紫外分光光度法-有机物的定性与定量分析课件

紫外分光光度法

有机物定性定量

仪器分析实验

一、目的要求

1.掌握紫外分光光度法的基本原理和条件。2.掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择，了解最大吸收波长的重要性。3.熟悉朗伯一比尔定律的应用，掌握标准曲线法定量的技术。4.熟练掌握紫外分光光度计和石英比色皿的使用方法。

二、基本原理

【名称】苯甲酸BenzoicAcid【其他名称】安息香酸（carboxybenzene）、苯酸（phenylformicacid）、苯蚁酸

【适应】与水杨酸合用于成人皮肤真菌病，浅部真菌感染如体癣、手癣及足癣等，用于食品和药物制剂的消毒防腐剂，一般浓度为0.2%，或用0.5%的苯甲酸钠，溶解度更好。2σ→σ＊跃迁所需能量最大；σ电子只有吸收远紫外光的能量才能发生跃迁；饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区；吸收波长λ<200nm；例：甲烷的λmax为125nm,乙烷λmax为135nm。只能被真空紫外分光光度计检测到；作为溶剂使用；sp*s*RKE,BnpE3n→σ＊跃迁所需能量较大。吸收波长为150～250nm，大部分在远紫外区，近紫外区仍不易观察到。含非键电子的饱和烃衍生物(含N、O、S和卤素等杂原子)均呈现n→σ*跃迁。4π→π＊跃迁所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫外端或近紫外区，εmax一般在104L·mol－1·cm－1以上，属于强吸收。

（1）不饱和烃π→π*跃迁乙烯π→π*跃迁的λmax为162nm，εmax为:1×104L·mol-1·cm－1。K带——共轭非封闭体系的p

→p*跃迁

C=C

发色基团，但

→

*200nm。max=162nm助色基团取代

（K带)发生红移。165nm217nm

₃

₁

₂

(HOMOLVMO)

max

基-----是由非环或六环共轭二烯母体决定的基准值；无环、非稠环二烯母体：

max=217nm共轭烯烃（不多于四个双键）

*跃迁吸收峰位置可由伍德沃德——菲泽规则估算。

max=基+nii

（2）共轭烯烃中的→*

四、实验步骤

1.溶液的配制

取50mL的比色管6只，蒸馏水清洗干净，编号，用5.00mL吸量管分别准确加入l00μg/ml的苯甲酸标准溶液0、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置。准确移取10.00mL苯甲酸试液，在50mL比色管中用蒸馏水定容四、实验步骤3.有机物的定性

选用苯甲酸试样溶液，以蒸馏水为参比，用1cm的石英比色皿，在波长210～250nm范围内，每隔5nm测量一次。以吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线。与苯甲酸标准曲线比对定性。选择吸收曲线的最大吸收波长λmax=227nm为本实验的测定波长。四、实验步骤3.有机物的定性

四、实验步骤4．标准曲线的绘制在选定的测量波长λmax=227nm处，以蒸馏水为参比，用1cm的比色皿盛溶液，准确测定以上配制好的各个苯甲酸标准溶液的吸光度A，每个标准溶液读三次取其平均值。以浓度C作横坐标，吸光度A作纵坐标，绘制标准曲线。四、实验步骤5.试样吸光度的测定在测量波长λmax=227nm处，与标准曲线同样的条件下，测量样液吸光度A，测三次取其平均值。五、实验记录

1．测定波长的确定

仪器型号＿＿＿比色皿厚度＿＿＿

六、数据处理及计算结果

1．测定波长的确定根据上述数据绘制吸收曲线，确定最大吸收波长即为测定波长。