异性的RNA序列。为扩增从mRNA逆转录的cDNA，引物中应含一段目的基因的内含子区，以使从带有基因组DNA的PCR产物中区分出cDNA的PCR产物。经典方法包括RT和PCR两步。

②基因扩增的检测：肿瘤基因扩增可产生过量的表达蛋白，也可表现16（3）肿瘤基因差异表达的检测

控制生物性状的基本结构和功能单位是基因，不同细胞或同一细胞的不同时间与空间基因表达的差异决定着生命活动的多样性，如发育、分化、繁殖、细胞周期调控、衰老、死亡等。实际上，细胞的各种生理过程或病理改变本质上都是由基因表达的改变所决定的。因此获取差异表达的基因将有助于了解正常生理变化和病理改变的分子机制，为基因诊断、基因治疗和发现新的药物靶分子提供新的视野。

（3）肿瘤基因差异表达的检测17①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又称差异显示反转录PCR（DDRT-PCR）

简要流程

对照组处理组↓……反转录……↓mRNA或总RNAmRNA或总RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

扩增产物扩增产物

↘电泳分离↙

↓比较回收差异显示带↓PCR

克隆、杂交、测序↓与Genbank数据库中的已知序列进行同源性匹配确定相关基因①DD-PCR（differentialdisplay18②RSDD（交互式差减差异RNA显示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差减过的RNA或cDNA样品。1998年Kang等，分析了腺病毒转化的大鼠胚胎细胞株E11和获得侵袭性致癌表型的E11-NMT细胞株间的差异表达基因。

E11cDNA文库E11-NMTcDNA文库↓↓交互式差减E11减E11-NMT差减cDNA文库E11-NMT减E11差减cDNA文库↓体内切割↓以锚定引物和5’随机引物PCR扩增↓显示

5%测序胶显示并分离差异条带↓再扩增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表达分析↓克隆并测序，Northernblot确证②RSDD（交互式差减差异RNA显示，reciprocal19（4）基因突变的检测

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶链反应－单链构象多态分析）：单链DNA在中性条件下会形成二级结构，即使有一个碱基不同，也会形成不同的二级结构而出现不同的迁移率。靶DNA或RNA经PCR扩增后，产物变性处理，单链产物经中性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有单个碱基置换、数个碱基插入或缺失等改变时，因迁移率变化就出现泳动变位，从而检测出含有基因突变的DNA或RNA片段。

②杂合双链分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突变型和野生型DNA形成的异源杂合双链在其错配处会形成突起，在非变性胶中电泳时，会产生与相应的同源双链DNA不同的迁移率。

③突变体富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某个编码子部位存在的已知限制性内切酶位点，用连续2次巢式PCR对包括酶切位点的DNA片段进行扩增，在2次PCR之间用相应的内切酶消化扩增产物，野生型因酶切不能进入第2次PCR，而突变型则能完整进入第2次PCR并得到产物的富集。（4）基因突变的检测20④变性梯度凝胶电泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：双链DNA在沿变性剂（甲醛或尿素）电场方向递增的凝胶中进行到与DNA变性温度（Tm）一致的位置时，DNA发生部分解链，迁移率下降。正常DNA分子与突变DNA分子间即使只有一个碱基对的差异，也会在不同位置解链，导致迁移率不同而被分离。两个同源双链DNA分子间有一个碱基对不同时，Tm值就相差1℃或更高，有一个碱基错配的异源双链DNA分子与同源双链DNA分子比较，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技术（DNAchip）：建立在杂交测序基本理论上的DNA分析技术。利用固定在芯片上的几万至几十万条探针与样品杂交，在一步实验中获取大量信息。可用于基因定位、DNA测序、突变分析、表达分析、基因多态性分析、物理图谱和遗传图谱的构建等。使用了光控固相化学合成、集成电路计算机、激光共聚焦扫描、荧光标记探针等多项先进技术，实验全部自动化，操作极简便，可节约大量时间和实验成本。将许多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一块集成电路板上，彼此间重叠1个碱基，并覆盖全部检测基因。将荧光标记的正常和突变DNA分别与两块DNA芯片杂交，因至少存在1个碱基差异，将得到不同的杂交图谱，用共聚焦显微镜分别检测其荧光信号，即可确定是否存在突变。蛋白质芯片、组织和细胞芯片④变性梯度凝胶电泳法（denaturinggradient21⑥

