微生物综合历年真题部分问答题与名词解释答案

答：（1）干热灭菌适用对象：空气，热敏物质，蛋白质，酶，，纤维素，氨基酸、易被热破坏的培碳（O生理功能：①提供C物。异养微生物对氮源的利用顺序是：“N·C·H·O”或“N·C·H·O·X”类优于“N·H类，更优于生理功能：①提供N元素；②氮源一般不提供能量，数细菌能通过氧化3NO中的N3 （MnMg④调节并维持细胞渗透压的平衡，如K，Na；⑤作为某些微生物的能源物质）②营养缺陷型：野生型菌株由于突变而丧失合成一种或几种生长因子的能力。如③抗性突变型：由于突变而产生对某种化学药物致死物理因子或噬菌体具有抗性⑦抗原突变型：指由于突变引起的细胞抗原结构发生改变的变异类型。如细胞壁缺陷变异（L型细菌等）。4、举例讨论微生物之间的互生、共生、竞争、寄生、拮抗和捕食关：（1）互生关系：两种可单独生活的微生物共同一起时，通过各自的代谢活营养进行生长繁殖同时使后者蒙受损害甚至被杀死的一种相互关系。其表现为“损人利己”为“你争我抢”H2/CO2或乙酸，但是硫酸盐还原细菌对于H2或乙酸亲和力较产甲烷细菌高（2）含菌平5ml牛肉膏蛋白胨培养液的试管中，在30℃条件下培养过夜。次日，按5%接种量取上述菌液于牛肉膏蛋白胨培养液中，放30℃培养6~7h。取0.2ml菌液涂布接种于牛肉膏蛋白胨平板上，倒置于30℃恒温箱中培养NTG24h。10-1、10-20.1ml，分别涂布于可溶性淀粉鉴选出产α-淀粉酶最高的枯草芽孢杆菌突变株，转接至新鲜斜面上，放入冰箱中保藏。理方案二：（1）出发菌理由：单细胞微生物一般采用营养细胞进行诱变处理。前培养使诱变细胞的生理状态，后。，方法：紫外灯功率为15W，照射距离30cm。照射前先开灯预热20min。分别取两套内15W低功方法：在上述鉴别平板上喷洒碘液后，挑选单菌落透明圈直径与菌落直径比值明显提（1/采DS法测定各菌株的产-淀粉酶能力，再摇瓶复筛（3/株），-淀粉酶DA6、某同学在采用细菌质粒小量提取试剂盒抽E.colipUC19质粒后直接进行琼脂糖凝胶电泳，得到下图所示结果（电泳方向由左至右），试解释形成三条带的原因，若要检验所抽提质粒是否纯，应该如何操作答：pUC19pUC19质粒、线性pUC19质粒。质粒DNA有三种存在形式，这是由同种分子构型差异而形成的。形成三条带E.colipUC19质粒样品溶与适量蒸馏水中，加入适量的限制性内EcoRⅠ进行酶解，使全部质粒DNA成为线性分子。终止反应，加入适量EDTA-Na2。进7、讨论高压蒸汽灭菌的原理、适用对象和影响灭菌效果的因素答：将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间等成分的破坏，也可采用较低温度（115℃）下维持35min的方法。、试叙述单细胞微生物在液体培养时的生长规律（生长曲线的定义、各时期的特点原因、影响及其缩短措施。找出如何增加次级产物的措施。发酵工业上如何根据微生物的生长规律指导生产降低成本。并举一例说明在发酵工厂中如何根据生长曲线指导发酵生产（以谷氨酸发酵为例一条由延滞期、对数期、稳定期、衰亡期4个阶段组成的曲线，称之为生长曲线。延滞期：微生物刚接入新鲜培养基之后开始的一段④细胞内RNA，尤其是rRNA含量增高；⑤生长速率常数①接种龄如果以对数期接种的接种，则延滞期就短；反之，如以延滞期的对数期：经过一段适应期后，细胞数以几何级数增所需的代时或原生质增加一倍所需的倍增时间最短；②细菌形态、化学组成和生理特工业中用作的最佳材料。稳定期的特点（细胞生理特性）：①细胞速度降低，率等于繁殖率，储、衰亡期：微生物率逐渐增长以致明显超过新生率的时期（三）应用举例：在谷氨酸发酵中，通过以对数生长期的细胞作为、加大接种量用EⅠ表示；控制C—E的酶用EⅡ表示。F参与蛋白质的合成。FMMFEEⅡ的反F的结构类似物结合，不能与F结合，细胞内EⅠ、EF的合成不再受F累积的抑制，反馈抑制解除。EEF的反馈抑制，发酵液中可积累高浓度的DD 图编码阻遏蛋白的调节或突变→阻遏蛋白不能与Met或丧失了与阻遏蛋白结合的能力→细胞内高丝氨酸脱氢酶的合成不再受Met的阻遏→反馈阻遏解除。在限量补充Met菌体生长的情况下，可解除Met对高丝氨酸脱氢酶的反馈阻遏，增强了天冬氨酸半醛生成高丝氨酸的代谢途径，即使Thr过剩，也不会对该途径产生阻遏，答：首先查阅文献，了解大肠杆菌的生长培养特性，以紫外线为诱变剂，确定试验方案LB培养液中。37℃培养至对数期，低温诱导同步生长，转接至新鲜LB培养基，培养30~50min，离心收将菌悬液放于培养皿（含转子）中，先用紫外线照射1min，再打开皿盖照射2min；在暗室红灯下，吸取上述经紫外线诱变后的菌液0.5ml，加到含20ml完全培养基的150ml灭菌三角瓶中，在37℃下振荡培养过夜。试验原理：单细胞微生物一般采用营养细胞进行诱变处理。前培养使诱变细胞处于同，长h试验原理：经后培养的细胞中除有营养缺陷型菌株外，也野生型菌株，为了细菌细胞壁肽聚糖链之间的交联，合成完整细胞壁。CM平板上进行分离，然后将平板上长出的菌落用无菌牙签逐个按一定次序点种到MM、CM平板相应的位置，经过培养后，逐个对照，如发现某一位置上在CM上长出菌落，而在MM上不长，就可初步认定这是一个营养缺陷型菌株。11、试以细菌和酵母菌为例论证原核细胞与真核细胞在细胞构造、细胞壁化学组成结构上

