甲型HN流感标本采集运输与生物安全优质课件

甲型HN流感标本采集运输与生物安全甲型HN流感标本采集运输与生物安全1流感病毒有甲、乙、丙三种至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）猪流感是一种因甲型流感病毒引起的猪呼吸系统疾病目前，已从猪身上分离到四种主要的亚型：H1N1、H1N2、H3N2和H3N1甲型流感病毒H1N1亚型是目前疫情的主要病原体

一、概述流感病毒有甲、乙、丙三种一、概述2

一、概述人流感病毒亚型

H1N1（季节）H2N2H3N2猪流感病毒亚型

H1N1H1N2H3N2H3N1一、概述人流感病毒亚型3不同亚型流感病毒宿主分布不同亚型流感病毒宿主分布4

二、标本的采集

标本采集人员:

医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心流行病学专业人员负责标本采集。标本采集对象:

新H1N1流感病毒感染疑似病例、可能病例、临床诊断病例以及其它需要进行新H1N1病毒实验排查者。

二、标本的采集

标本采集人员:5

二、标本的采集标本种类:

病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等.

疑似新A/H1N1感染死亡病例:采集肺、气管、心、肝、脾、肾和淋巴结等组织(需征得家属同意)

二、标本的采集标本种类:6二、标本的采集咽拭子标本采集方法：

用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。

推荐使用的采样液：

PH7.4-7.6的Hank’s液。

二、标本的采集咽拭子标本采集方法：7二、标本的采集二、标本的采集8原则：不污染环境，不影响检测推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）H1N1（季节）H2N2H3N2专人专车；甲型HN流感标本采集运输与生物安全目前甲型H1N1主要的检测方法不推荐-20℃保存。《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》一、概述二、标本的采集包装容器有生物安全危害标识。插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。3天内4℃感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。包装容器有生物安全危害标识。B型流感病毒阳性，可排除新H1N1流感用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）采咽拭子的器材和容器

原则：不污染环境，不影响检测采咽拭子的器材和容器

9鼻咽拭子

插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。鼻咽拭子10二、标本的采集注意事项采样登记表信息是否齐全?装检材的容器是否符合要求?

耐低温、外螺旋口、带密封垫圈采样液太多或没有?二、标本的采集注意事项11三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装标本运输使用A类包装：三层包装,

包装容器有生物安全危害标识。在生物安全柜内进行，标本分为一式三份；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；送检单应信息完整，放入另一塑料袋内。三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装12三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存呼吸道标本：

4℃（短时间）；＞48小时-70℃或以下；不推荐-20℃保存。血清标本：

3天内4℃

长期-20℃

避免反复冻融采样前通知接收和检测单位三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存13三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：

24小时内上送；专人专车；带冰送样。三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：14三、标本包装、保存、运送与接收原则：不污染环境，不影响检测要求：及时、稳妥、符合国家规定标本应冷藏运输三、标本包装、保存、运送与接收15目前甲型H1N1主要的检测方法PH7.24小时内上送；不推荐-20℃保存。感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。包装容器有生物安全危害标识。原则：不污染环境，不影响检测目前甲型H1N1主要的检测方法插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。带冰送样。（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。H1N1（季节）H2N2H3N2二、标本的采集如有不适，应立即向上级报告。三、标本包装、保存、运送与接收病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等.至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）推荐使用的采样液：国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求

使用螺旋盖容器+密封塑料袋；同一位患者的2份以上的密封的标本可以放在同一个塑料袋内并封好，不同患者的标本不应放在同一个袋里；绝缘容器的内部应该另外装一些物品以防止塑料容器在运送时发生移动；目前甲型H1N1主要的检测方法国际上感染性实验室标本的包装和16四、生物安全对实验室的要求:对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的诊断性实验工作，在BSL2实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。并进行三级个人防护。

对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的病毒分离工作，应在BSL3实验室内进行，并遵循三级个人防护。四、生物安全对实验室的要求:17四、生物安全个人防护要求生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本和病毒分离物）推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）呼吸防护装备—

检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。鞋套前封式手术服双层手套眼部防护装备（护目镜或面罩）四、生物安全个人防护要求18