连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）：双链DNA经加热变性后，用2对互补寡核苷酸引物与模板复性。若引物序列与目标序列完全配对，那么2对引物将与各自的目标片段杂交，并在连接酶作用下发生连接。连接产物作为下一次循环的模板。若点突变出现在目标片段上，将不能进行连接反应，不会出现连接产物。⑦

等位基因特异性扩增法（allele-specificamplification，ASA）：设计2个等位基因特异的5’端引物（一个对野生型特异，一个对突变型特异特异）。对于纯合型突变，分别加入两种引物及3’端引物进行两个平行PCR，只有与突变DNA完全互补的引物才能延伸得到PCR产物；对于杂合性突变需定量分析。若错配位于引物3’端，则PCR不能延伸，称为ARMS（amplificationrefractorymutationsystem）；若错配位于引物之间而影响引物退火，称COP或CCA（competiiveoligonucleotidepriming，colorcomplementationassay）。⑥连接酶链反应（ligasechainreaction22⑧染色体分析：肿瘤细胞的染色体畸变是一非常普遍的现象，可分为原发和继发2类：原发性染色体畸变与引起肿瘤的直接原因有关。肿瘤细胞中可发现各种形式的染色体畸变，如缺失、重复、易位、重排、断裂、核内再复制等。继发性染色体畸变主要是肿瘤细胞核型的改变。

FISH：利用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，可同时检测间期与中期细胞的若干个特异性核酸序列。从而能检测多个基因，分辨复杂的染色体易位和微小缺失，区分间期细胞多倍体与超二倍体等。

主要原理：基本反应包括在溶液中经化学修饰的单链探针DNA序列与固定于载玻片上经变性的单链互补DNA序列间形成异质双链，再用与荧光素（FITC）结合的阅读分子定位化学修饰的探针。在总的DNA背景上出现有清晰界限的荧光斑点或成簇的荧光斑点。

PRINS技术（寡核苷酸引物原位DNA合成，oligonucleotideprimedinsituDNAsynthesis）：用非标记的寡核苷酸引物与染色体上靶序列特异性地杂交，在DNA聚合酶作用下引物延伸时，掺入标记的核苷酸，可直接或间接检查标记位点。⑧染色体分析：肿瘤细胞的染色体畸变是一非常普遍的现象，23

比较基因组杂交（comparativegenomichydridization，CGH）：直接检测两个全基因遗传物质不平衡（缺失或扩增）的新方法。

原理：用不同的非同位素标记物，分别标记被检基因组DNA（常为肿瘤DNA）和正常人基因组DNA，两者以1∶1混合后制备探针，共同与正常人中期染色体标本进行染色体原位抑制（CISS）杂交，对不同的荧光物质分别进行检测，以每条染色体长轴个位点的被测DNA与正常DNA荧光强度比，反映两组DNA不同序列的相对拷贝数，并能同时在染色体上定位。（通常肿瘤DNA用FITC标记为绿色，正常基因组DNA用TRITC标记为红色）。⑨DNA序列分析

比较基因组杂交（comparativeg24（5）限制性酶切片段长度多态性分析

RFLP：（restrictionfragmentlengthpolymorphism）当个体的DNA用限制性内切酶切割时，所得到的与正常相比，长度有改变的基因片段。多态性：在不同个体DNA结构上有许多地方有差异，尤其是不编码蛋白质的区域和无重要调整功能的区域表现得尤为突出。在一个基因座上，存在两个或以上等位基因，由这些等位基因所决定的两种或以上的表达或基因型，其中任一种在人群中的频率不低于1%，称为多态性。