，10倍。细菌细胞壁

四肽尾：D、L交替排列L-Ala→D-Glu→L-→D-G-：内消旋二氨基庚二酸（DAP）LLys，没有肽桥D-Ala的羧12、试讨论微生物与氧之间的关系及厌氧菌的氧毒害机答好氧

产生害作用的代谢产物，如超氧基化合物与H2O2，这两种代谢产物相互作用还会产生毒性很强的自由基OH-和O2-用，直至。SOD，所以根本就无法使超氧阴离子自由基歧化成过氧化氢。因此，有氧时，细胞13、叙述噬菌体的可能生活史（1释放而实现繁殖的过程。温和噬菌体的生活14、培养大肠杆菌等细菌常用的培养基之一是LB培养基，其组成Tryptone1%，YeastExtract0.5%，NaCl1%，试从微生物对营养需求的角度分析该培养基如何为供生长所需要的营养答：微生物的生长繁殖需碳源、氮源、无机盐、生长因子、水和能源六大类营养物质B族维生素，大量氨基酸、嘌呤等营养物质。能为细菌生长繁殖提供氮源和生长因子；③NaCl主要调节渗透压，提供无机盐。LB培养基中含有足量满足细菌生长繁殖的水，LB培养基属于天然培养基，因此，LB15、何谓微生物的同步生长？试叙述至少3种获得细菌同步培养物的方法进行的生长。通过同步培养方法获得的细胞被称为同步细胞或同步培养物。（如硝酸纤维②营养条件调整法：营养丰富培养基/无N培养抑制DNA的合成；4×106mol/L的胸腺苷，解除抑制，诱发同步生长。①当葡萄糖大量存在时，葡萄糖以某种形式抑制了腺苷酸环化酶的活性，从而ATP不能在腺苷酸环化酶的作用下生成cAMP，AMP不能与CRP结合形成cAMP-CRP复合物，①取谷氨酸发酵液，用肉汁胨平皿划线，在30℃培养24ｈ；②若平板上长出的菌落形态A.菌；若染成红色，则为革兰氏菌，编号为2号菌。则可确定1号菌为枯草芽孢杆菌群的菌。则可确定2号菌为大肠埃希氏菌属中的大肠杆菌。、答：对于筛选leuˉ突变型的培养基，应MM中添加leu；对于筛选galˉ突变型的培MM中添加leu和用galglu。leu的MM长出菌采用影印法分别接到MM1号平（添加leu和用gal代替glu的MM）上、2号平板（gal代替glu的MM）上。MM21leuˉ突变型；MM12galˉ突变型；在三个培养基中都未长出的菌落为leuˉ、galˉ双突变型。19、简述微生物对温度的适应能力，为什么50℃~60℃）和嗜热微生物（80℃≤最适生长温度）。嗜冷微生物能在低温下生长良好的原因：①嗜冷微生物产生的酶在低温下功能基酸含量低，α-螺旋结构多β-折叠结构少；②嗜冷微生物细胞膜组分中不饱和脂肪酸含量G≡C对，对热更加稳定；细胞膜中的饱和脂肪酸含有高，使膜具有热稳定性；此外嗜热微生物：嗜热微生物的蛋白质热稳定性与蛋白质上存在的盐桥数目细胞膜的磷脂双分子层的非极性尾由长链脂肪酸通过酯健连接在甘油分子的C1的答：（1）原生的：幼龄的菌体经洗涤后转入高渗溶液中，加入β-疏基乙醇进行预处理，抑制细胞壁成分合成，再加蜗牛酶，在一定温度，pH值等条件下酶解细胞壁，直至原生释放，通过培养方法测定原生形成率。因为原生对机械损伤无抵抗能力，涂布会使原生破裂，一般是将原生悬答：（1）共有结构：①细胞壁（组成不同）；②细胞膜（但功能不同）；③核糖体（部分有（少数芽孢杆菌有、芽孢、糖被包括荚膜和粘液层、核（无、态胞区链DNADNA为；DNA含量低）和细胞器[高尔基体、线粒体、溶酶体、微管系统、真液泡（部分有、构成核酸、蛋白质、脂质和多糖类重要大分子；②基本元素都为C、H、O、N、P、S、K、Ca、Na、Mg、Fe等。22、如果代谢途径中cetyloA（乙酰oA）向TCA循环的途径被阻断，以糖类和脂肪为主要培养营养，请思考通过微生物分解代谢和合成代谢产生的代谢产物，请以简图示Hser-+AECr突变株。AEC：S-（2氨基乙基）-L-半胱氨酸Lys2~3d，观察各平板上菌落生长情况，如果从某一浓度30~50min，离心收集菌体；用无经紫外线诱变后的菌液0.5ml，加到含20ml完全培养基的150ml灭菌三角瓶中，在37℃下同时间（12-24h，取样分别涂布于MM和CM平板，菌落数差异大的浓缩效果好。检出缺陷型与AECr将上述处理液涂布于含有高于AEC临界致死浓度的CM平板上进行分离，然后将平板CM平板相应的位置，经过培养后，逐个对照，如发现某一位置上在含有高CMMM上不长，就可初步认定这是一个AECr与营养缺陷型突变株。浓度106-108个细胞/ml的悬0.1ml涂布于MM0.5cm的滤纸蘸取Hser、Met、Thr、Lys溶液，用镊子放到平板的四个相应位置，观察其生长情况。若在蘸有Hser的滤纸片周围出现生长圈，则表明为AECr+Hser-突变株。24、抗生素工厂发酵过程有异常，怀疑了噬菌体，怎样确证505ml25、如何用噬菌斑法对噬菌体进行检测和计预先分别配制含2%和1%琼脂的底层培养基和上层培养基。先用底层培养基在培养皿上浇一层平板，待凝固后，再把预先融化并冷却到45℃以下，加有0.2ml敏感菌液和0.1ml噬菌体稀释液的上层培养基，在试管中摇匀后，立即倒在底层培养基上铺平待凝，3724h。观察平板中是否有噬菌斑的形成，如果有，那么就确证了污染的是噬菌体，然后计数每皿噬菌斑个数。选取一组噬菌斑在30~300间的数值来计算噬菌体N 答：根据四者的大小、形态以及菌落形态方面的差异可用以下方法进行区分