四、生物安全防护措施普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；病人采样加上隔离衣或围裙、防护鞋套、眼罩、N95级或N/P/R-100防护面罩；穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。四、生物安全防护措施19四、生物安全实验室废弃物处理原则应遵循所在机构标准实验室操作规程内的所有废弃物处置程序进行。

121℃、30分钟高压灭菌处理

化学消毒剂浸泡四、生物安全实验室废弃物处理原则20四、生物安全健康监测:

所有参与人员均应自测发热及其他症状。感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。如有人员在无防护情况下暴露于甲型H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦（达菲）或扎那米韦（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。四、生物安全健康监测:21四、生物安全生物安全条例和规定:《病原微生物实验室生物安全管理条例》《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》《实验室生物安全通用要求（GB19489－2004）》四、生物安全生物安全条例和规定:22目前甲型H1N1主要的检测方法快速流感抗原检测

B型流感病毒阳性，可排除新H1N1流感无论A型流感病毒抗原阳性或阴性，不能排除新H1N1流感

目前甲型H1N1主要的检测方法快速流感抗原检测

23目前甲型H1N1主要的检测方法核酸检测：Real-timeRT-PCR

检测（美国CDC建立）RT-PCR检测（病毒病所国家流感中心建立）目前甲型H1N1主要的检测方法核酸检测：24目前甲型H1N1主要的检测方法免疫荧光法

免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测甲型H1N1病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。病毒培养

用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染甲型H1N1

病毒。血清学检测

血凝抑制实验目前甲型H1N1主要的检测方法免疫荧光法

免疫荧光试验可以区25病毒培养

用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。H1N1（季节）H2N2H3N2三、标本包装、保存、运送与接收《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》H1N1（季节）H2N2H3N2因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。耐低温、外螺旋口、带密封垫圈插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。三、标本包装、保存、运送与接收用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》标本运输使用A类包装：穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；专人专车；长期-20℃4℃（短时间）；《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）PH7.甲型HN流感标本采集运输与生物安全《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；长期-20℃病人采样加上隔离衣或围裙、防护鞋套、眼罩、N95级或N/P/R-100防护面罩；插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。病人采样加上隔离衣或围裙、防护鞋套、眼罩、N95级或N/P/R-100防护面罩；3天内4℃血凝抑制实验至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）二、标本的采集PH7.三、标本包装、保存、运送与接收眼部防护装备（护目镜或面罩）至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》原则：不污染环境，不影响检测

谢谢病毒培养

用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以26甲型HN流感标本采集运输与生物安全甲型HN流感标本采集运输与生物安全27流感病毒有甲、乙、丙三种至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）猪流感是一种因甲型流感病毒引起的猪呼吸系统疾病目前，已从猪身上分离到四种主要的亚型：H1N1、H1N2、H3N2和H3N1甲型流感病毒H1N1亚型是目前疫情的主要病原体

一、概述流感病毒有甲、乙、丙三种一、概述28

一、概述人流感病毒亚型

H1N1（季节）H2N2H3N2猪流感病毒亚型

H1N1H1N2H3N2H3N1一、概述人流感病毒亚型29不同亚型流感病毒宿主分布不同亚型流感病毒宿主分布30

二、标本的采集

标本采集人员:

医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心流行病学专业人员负责标本采集。标本采集对象:

新H1N1流感病毒感染疑似病例、可能病例、临床诊断病例以及其它需要进行新H1N1病毒实验排查者。

二、标本的采集

标本采集人员:31

二、标本的采集标本种类:

病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等.

疑似新A/H1N1感染死亡病例:采集肺、气管、心、肝、脾、肾和淋巴结等组织(需征得家属同意)

二、标本的采集标本种类:32二、标本的采集咽拭子标本采集方法：

用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。

推荐使用的采样液：

PH7.4-7.6的Hank’s液。

二、标本的采集咽拭子标本采集方法：33二、标本的采集二、标本的采集34原则：不污染环境，不影响检测推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）H1N1（季节）H2N2H3N2专人专车；甲型HN流感标本采集运输与生物安全目前甲型H1N1主要的检测方法不推荐-20℃保存。《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》一、概述二、标本的采集包装容器有生物安全危害标识。插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。3天内4℃感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。包装容器有生物安全危害标识。B型流感病毒阳性，可排除新H1N1流感用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）采咽拭子的器材和容器

原则：不污染环境，不影响检测采咽拭子的器材和容器

35鼻咽拭子

插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。鼻咽拭子36二、标本的采集注意事项采样登记表信息是否齐全?装检材的容器是否符合要求?