直接法：通过限定的内切酶酶切基因组DNA后，与特异性探针杂交后分析；间接法：选用原基因外两翼核酸序列上的多态性探针，用间接连锁法分析。

（5）限制性酶切片段长度多态性分析25（6）端粒酶与肿瘤的关系及检测

端粒（telomere）：位于细胞染色体末端的由2～20kb串联的短片段重复序列（TTAGGG）n及一些结合蛋白组成的特殊结构。在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面具有重要作用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关。人的端粒长达15kb，随着细胞分裂逐渐缩短，每次丢失约50～200个核苷酸。缩短到一定程度，即不能维持染色体稳定时，细胞进入凋亡。与正常细胞相反，肿瘤细胞的端粒长度不随细胞分裂而变化，提示端粒的稳定性对肿瘤细胞进行无限增殖是必须的。

端粒酶（telomerase）：由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白复合物（RNP），含有端粒重复序列的模板，可以自身RNA组分为模板复制合成端粒序列。端粒酶的表达能使细胞永生化。

体内表达端粒酶的细胞群：绝大多数肿瘤细胞、生殖细胞、快速增殖的淋巴造血系统细胞、皮肤基底层细胞、增生期子宫内膜细胞、某些肝细胞、增生的肝组织与气管上皮。

（6）端粒酶与肿瘤的关系及检测26

端粒酶与肿瘤的研究现状：Counter等于1994年首先发现人卵巢癌细胞中有端粒酶表达。近几年的研究表明，人类肿瘤中85%左右的肿瘤细胞存在端粒酶活性的表达。目前有关端粒酶活性表达的研究已覆盖了人类大部分的实体瘤。端粒酶给病理学鉴别病变的良恶性提供了一个很好的标志物：如乳腺癌与乳腺良性病变，大肠癌与癌旁组织，前列腺癌与良性前列腺增生等。在肝细胞肝癌等肿瘤中，端粒酶活性与肿瘤转移、预后及病人存活期密切相关。这些研究结果提示：端粒酶检测可作为极有价值的临床诊断、药效评价、预后判断参数。但直接将端粒酶用于临床诊断还有大量工作。设想用抑制端粒酶活性的方法来达到抑制恶性肿瘤生长，从而未肿瘤的基因治疗开辟新途径，也因细胞可能通过其它维持端粒长度的机制而受到严重挑战。

TRAP法(telomericrepeatamplificationprotocol端粒重复序列扩增法)

TRAP法的改良

接近闪烁分析法

端粒酶与肿瘤的研究现状：Counter等于1994年首先2736、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙

37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科

38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯

39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳

40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子xiexie!谢谢！36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙xiexie!28分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累分子肿瘤学基础分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累优秀精品课件文档资料毒理学教研室徐德祥分子肿瘤学基础一、问题的提出和国内外研究现状信息技术教育是一项面向未来的现代化教育，它对于提高学生适应信息社会的能力，全面推进素质教育具有十分重要的意义。信息技术课具有发展性、趣味性、综合性、可操作性等特点，在网络化的教学环境中，信息技术教学能够满足学生发展的需求。但是，我国的信息技术课程深受基础学科中传统班级授课制的影响，重视基础知识和基本技术技能的学习和掌握，但使用传统教学方式进行信息技术教学却难以适应不同层次的学生的发展。校本课程是以学校为主体，自主开发和发展的一门课程，是建立在学校和学生的差异性基础上的，它以适应不同学校的实际情况，满足不同学生的个性发展需要为目的，照顾了学生的个别差异，满足学生多样化的需要。目前，国外非常重视信息技术教育，其信息技术的教学理念跟我们有较大的差异。如美国教师的信息技术课堂不是单纯地强调学生获取知识，而是注重培养学生获取与整理信息的能力及自主学习的能力，突出学生在教学过程中的主体地位，尤其注重培养学生的信息素养而非技术素养。因此，我们提出了进行初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究的课题。二、研究的意义和研究价值进行初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究，其研究的意义主要表现在：1.体现“以人为本”的现代教育理念，凸显学校教育“促进学生发展”的特征。2.体现学生的主体性特征，凸显信息技术教育对学生信息素养的培养。开展初中信息技术网络化校本课程开发与实施的研究，有利于信息技术课程三维目标的实现；有利于培养学生自主学习、探究学习、合作学习的方法；有利于学生信息素养的培养；有利于促进学生的全面发展。对于初中信息技术教学具有广泛的实践价值和推广价值。三、研究的主要观点和创新之处开展初中信息技术网络化校本课程开发与实施的研究，把信息技术教学与学校的校园文化、班级文化，学生心理教育问题、德育问题、科技创新问题，以及受社会关注的热点问题等进行整合，把信息技术作为学生学习的工具，形成网络化的信息技术校本课程，实现教材多媒体化、资源网络化、教学个性化、学习自主化的创新，在信息技术教学中坚持以人为本的教学策略，注重学生的发展，注重学生信息素养的培养。四、研究目标、研究内容和研究思路1.研究目标。在信息技术教学中，以促进学生发展为中心构建初中信息技术网络化校本课程，将学生的发展和信息素养的培养作为信息技术教学的核心目标。2.研究内容。以学生的全面发展为主线构建网络化信息技术校本课程。（1）注重学生信息素养的培养，把校园文化、班级文化、社会实际生活与信息技术整合，构建网络化信息技术校本课程。（2）以学生发展为主线，以培养学生的信息素养为核心，构建能够体现“自主、合作、探究”这一新课程理念的特色资源专题网站，以构成网络化信息技术校本课程。3.研究思路。根据学生的发展特点，确定初中信息技术校本课程的三维目标，根据学生的发展特点的进行教学，使学生在信息技术教育教学中的情感得到提升，态度得到转变，从而影响价值观的形成。培养学生自主学习的方法和获取信息、整理信息的能力，促进学生的全面发展。4.研究方法：行动研究法五、初中信息技术网络化校本课程开发与应用的实践近年来，我们组织信息技术教师根据初中信息技术教材特点，开放了适合初中学生心理发展特点的网络化课程资源。利用这些课程，一些年轻教师在省市的信息技术优质课评比中，获得一、二等奖。比较有影响力的研究成果有：对这些课程资源分析比较，发现有以下几个特点：1.网络化。各个课程资源均是以主题学习网站或网页的形式出现，学生通过浏览网页就可实现访问课程资源。2.兴趣化。各个课程资源中集成了各种能够激发学生学习兴趣的内容，如游戏、歌曲、视频、动画等，比较容易帮助教师创设教学情境，激发学生学习兴趣。3.课程化。各个课程资源有较强的针对性，针对信息技术教材中的某一课或者某一个单元知识点开发课程资源。通过学习网络资源，学生能够掌握课程标准所要求的知识点。4.易操作。根据主题学习网站的视频教程或自主学习课程，学生比较容易实现自主学习、网络学习、共享学习。5.交互性。利用课程资源网站中的聊天室、留言板，实现了人机、师生、生生的交互性。六、反思与展望在使用信息技术网络化校本资源的过程中，我们也发现了一些不足，比较集中的是开发比较成熟的网络化校本资源需要比较长的时间，开发出成熟的作品需要比较长的周期，因此，需要多位信息技术教师通力合作，及早准备，实现信息技术网络化校本资源的模块化，缩短开发时间。希望在不久的将来能够开发出整个初中信息技术全部课程的网络化校本资源，实现初中信息技术网络教学，能够让学生实现网络环境下的自主学习，发展个性，张扬个性。