，正 味

地均匀，边缘与部位的颜色一致，多带酒香味放线菌：细胞呈丝状分枝，形成基内菌丝，气生菌丝；干燥、不透明、表面呈致密丝绒状“干粉”难挑起，菌落正答：为了筛选出Arg-、Gal-、Strr三种标记的突变型，设计试验方案长出菌落的突变型可能为Arg+、Gal-、Strr；Arg-、Gal-、Strr；Arg+、Gal+、Strr；Arg-、Gal+、Str、葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的培养基平板上，培养后长出菌落的突变型可能为Arg+、Gal+、Strr；Arg+、Gal-、Strr。③将①中平板长出的菌落影印接到含有Gal、硫酸铵以及无机离子的培养基平板上，培养后长出菌落的突变型可能为Arg+、Gal+、Strr；Arg-、Gal+、Strr。中平板上都未长出的菌落为Argˉ、galˉ、strr三种标记的突变型。28、是否DNA链的损伤一定会引起表型的改变？为什么因此，如果DNA链的损伤造成的是沉默突变或发生在非编码区都不会引起表型改变SOSDNA损伤修复到损伤DNADNA分子结构，不能形成突变体，表型未改变；而另一种是DNA突变分子在过程中排除或生理性表型延迟会使表型的改变于型的改变。表型延迟会使DNA链的2代以上的繁殖的。（生理性表型延迟是由于原有产物的影响。野生型细胞中每个如果DNA链的损伤是不可修复的损伤或修复系统被饱和，修复不了大量的损伤，MM上不能正 主要措适宜菌评低温1-66-121-2法101-10>5-15>1540%左右的甘油或适当浓度的二甲基亚砜等作为保护剂对细胞加以保护，答：指的是采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对或动、菌”指的是在发酵准备阶段“杀灭所有培养环境存在的微生物”。的结果并不一定是无菌2）湿热灭菌法原理：湿热蒸汽力强，细胞原生质在含水量高的情况下易变性凝固；此外，在灭AB注意事项：放射线不能照射。答：（1）温度对微生物生长和代谢的影温度通过影响膜的液晶结构、酶和蛋白质的合成及活性、RNA的结构、转录等而影响在发酵工厂的应用：E.coli3742℃下却不生变异或；使空气中的O2变成O3，后者分解放出的原子氧[O]具有杀菌作用。pH对微生物生长和代谢的影响：pH通过影响细胞质膜的透性、膜结构的稳定性CaCO3维持pH6.8左右。分子氧作为最终电子受体，具有SOD和过氧化氢酶。O2参与合成固醇及不饱和脂肪酸。在有氧时靠呼吸产能，无氧时则借发酵或无氧呼吸产能；细胞含SOD和过氧化氢酶。获得能量；细胞内存在SOD和过氧化物酶（但缺乏过氧化氢酶）。缺乏SOD和细胞色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。在发酵工厂的应用：①控制氧分压，对微生物生长和发酵进行控制（发酵）；②32、尽你所能解释“流水不腐，生活污水容易变黑变臭生活污水主要成分为糖类（淀粉、纤维素等）。2盐，外生活污水中富含的油脂长时间在空气中会发生酸败，产生难闻的气味。酸败的有异臭的1，2-环氧丙醛。33、从自然界选育耐高渗透压酵母答：（1）试验目的：选育耐高渗透压酵（加工蜜饯、糖果、蜂蜜的环境）5~15cm10g90ml无菌水25min30S取上清液涂布于含40%葡萄糖的培养（pH酵母以较高的密度涂布到高于临界致死浓度的高糖培养基上，287d，平板萄糖（五个梯度，浓度范围40%~70%，另设置一等渗浓度作对照）的琼脂培养基培养皿上，置287d，观察生长情况，确定高耐渗透压水平。从中选出符合生产要求的耐答：（1）①大肠杆菌的裂殖（二）：细胞伸长→细胞隔膜伸展→分隔的细胞壁E.coli的分化：F+细胞（雄性菌株）；F-细胞（雌性菌株）；Hfr细胞（高频重组(质配、(质配、核配单倍体