注：本文是河北省教育科学研究“十二五”规划2012年度专项课题《初中信息技术网络化校本课程开发与实施研究》的研究成果【责编张景贤】音乐欣赏是音乐教学的重要组成部分，学生对音乐欣赏课的学习效果如何，取决于其对音乐作品思想内容、音乐形象的感悟和理解。由于农村学校的学生对音乐的感受能力比较差，因此，每次上欣赏课学生的注意力总是不集中。我深知初中学生正处于心理发展转变的关键时期，对外界的感受非常敏感，不能一味地批评和指责，相反，要利用好音乐欣赏课让音乐的美感来感染学生、陶冶学生，从而使学生逐步形成健康的音乐审美能力。为了实现这一目标，在教学中，我主要在以下几个方面进行尝试，也取得了一些效果，愿与大家一起分享。一重视直观教学，激发学生学习音乐的兴趣记得一位著名的音乐教育家曾经说过这样的话：“（教师要）激发学生对音乐的兴趣，是把音乐的魅力传递给他们的必要条件。”这句话已经被许多音乐教育者奉为至理名言。还有著名的科学家爱因斯坦曾说过：“兴趣是最好的老师。”从这些名家的观点中我们不难总结出如下结论：教师要努力激发学生对音乐的学习兴趣，并培养学生的音乐修养，这对于健全学生的审美能力、提高学生的整体素质都有着特殊的意义。因此，在上音乐课时，我先播放一些学生们感兴趣的流行歌曲，然后再让他们谈一谈这些歌曲好在哪里，学生们争先恐后地说出了自己的观点，谈的都非常好，这时我会告诉学生：“你们对音乐很有欣赏能力”，学生们很开心，他们不知不觉地喜欢上欣赏课了。在我们的音乐欣赏课中，学生对音乐的认识主要靠灵敏的听觉以及适当的想象。其实，我们还要知道，视觉对音乐来说也是一种很好的欣赏形式。在教学过程中，我们教师不妨可以考虑采取一些比较直观的教学方法，或许能发挥学生多种感官的通觉作用呢！比如在教授一首民族乐曲《赶圩归来阿哩哩》时，考虑到这个曲子强烈和独特的民族特色，我结合该曲的作者情况，向大家进行讲解来辅助音乐欣赏教学：曲作者黄有异，是广西歌舞团的，为了编创这首曲子，黄有异曾经亲自到彝族村寨生活了数年，在体验生活中，他根据彝族曲调的特色，创作出了这首节奏优美欢快的、民族色彩浓烈的曲子。我的讲述，让学生认识到这是一首表达彝族人民幸福生活的曲子，其中赶圩这一特定的场景，又体现了美丽的彝族姑娘在赶圩过程中的快乐以及生活的富足。学生通过了解激发了兴趣，所以在欣赏音乐时就更加用心了。我教学生们演唱经典歌曲《保卫黄河》时，为了引导同学们展开丰富的想象，我找到了关于黄河保卫战的彩色挂图，在课上展示给大家，引起了大家的兴趣。多媒体教学的兴起，使课堂更加生动精彩、形象逼真。学生通过多种感官的感受和体验，对于理解、评价音乐有了比较深刻的认识。二师生互动，视、听并举在音乐欣赏教学中，教师与学生都要同时进入“倾听”音乐的状态，这样做便于把学生的注意力都吸引到课堂上来，从而从听觉上培养学生对音乐的感知能力，同时也能提高学生的记忆力。教师等学生“倾听”完音乐后，再介绍作品的体裁、时代背景以及作者的生平，应用多媒体、图片，从视觉到听觉，让学生熟知。在这个过程中，教师在初听实施之前，应该先提出几个需要注意的问题来提示学生：在这个过程中你听到了什么？在你眼前仿佛出现了什么？它是什么风格的歌曲，所表达的是一种什么样的情绪？带着问题进行欣赏，学生的欣赏能力会得到提升。在欣赏马头琴独奏曲《万马奔腾》的教学活动中，利用多媒体播放马头琴演奏方式，感受马头琴的音色，帮助学生理解作品，感受万马奔腾的赛马情景，更加深了学生对音乐作品的深度理解。三在师生的情感互动中，让学生体验音乐师生在情感互动中进行合作教学，这是新课程改革以来教师较为常见的一种教学手段。相比传统的教学方式，它更强调集体学习能力的提升。这个合作的过程，是教师与学生以及学生与学生之间的互相作用，共同体验美、表现美、创造美的完整过程，也是提高学生对音乐的审美能力的过程。在音乐教学中，教师如何做才能让学生获得真正的审美体验呢？笔者通过实践，认为教师应该在课堂上留出一定的自由活动空间给学生，并在这个基础上为他们提供活动的条件。教师与学生融洽的交流与丰富的互动，能够调动学生主动参与到音乐教学过程中的热情，使学生通过自己的亲身体验来学习音乐文化，并在这个过程中尝试进行创造。为了让学生充分发挥自己主观能动性，自觉地进行思考，把自己对生活的理解和认识融进作品中，教师一定要注意鼓励学生进行模糊思维、自由想象，引导他们打开想象的空间，提高他们的欣赏能力，使他们获得审美享受。四在欣赏体验中成为学生中的一员，成为他们的“合作伙伴”如在《红色娘子军》一课的教学中有一个环节，我经过考虑之后，决定让学生自由组合成小队，并列队行进创编与展示。在这个过程中，我则走到学生中间去，参与其中编排有困难的一个小队，与大家共同交流，完成创作。在这里，让学生自由组合成小队进行创编、展示，旨在张扬学生的个性，发展学生的想象力，增强学生音乐表演的自信心，培养学生良好的合作意识，让每个学生享受表现音乐和创编音乐所带来的成功感和愉悦感。总之，新课程理念下的音乐课堂，是师生互动的课堂，师生共营的课堂。让学生在音乐课堂中得到快乐，产生学习音乐的兴趣，培养能力、陶冶性情，从而促进学生审美能力的提高。分子肿瘤学基础聪明出于勤奋，天才在于积累分子肿瘤学基础分子肿29优秀精品课件文档资料优秀精品课件文档资料30分子肿瘤学基础课件31分子肿瘤学基础课件32分子肿瘤学基础课件33分子肿瘤学基础课件34肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程多因素多阶段：二阶段学说多阶段学说多基因参与：癌基因、抑癌基因细胞凋亡相关基因、肿瘤易感基因肿瘤的多因素多阶段多基因参与的过程多因素35肿瘤的发病与体细胞突变有关癌基因：维持细胞正常生理功能所必须的基因细胞增殖、分化、信号转到体细胞突变学说：肿瘤的发生与癌基因突变有关点突变、DNA扩增染色体重排、甲基化肿瘤的发病与体细胞突变有关癌基因：维持细胞正常生理功能所必须36抑癌基因：纯合缺失或失活而引起恶性转化的基因二次突变学说（Rb基因，视网膜母细胞瘤）