每个子囊含雄器、产囊器及丝的形成→质配→产囊丝的形成→子囊母细胞的形成→减数①吸附：噬菌体的吸附与受体细胞的特殊位点的接触与结合。T4噬菌体：以其尾部吸附到敏感菌表面后，尾部的少量溶菌酶水解细胞壁肽聚糖层，③增殖：噬菌体核酸物质及蛋白质在宿主细胞内的合成。噬菌体核酸的：不同的噬菌体，其核酸的类型不同，方式也不同。微生物的繁殖多样性：细菌以二为主，个别可由性接合的方式繁殖；放线菌可由35、简述斜面培养基的配制步骤？并说明每步的注意事杯中。注意事项：天平调零、取药品、准确称量。琼脂全部溶解。注意事项：需不断搅拌，注意补足失去的水分。能沾染在管口上以免浸湿棉花，引起污染；分装量以试管高度的1/5为宜。紧要适当；棉塞总长度的3/5应在口试管内，2/5在口外。意事项：每捆包扎的试管数以7~10支为宜，必须用牛皮纸包扎，且以活结形式扎牢。灭菌。高压蒸汽灭菌，12125min以防污染；冷却至50~60℃后摆置成斜面，防止产生过多冷凝水。36、什么叫工程（遗传工程）?为什么说工程的操作离不开微生物答：（1）工程是指用人工方法，通过体外重组和载体作用，使新构建的遗传物质组合进入新，并在此新中得以稳定遗传和表达的过程。（2）①载体——微生物本身（如、噬菌体）或微生物细胞的一部分构造（如细⑤目的的主要供体——尽管工程中外源的供体生物可以是任何生物对37、细菌的抗生素抗性突变株如何筛选（1）菌悬5ml℃条件下培养至对数期。离心（3500/in，10in，弃上清，用无菌生理盐水洗涤后，5l8l30cm。照射前先开灯预热20min。将培养皿置于磁力搅拌器上，先照射1min后再打开皿盖，并计时，照射2min后，立即盖上皿盖，关闭紫外灯。10l9m（1l符号标记（3500/in，10in106~107个/ml。方法：紫外灯功率为15W，照射距离30cm。照射前先开灯预热20min。分别取两套内含一转子的无菌培养皿，注明“1min”、“2min3ml孢子悬液。将上2min1min、2min和未照射的孢子悬液十倍系15W低功率的紫外灯。方法：在上述察氏-溴甲酚绿指示剂平板上，挑选变色圈直径与菌落直径比值大（HC1~3株，转接至新鲜PDA斜面上，放入冰箱中保理由：经诱变处理后提高产量的突变株仍属少数，应把它们分离出来进行初筛和复筛H3.8~5.4HCNOH耗NaH的L（。39、写出四种活菌体生长量的测定方法名称及基本操作过程位的数目。不同菌种的菌落大小不同，一般控制在9cm培养皿中生长30~300个菌落为佳。ATP定量法：ATP10-数量级。典型细菌细胞的ATP含量为每克细胞干重含有1mgATP。因为细胞几分0、某一微生物菌株有如图所示的代谢途径，图中的各个字母分别代表一种氨基酸。请问应如何对野生型菌种进行遗传改造，才能打破原有的代谢调控获得中间代谢产物D答：（1）E-（E营养缺陷型）：由于编码合成途径D→E中酶的发生突变使酶的馈抑制，从而积累了D。El（E渗漏营养缺陷型）E，仅能维持细胞的最低生长，渗漏性缺陷型是由于造成缺陷的酶活性下降而非完全丧失，属于遗传性代谢不完MM上少量生长。利用渗漏性缺陷型突变株既能少量合成细胞代谢产DDA→B酶起反馈阻遏作用，但不能代替D参与E的合成。Dr突变株抗反馈阻遏作用机理：编码阻遏蛋白的调节或突变→阻遏蛋白不能与D结合或丧失了与阻遏蛋白结合的能力→A→B酶的合成不再受D阻遏→41、下图是某细菌氨基酸合成代谢途径及其调控情况图E、H、J分别代表一种氨基酸EEH的协同反馈抑EE的反馈抑制EⅢ分别HJ的协同反馈抑制。试讨论氨基酸E高产突变株选育策略及其依据。确定E结构类似物对出发菌的临界致死浓度；出发菌株的培养→诱变菌悬液的制是E结构类似物抗性突变株。在含有E的结构类似物的MM中：正常的细胞由于E的结构类似物对EⅡ的反馈抑制生突变，从而不能与E的结构类似物结合，不能与E结合，细胞内EE的合成不再受E累积的抑制，反馈抑制解除。EⅡ不再受E的反馈抑制，发酵液中可积累高浓度的E。由于编码合成EⅢ的结构发生突变使EⅢ的催化部位发生改变，失去催化活性或催EBFB这个中间产物全部转入E的合成而大量生产E。产菌株的选育策略（3种以上）及其依据。答：（1）选育高丝氨酸营养缺陷型突变株（Hser-依据：由于编码合成高丝氨酸脱氢酶的发生突变使高丝氨酸脱氢酶的催化部位发Hser的能力，使天冬氨酸半醛这个中间产物全部转入Lys的合成而大量生产Lys。选育高丝氨酸渗漏突变株（Hserl）选育方法：出发菌株的培养→诱变菌悬液的→诱变处理→后培养→经后培养的菌10MMMMCM上，在MMCM上都能生长，但在MM上生长速度明显比在CM上生长慢的菌株即为Hserl突变株。不完全突变。不需要像其他营养缺陷型菌株那样在培养物中限量添加营养因子。Hserl细胞能合成低浓度的Hser，仅能维持细胞的最低生长，胞内天冬氨酸半醛这个中间产物几乎全LysHserMetIle浓度达不到进行反馈调节的浓度，从而能大量积累Lys。AECr况下，仍能继续排出胞内合成的Lys，从而获得高产。选育苏氨酸营养缺陷型突变株（Thr-受阻，导致Thr的合成途径中断，在限量补充Thr菌体生长的情况下，可解除Thr和大量生产Lys。答：（1）选育黄色短杆菌AHVr+Met-+Lys-突变株AHVrAEC对野生型黄色短杆菌的临界致死浓度；野生型黄色短杆菌的培养→诱变菌悬液的→诱变处理→涂布于含有高于临界致死浓度的平板上→培养→抗性平板上长出的小菌落即是AHVr。Met-+Lys-突变株的选育（实验中所有固体培养基中都要含有高于临界致死浓度的AHV）：出发菌株AHVr的培养→诱变菌悬液的→诱变处理→后培养→淘汰野生型→检出缺陷型→鉴别缺陷型→筛选出AHVr+Met-+Lys-突变株。