遗传性视网膜母细胞瘤患者（Rb等位基因突变或缺失）：一次突变引起发病非遗传性视网膜母细胞瘤：二次突变突变引起发病抑癌基因：纯合缺失或失活而引起恶性转化的基因37肿瘤易感性和易感基因肿瘤易感性：环境与遗传肿瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突变

DNA修复缺陷代谢酶基因：化学致癌肿瘤易感性和易感基因肿瘤易感性：环境与遗传38三、肿瘤的分子诊断及其研究进展1、分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用

肿瘤的分子诊断涉及到各种恶性肿瘤及癌前病变，主要集中在各种癌基因、抑癌基因及相关基因的检测，分别在蛋白质、RNA、DNA水平进行判断，为肿瘤的基础研究、肿瘤防治和个体化或预见性治疗提供更详尽的证据。（1）肿瘤易感基因的检测（2）肿瘤的分类

对Bcr区基因重排检测：可诊断慢粒并与急粒鉴别。神经母细胞瘤——N-Myc明显扩增和过表达；神经上皮瘤——c-Myc扩增和过表达。三、肿瘤的分子诊断及其研究进展1、分子诊断在肿瘤研究中的意39

（3）肿瘤的早期诊断

（4）肿瘤的预后判断：从分子水平上判断肿瘤的良、恶性及预后，有较高的准确性。肿瘤相关基因的突变、扩增及过表达等常与预后密切相关。

（5）肿瘤的个体化和预见性治疗:肿瘤的发生是多基因、多步骤、多阶段的过程，在发生、发展的不同时期，可能涉及不同的基因和不同的变化形式，而基因的变化和基因间的信号传递与肿瘤临床治疗的敏感性密切相关。提供肿瘤基因变化，对治疗有指导意义。