（2）选育黄色短杆菌AHVr+Met-+Lys-不能代替Thr参与蛋白质的合成。的反馈抑制，发酵液中可积累高浓度的Thr。②黄色短杆菌Met-+Lys-突变株的选育机理编码阻遏蛋白的调节或突变→阻遏蛋白不能与Met或丧失了与阻遏蛋白结合的能力→细胞内高丝氨酸脱氢酶的合成不再受Met的阻遏→反馈阻遏解除。由于合成天冬氨酸半醛→Lys途径中的某一酶的编码发生突变使该酶的催化部位此处受阻，导致Lys的合成途径中断。在限量补充Met+Lys菌体生长的情况下，可解除Thr和Lys对天冬氨酸激酶的协MetThrHser，由于产生菌失去了合成Met的能力，使Hser这个中间产物全部转入Thr的合成而大量生产Thr。4、低聚木糖是指木二糖、木三糖、木四糖等低聚分子，是目前功能性低聚糖中效果最好的一种，其可以由木聚糖酶法水解来生产。试设计方案从自然界中筛选木聚糖酶生产答：（1）试验目的：分离木聚糖酶生产集场地表5~15cm以下的土壤，采好的土壤用20目过筛。取10g已筛好的土壤，放入90ml25min30S；取上清液涂布到以木聚上，302dHC值（等于透明圈直径与单菌落直径之比）初步比PDA斜面培养保藏。再通过三角瓶固态发酵试验进行复筛，比较固态发酵木聚糖酶活，选取酶最高的菌株，转接至新鲜斜面上，放入冰箱中保藏。答：（1）从谷氨酸产生菌选育酪氨酸营养缺陷型突变株（Tyr-育种原理：由于编码合成预苯酸→Tyr的某一种酶的发生突变使该酶的催化部位发藓糖-4-磷酸和磷酸烯醇式酸的缩合反应的反馈抑制，又由于产生菌失去了合成Tyr的能力，使phe分支途径增强。Tyr-突变株的选育方法：谷氨酸产生菌的培养→诱变菌悬液的→诱变处理→后培酶不能与phe结合→调节酶的合成与phe的合成不再受phe的累积抑制→反馈抑制解除。平板上长出的小菌落即是PAPr突变株。Trp-Trp--MM筛选原养型回复突变株→从这些原养型回复突变株中分离筛选能过量积累phe的突变株。①耐高渗透压微生物存在于高糖环境（加工蜜饯、糖果、蜂蜜的环境）耐产。NaC1的渗透压培养基（LBPDANaC1，使0％、3％、6％、9％、12％和l5％）上，283d，观察47、试从遗传学角度讨论人为打破微生物代谢的自动调节、过程积累中间代谢产物3种方法答 代谢调控育种的措人工育针对细胞正常代谢时的自动调节抗反馈调节突变株：是指一种因变构酶的结构或编码阻遏蛋白的调节发生突48、微生物因干燥而引起的速率与哪些因素有关？这些原理在菌种保藏中如何用49、试分析啤酒酿造中微生物的作用及生长与发酵的关0.2-0.3°/d时，主酵结束，进入后酵阶段。余各步仍为化学转化反应）。②传统的固态白酒和酱油的发酵都是采用多菌培养发酵。答：（1）筛选方法：影印平板法。①“”径8度0的天鹅绒布并用圆形金属卡子定后进行汽灭菌。意：整个“”要保证无菌状态，②“”一次将一个不含抗生素平板上长出的菌落依次分别转接到“含抗生素”和“不5若以葡萄糖为碳源，这突变株不能厌气生长，但是仍然能在有分子氧的情况下生长，试给以解释。答：酵母发酵的化学反应中，从葡萄糖到酸这一段反应与葡萄糖的酵解完全相同。生成的酸在酵母催化下，脱羧产生乙醛，乙醛在醇脱氢酶催化下被NADH还原成乙醇。在糖分解及代谢产物生产过程产生大量NADH，为了维持细胞正常生长和代谢流顺利进行，NADH氧化还原必须保持平衡。酵母菌从乙醛到乙醇的路径被阻断后，无氧条NADH还原成乙醇，NADH就不能被氧化，NAD+NADH氧化还原可以保持平衡，故可以在53、用发酵概念试述牛奶自发的变酸的微生物生化机制糖和半乳糖，然后葡萄糖在磷酸果糖激酶等一系列酶的催化作用下，经EMP途径转化为丙酮酸，酸在乳糖脱氢酶作用下，最终转化为乳酸。54、试从微生物遗传学的不同角度阐述你对微生物多样性的认识除部分的遗传物质是RNA外，其余及全部具有典型细胞结构的微生物的遗传物质都是DNA。按其在细胞中存在形式可分为DNA（核组）和外（cccDNA），F质粒、R质粒、Col质粒、Ti质粒、巨大质即DNA，与组蛋白结合成复杂结构的。核外DNA是指线粒体和体DNA，其结构与原核细胞DNA相似，也能编码结构蛋白。通过转化、转导或接合等过程而获得外源，只能形成不稳定的部分双倍体细胞。原核生物的调控系统是由一个子和它的调节所组成的。每一子包括结构、和启动子。结构是决定某一多肽链结构的DNA模板，它是通过转因既不能转录出mRNA，也不能产生任何产物。调节能调节子中结构的活动，能转录和转译产生阻遏物，阻遏物能识别并附着在上，使DNA双链无法分开，阻碍RNA聚合酶的移动，使结构不能表达。每一种氨基酸对应3~6个三联体子。绝大多数生物的DNA由A、T、G和C四种脱氧核苷酸组成。数例外，如T噬菌体DNA中就有少量稀有碱基。突变的多样性：突变分为突变和畸变，突变又分为碱基置换；微生物中核酸DNA的模型多样，主要有①直线双向模型：单起点，双向，T7；多起点，双向，真核微生物DNA。②θ型模型：环状双链DNA，单向或双向（E.coli.），质粒ColEI完全是单虽是双向的，但是两个叉移动的距离不同；质粒R6K两个叉的移动是不对称③滚环模型：环状DNA的一种模式，在该模式中，DNA聚合酶结合在一3DNADNA取代前一轮合成的DNA。④D环模型：双螺旋链中的轻链先开始，稍后重链再开始，当沿轻链开始时，重链上产生了D环，随环形轻链的进行，D环增大，重链后亦开始，最后两条链完成形成两条新的DNA又螺旋。⑤多叉模型：第一轮尚未完成，起点就开始第二轮的55、讨论纯种扩大培养微生物全过程中污染微生物的防止方法及原设备附件渗漏造成的染菌的防止方法：①发酵设备采用耐腐蚀材料，或设备内培养基灭菌不彻底导致的染菌的防止方法：①准确计算灭菌时间、压力，严格空气系统导致的染菌的防止方法：①空气净化系统采用介质过滤除菌。原理；湿热灭菌。原理：湿热蒸汽力强，细胞原生质在含水量高的情况下易变性5培养基凝固后往往会有许多冷凝水凝结在皿盖和琼脂培养基表面，这会影响平板的正常使用。答：在中常用：生产中用于培养。在生产中常用：（1）浅盘培养（shallowpanculture）容器中盛装浅层液体静止培养，蓝0.05g，蒸馏水20mL。59、转导育种的原理是什么？如何进行导；而后者指只能传递上原噬菌体特定位点附近少数的转导。60、简要说明微生物中核酸DNA的各种模型答：（1）直线双向模型：单起点，双向，T7；多起点，双向，真核微生物DNA。θ型模型：环状双链DNA，单向或双向（E.coli.），质粒ColEI完全是单向。大多数双向的DNA，都是对称的，然而也有例外。枯草杆菌染色体DNA的虽是双向的，但是两个叉移动的距离不同；质粒R6K两个叉的移滚环模型：环状DNA的一种模式，在该模式中，DNA聚合酶结合在3DNADNA取代前一轮合成的DNAF因子DNA的转移，λ裂解途经的，φX174，M13，G4等单链环状（4）D环模型：双螺旋的两条链并不同时进行，轻链先开始，稍后重链再开始，当沿轻链开始时，重链上产生了D环，随环形轻链的进行，D环增大，重链后亦开始，最后两条链完成形成两条新的DNA又螺旋。线粒体、叶绿体DNA采用D环。营养时，可采取多叉方式。E.coli.DNA的最快可达50Kb/min，完全需40min，富营养时，20min。而真核微生物DNA要6～8小时。答：水对微生物的生命活动的重要意义有如下几点①起溶剂与介质的作用，营养物质的吸收与代谢产物的分泌必须以水为介质才能①好氧生物处理在空气或氧的存在下，由好气生物将主要有机物质氧化分解，如活②厌氧消化处理将空气隔断，保持无氧状态，由厌气或兼性厌气生物将主要有机物③特殊处理主要利用好气生物，将特殊成分分解或从水中除去，如除氮、除酚、除63、有什么理由认为微生物对人类好处比害处多答：微生物学从建立之初就与人类和动物传染病的防治产生了不解之缘，接着与酿造微生物与粮食：微生物肥料、等；发酵饮料、食品、调味品、生物饲料、64、试叙述微生物遗传物质的各种存在状态遗传物质都是DNA。按其在细胞中存在形式可分为DNA和外DNA。①DNA在原核细胞中的存在方式原核细胞DNA处于拟核区，无组蛋白，近年来发现与非组蛋白相结合。结构上为双链环状DNA。外的DNA主要指质粒，能独立的小型共价闭合环状DNA分子（cccDNA），具有超螺旋结构。DNADNA分为核DNADNA。核DNA即DNA，与组蛋白结合成复杂结构的。核外DNA是指线粒体和体DNA，其结构与原核细胞DNA相似，也能编码结构蛋白。答：（1）工程的应用：①医疗上：用正常弥补有缺陷，治疗某些遗传疾病；通过转移，刺激免疫力，有望治疗肿瘤、等疾病。②工业上：通过工程将胰岛素、白细胞介素、干扰素等导入受体菌，生产各③农业上：固氮导入重要作物上，获得独立固氮新型作物；将木质素、纤维素分④环境保护：培育可分解多种物质的新型菌种；生物，生产高效、无公害。①如果疾病的测试变得方便，谁将使用这些信息？是还是保险公司③工程给已经超负荷的健康检查系统也带来了额外的负担。是否有足够的方66、简述单细胞微生物纯种分离的方法答：（1）涂布平板分离法：对样品进10倍系列稀释；取适当稀释度的稀释0.1ml，10.l4510~l培真菌的单孢子分离法：采用的厚壁磨口毛细血管，吸取预先已适当萌发的孢将待分离的真菌菌丝接种于平板。然后在上面覆盖一片无菌的盖玻片，并用无菌67、简述微生物的分类依据及各种分类方法（1（2（）生态特征4）；（5）（6）；（7GC比：（G）%；（8）（9）118SrN。经典分类法：是一种随机的和不系统的根据少数几种特征进行分类的方法。主要分类依据是（G+C）mol%、核酸分子杂交、16S/18SrRNA。答：（1）非致病性；答：①原料组成能满足微生物生理功能要求，浓度恰当。少3种诱变剂）。答：诱变剂可分为物理诱变剂，化学诱变剂和生物诱变剂三类253~265nm254nm效果最好。紫外诱变主要作用是使两个相邻的胸腺MuMuDNA分子，座插入到宿主上时，会引起突变。71、试比较青霉素和溶菌霉在细菌原生中的作用原理中，它能有效水解细菌的肽聚糖，其作用部位就是N-乙酰胞壁酸的1碳单位和N-乙酰葡萄糖胺的4位碳之间的β-1,4糖苷键。