（6）肿瘤的预后监测（3）肿瘤的早期诊断402、肿瘤基因过表达及其检测

（1）基因过表达的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是肿瘤发生过程中的关键因素。癌基因产物过表达是癌基因激活的重要表现形式之一。癌基因一般为单拷贝基因，在肿瘤细胞内的一些癌基因在DNA复制过程中扩增，常导致基因产物过表达，表现为mRNA和蛋白质量增加。有些抑癌基因突变后可起到癌基因的作用（如p53基因），产生突变型蛋白。2、肿瘤基因过表达及其检测（1）基因过表达的形式41

（2）基因过表达的检测

①表达产物的检测：几乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相应抗体，其中大多数已商品化。

免疫组化（immunohistochemistry）

酶联免疫吸附实验（ELISA）免疫沉淀法：检测并定量分析蛋白质混合物中的靶抗原敏感（可检出100pg的放射性标记蛋白）。与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主细胞中的表达。（2）基因过表达的检测42蛋白印迹法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白质凝胶电泳（分辨率高）和固相免疫测定（特异敏感）的基础上发展的，结合了二者优点，无需同位素标记，具有从混杂抗原中检出特定抗原，或从多克隆抗体中检出单克隆抗体的优势，还可对转移到固相膜上的蛋白进行连续分析，有蛋白质反应均一性、固相膜保存时间长等优点。敏感性为1～5ng。细胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳→蛋白质电转移→封闭→加一抗→加二抗→显色照像。流式细胞仪（flowcytometry）测试法：用荧光标记抗体与含有特异抗原的细胞结合，用流式细胞仪对含不同荧光信号的细胞分类测试，可检测细胞表面受体、标志物或特异性蛋白及细胞的分类分析。蛋白印迹法（Westernblot）：70年代末80年代初43②基因扩增的检测：肿瘤基因扩增可产生过量的表达蛋白，也可表现为基因拷贝数增加和转录产物mRNA增加。经典检测方法为核酸分子杂交，包括原位杂交（insituhydridization，ISH）、荧光原位杂交（FISH）、DNA杂交（Southernblot）、RNA杂交（Northernblot）、原位PCR、逆转录PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

将荧光素标记克隆的DNA片段与染色体或细胞间期染色质杂交，以测定特定的DNA片段是否有缺失或扩增。

原位PCR：结合了PCR与ISH技术优点，在组织切片或细胞涂片上原位对特定DNA或RNA进行扩增，再用特异性探针作原位杂交检测，以达到对靶核苷酸进行定性、定位、定量分析。

逆转录PCR（RT-PCR）

用来扩增从RNA分子中得到的一段特异序列。RNA首先被逆转录为cDNA。用位于一段特异序列或一个基因两侧的引物生成以cDNA为模板的PCR产物，得到阳性产物说明存在特异性的RNA序列。为扩增从mRNA逆转录的cDNA，引物中应含一段目的基因的内含子区，以使从带有基因组DNA的PCR产物中区分出cDNA的PCR产物。经典方法包括RT和PCR两步。

②基因扩增的检测：肿瘤基因扩增可产生过量的表达蛋白，也可表现44（3）肿瘤基因差异表达的检测

控制生物性状的基本结构和功能单位是基因，不同细胞或同一细胞的不同时间与空间基因表达的差异决定着生命活动的多样性，如发育、分化、繁殖、细胞周期调控、衰老、死亡等。实际上，细胞的各种生理过程或病理改变本质上都是由基因表达的改变所决定的。因此获取差异表达的基因将有助于了解正常生理变化和病理改变的分子机制，为基因诊断、基因治疗和发现新的药物靶分子提供新的视野。

（3）肿瘤基因差异表达的检测45①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又称差异显示反转录PCR（DDRT-PCR）