它对生长期和休止期的细胞均有作用。青霉素的作用机理：青霉素是是肽聚糖单体五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸的结构类似72、试述普遍性转导噬菌体及转导子的形成机制当烈性噬菌体细胞，或溶源性细菌经低频诱导，噬菌体开始大量增殖，同时寄DNA被核酸酶水解成小片段。菌然的DNA片段包进噬菌体内，这样形成的噬菌体只含有供体DNA，但像正常噬菌体一样，具有另外寄主并将其DNA注入寄主细胞的能力，这种噬菌体称为普到宿主DNA上，但能进行并合成产物，形成转导子。73、试述大肠杆菌T4噬菌体的结构及繁殖过程、裂解性答：（1）T4噬菌体的结构：包括头部（正20面体、颈环、尾鞘、尾髓、基板、刺突、①吸附：T4噬菌体尾丝尖端与大肠杆菌细胞表面的特异性受体（脂多层）接触，尾T4噬菌体成熟后，脂肪酶和溶菌酶分别水解宿主细胞膜和壁，细胞裂解，子代噬菌体释放。释放的子代噬菌体又可继续其它大肠杆菌。4噬4紧接在潜伏期后的大肠杆菌细胞迅速裂解溶液中菌粒子剧多的段间；稳——后的大肠杆菌细胞已全部液中474、微生物菌名名法则是什么？并举例说明学名属名+种名加词+（首次定名人）+现名定名人+斜体 学名=属名+种名加词+subsp.var.+斜体 斜 75、试讨论菌种的原因、防止措施以及菌种复壮的方法长优势，随着不断地传代，最后发展成为优势群体，从而使整个群体表现出严重的。植一代，使细胞的优势更为显著，从而导致。进行保藏，而酿酒酵母适宜采用-70℃低温保藏，其次是4℃低温保藏。

用显微器进行单细胞分离③淘汰已的，留下未的健壮，达到复壮的目的答：革兰氏染色的结果与细菌细胞壁的组成成分和其结构有关革兰氏阳性菌细胞壁较厚，肽聚糖含量高，网络结构紧密。用乙醇脱色处理时细胞壁。氏，，载玻片上端冲洗脱色，直到流下的无明显紫色时，立即水洗。菌；如脱色时间过短，革G-菌也会被误认为是G+菌脱色时间还受涂片之厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇的用量多少等因素的影响，。呈反应。77、试叙述细菌和酵母菌细胞壁的化学组成和结构特点40-90%。它是一个大分子复合物，是由大量小分子单体N-乙酰葡萄糖胺（NAG）N-乙酰胞壁酸（NAM）通过β-1、按L型与D交替排列的方式连接而成，即L-Ala、D-Glu、L-Lys、D-Ala。D-Ala与后一个肽聚糖单体肽“尾”中的第三个氨基酸L-Lys通过肽键连接起来的短肽。胞壁重量的10%，有时可接近50%。、肽聚糖：埋藏在外膜层之内，是仅由1~2层肽聚糖网状分子组成的薄层（2~3nm，10%+菌弱。L-Lys由内消旋二氨基庚二酸（m-DAP）取代，只在原核微生物细membrane（lipooysacarde，S物质，由类脂A、多糖（corepolysaccharide）和O-特异侧链（O-specificsidechain，或O-多糖或O-抗原）三部分组成。（1）G+单体肽“尾”中的第三个氨基酸L-Lys通过肽键连接起来的短肽。（2~3nm，L-Lys由内消旋二氨基庚二酸（m-DAP）取代，只在原核微生物④脂多糖（LPS）G-菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖类物质，由类脂A、核心多糖和O-特异侧链（或称O-多糖或O-抗原）三部分组成。A、抗生素法：常用于细菌、酵母菌营养缺陷型的浓原理：抗生素能作用于细胞的某些结构，合成完整的细胞壁或引起细胞膜损伤从步骤：①饥饿培养：将经后培养的细胞先用MM洗涤，接着再用无氮MM培养4-6hMM中，并加入一定浓度的抗生素和渗透压稳定剂（20%蔗糖）培养不同的时间（12-24h）MM和CM平板，菌落数差异大者浓缩效果好。丝刚刚肉眼可见。用无菌脱脂棉、滤纸等过滤除去菌丝。按相同的步骤重复操作3-4次，尽可80、试述四种微生物生长繁殖的测定方法、适用对象、的稀释，使每个平板上所形成的菌落数控制在适当的范围，一般细菌的平板菌落计数以30~300cfu1为佳，这样可以减少计数与统计中的误差；接微生物悬浮液进定。称干（测生长量：培养液经过滤，离心获得菌体，菌体经洗涤、烘干后称，酵母用Thoma血球计数板，细菌用Petriff-Hausser计数Helber计数器81、何谓溶源性细菌？有哪些基本特征和噬菌体的组整合到溶原菌的组上，并随温和噬菌体的而进行同步。偶尔也可自发恢动，进行大量，并成熟为噬菌体粒子，引起宿主细胞裂解。82、试述真核生物和原核生物的有无有有无有无有无体无无有无有无有无80S（指细胞质核糖体无PHB有无低（高（有无有无数膜有无有无体无无附知识点1：利用刃天青——淀粉平板筛选淀粉酶产生菌原理：淀粉酶能水解直链淀粉与刃天青的络合物，使刃天青游离出来，在产酶菌落周围成蓝色变色圈，34℃培养3d后，测定蓝色变色圈直径与菌落直径之比（HC比值），凡此比值大者作为选留菌。