简要流程

对照组处理组↓……反转录……↓mRNA或总RNAmRNA或总RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

扩增产物扩增产物

↘电泳分离↙

↓比较回收差异显示带↓PCR

克隆、杂交、测序↓与Genbank数据库中的已知序列进行同源性匹配确定相关基因①DD-PCR（differentialdisplay46②RSDD（交互式差减差异RNA显示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差减过的RNA或cDNA样品。1998年Kang等，分析了腺病毒转化的大鼠胚胎细胞株E11和获得侵袭性致癌表型的E11-NMT细胞株间的差异表达基因。

E11cDNA文库E11-NMTcDNA文库↓↓交互式差减E11减E11-NMT差减cDNA文库E11-NMT减E11差减cDNA文库↓体内切割↓以锚定引物和5’随机引物PCR扩增↓显示

5%测序胶显示并分离差异条带↓再扩增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表达分析↓克隆并测序，Northernblot确证②RSDD（交互式差减差异RNA显示，reciprocal47（4）基因突变的检测

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶链反应－单链构象多态分析）：单链DNA在中性条件下会形成二级结构，即使有一个碱基不同，也会形成不同的二级结构而出现不同的迁移率。靶DNA或RNA经PCR扩增后，产物变性处理，单链产物经中性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有单个碱基置换、数个碱基插入或缺失等改变时，因迁移率变化就出现泳动变位，从而检测出含有基因突变的DNA或RNA片段。

②杂合双链分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突变型和野生型DNA形成的异源杂合双链在其错配处会形成突起，在非变性胶中电泳时，会产生与相应的同源双链DNA不同的迁移率。

③突变体富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某个编码子部位存在的已知限制性内切酶位点，用连续2次巢式PCR对包括酶切位点的DNA片段进行扩增，在2次PCR之间用相应的内切酶消化扩增产物，野生型因酶切不能进入第2次PCR，而突变型则能完整进入第2次PCR并得到产物的富集。（4）基因突变的检测48④变性梯度凝胶电泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：双链DNA在沿变性剂（甲醛或尿素）电场方向递增的凝胶中进行到与DNA变性温度（Tm）一致的位置时，DNA发生部分解链，迁移率下降。正常DNA分子与突变DNA分子间即使只有一个碱基对的差异，也会在不同位置解链，导致迁移率不同而被分离。两个同源双链DNA分子间有一个碱基对不同时，Tm值就相差1℃或更高，有一个碱基错配的异源双链DNA分子与同源双链DNA分子比较，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技术（DNAchip）：建立在杂交测序基本理论上的DNA分析技术。利用固定在芯片上的几万至几十万条探针与样品杂交，在一步实验中获取大量信息。可用于基因定位、DNA测序、突变分析、表达分析、基因多态性分析、物理图谱和遗传图谱的构建等。使用了光控固相化学合成、集成电路计算机、激光共聚焦扫描、荧光标记探针等多项先进技术，实验全部自动化，操作极简便，可节约大量时间和实验成本。将许多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一块集成电路板上，彼此间重叠1个碱基，并覆盖全部检测基因。将荧光标记的正常和突变DNA分别与两块DNA芯片杂交，因至少存在1个碱基差异，将得到不同的杂交图谱，用共聚焦显微镜分别检测其荧光信号，即可确定是否存在突变。蛋白质芯片、组织和细胞芯片④变性梯度凝胶电泳法（denaturinggradient49⑥

连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）：双链DNA经加热变性后，用2对互补寡核苷酸引物与模板复性。若引物序列与目标序列完全配对，那么2对引物将与各自的目标片段杂交，并在连接酶作用下发生连接。连接产物作为下一次循环的模板。若点突变出现在目标片段上，将不能进行连接反应，不会出现连接产物。⑦

等位基因特异性扩增法（allele-specificamplification，ASA）：设计2个等位基因特异的5’端引物（一个对野生型特异，一个对突变型特异特异）。对于纯合型突变，分别加入两种引物及3’端引物进行两个平行PCR，只有与突变DNA完全互补