刃天青——淀粉平板：精制玉米粉2g，可溶性淀粉0.5g，NaNO30.2g，刃天青3g，琼脂1.5g，蒸馏水1000ml。附知识点Ⅱ：3溴钾酚紫指示剂pH值范围为：5.2~6.8，在碱性条件下显紫色，酸性条件下显黄色。由肪酶菌株菌落直径之比值，初步反映了脂肪酶大小。：，4、防腐：任何抑制或微生物在有机物质中的生长繁殖，避免引起变质的处置。一7、子囊孢子：子囊菌亚门的真菌产生于子囊中经减数后形成的有性孢子8、3748小时，然后沿管壁加入甲基红指示剂,呈红色者为阳性,不呈红色者为。如MR反应的结果：大肠杆菌为阳性，产气杆菌为有机物的营养类型。12、基本培养基（MM）：能满足某一菌类的野生型菌株生长最低营养要求的合37℃保温过夜，诱使其中残存的芽孢发压蒸汽灭菌。对，被为。16、化能无机营养型（化能自养型）CO2作唯一碳源，通过以氧化无机物释放出的能量还原CO2成为细胞有机物的营养类型。分生孢子梗）上分割或缢缩而形成的单个或成串的孢子。1、细菌的生长曲线：少量纯种单细胞微生物接种于液体培养基后，在适宜的条件下对数生长期期和19、营养缺陷型（auxotroph）：由于突变引起菌株在一些营养物质（如氨基酸、维生素和碱基）露于可见光下时，可明显降低其率的现象，称为合作用。段转移到受体，使受体发生遗传变异，称为局限性转导（或称为专一性转导）。某一种单一的微生物。如无氮培养基用来分离土壤中的自生固氮菌。26、重组（Gene bination）：将二个不同性状内的转移到一起，经过重新组合后，形成新的遗传型的过程称为重组。27、溶源性细菌（lysogeniecbacteria）：附加于细菌遗传物质上的噬菌体组成成分，称完整的噬菌体，裂解细菌并继续易感细菌。，31、平板菌落计数：将发酵液稀释后涂布在固体培养基表面，也可将经过灭菌后冷却定菌落形成单位（colonyformationunit，CFU）的数目。32、质粒（plasmid）：质粒是细菌以外的遗传物质，能独立，为共价闭合环状双链DNA，分子量比小，每个菌体内有一个或几个质粒，它分散在细胞质中或附着在上。33、分批培养（batchculture）：将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，的配子囊接合后发育而成的有性孢子。38、因子（killer）：啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）的killer是具有dsRNA作遗传物质的样颗粒（-likeparticles，VLP）。其本质是一种拟，需要辅助病毒——真菌L-A（mycoL-A）。[ATP]1[42、能荷：能量负荷的饱和程 能荷 生长温度低于20℃和最低生长温度在0℃以下的一类微生物。44、兼性厌氧菌：以在有氧的条件下生长为主，也可兼在厌氧条件下生长的微生物4、累积反馈抑制uulaeebakhi）：调节作用针对共同途径的第一个1048、大肠杆菌：杆状，0.5um×（1.0~3.0）um，革兰氏，运动或不运动，运动的作核区的露DNA的原始单细胞生物，包括真细菌和古细菌两大类群。50、世代时间（generationtime）：根据一定时间内细菌的增殖数量可以计算出繁殖的物理、化学或生物学方法，促进两亲株原生融合形成融合子的过程。55、拟核（nucleoid）：指原核生物具有的无核膜包裹的、无固定形态的原始57、恒化器连续培养（chemostatcontinuousculture）：把微生物增殖所必须的一种营养60、载体：在重组DNA技术中携带外源DNA片段（目的）进入受体细胞的一种能自我的DNA分子。63、pH值：pH值表示某水溶液中氢离子浓度的负对数值。酸度：水与强碱标准溶液定量作用至一定pH值的能65、碳源物质：凡是可以作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质窄胶质空间（12~15nm）。67、stationaryphase（稳定期）ofbactericalgrowthcurveR等于零，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或能使乳糖发酵产酸产气的革兰氏无芽孢杆菌的总称。70、半保留（semiconservativereplication）模型：在DNA过程中，每个子代73、HFR菌株：F因子整合到细菌上与细菌同步，他与F-菌株接合后的重组频率比F+F-接合后的重组频率要高几百倍以上。存在于同一DNA分子上，重组结果发生倒位。7878、EcoRI：是从大肠杆菌R菌株中分离出来的第一个限制酶,EcoR表示是从大肠杆菌的R型菌株分离来的,“Ⅰ”表示是从大肠杆菌R菌株中分离出来的第一个限制酶。EcoR1切割……GAATTC…………CTTAAG……序列，切割位点在GA之间，形成黏性末端。 86、MPN（mostprobablenumber）：MPN法的中译名为最可能数法或最近似87、双核菌丝：担子菌的单核细胞吻合形成双核菌88、诞生痕（Births