耐低温、外螺旋口、带密封垫圈采样液太多或没有?二、标本的采集注意事项37三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装标本运输使用A类包装：三层包装,

包装容器有生物安全危害标识。在生物安全柜内进行，标本分为一式三份；标本上标明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料袋内；送检单应信息完整，放入另一塑料袋内。三、标本包装、保存、运送与接收标本的包装38三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存呼吸道标本：

4℃（短时间）；＞48小时-70℃或以下；不推荐-20℃保存。血清标本：

3天内4℃

长期-20℃

避免反复冻融采样前通知接收和检测单位三、标本包装、保存、运送与接收标本的保存39三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：

24小时内上送；专人专车；带冰送样。三、标本包装、保存、运送与接收标本的运送：40三、标本包装、保存、运送与接收原则：不污染环境，不影响检测要求：及时、稳妥、符合国家规定标本应冷藏运输三、标本包装、保存、运送与接收41目前甲型H1N1主要的检测方法PH7.24小时内上送；不推荐-20℃保存。感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去。包装容器有生物安全危害标识。原则：不污染环境，不影响检测目前甲型H1N1主要的检测方法插入干的拭子到鼻孔伸入鼻咽部，停留刻，缓慢旋转退出，另一鼻孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧紧管盖。带冰送样。（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。H1N1（季节）H2N2H3N2二、标本的采集如有不适，应立即向上级报告。三、标本包装、保存、运送与接收病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等.至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-H16），神经氨酸酶9个亚型（N1-N9）推荐使用的采样液：国际上感染性实验室标本的包装和运送的要求

使用螺旋盖容器+密封塑料袋；同一位患者的2份以上的密封的标本可以放在同一个塑料袋内并封好，不同患者的标本不应放在同一个袋里；绝缘容器的内部应该另外装一些物品以防止塑料容器在运送时发生移动；目前甲型H1N1主要的检测方法国际上感染性实验室标本的包装和42四、生物安全对实验室的要求:对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的诊断性实验工作，在BSL2实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。并进行三级个人防护。

对新甲型H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的病毒分离工作，应在BSL3实验室内进行，并遵循三级个人防护。四、生物安全对实验室的要求:43四、生物安全个人防护要求生物安全等级三级个人防护（包括操作临床标本和病毒分离物）推荐的个人防护装备（要基于特定场所的风险评估）呼吸防护装备—

检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。鞋套前封式手术服双层手套眼部防护装备（护目镜或面罩）四、生物安全个人防护要求44

四、生物安全防护措施普通环境采样穿戴防护服、医学防护口罩、乳胶手套、帽子；病人采样加上隔离衣或围裙、防护鞋套、眼罩、N95级或N/P/R-100防护面罩；穿上防护用品后应注意检查呼吸道防护的严密性；脱掉防护用品时应先将污染最严重的部分脱掉，最后摘口罩。四、生物安全防护措施45四、生物安全实验室废弃物处理原则应遵循所在机构标准实验室操作规程内的所有废弃物处置程序进行。

121℃、30分钟高压灭菌处理

化学消毒剂浸泡四、生物安全实验室废弃物处理原则46四、生物安全健康监测:

所有参与人员均应自测发热及其他症状。感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。如有人员在无防护情况下暴露于甲型H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦（达菲）或扎那米韦（Zanamivir）进行抗病毒药物预防。四、生物安全健康监测:47四、生物安全生物安全条例和规定:《病原微生物实验室生物安全管理条例》《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）》《实验室生物安全通用要求（GB19489－2004）》四、生物安全生物安全条例和规定:48目前甲型H1N1主要的检测方法快速流感抗原检测

B型流感病毒阳性，可排除新H1N1流感无论A型流感病毒抗原阳性或阴性，不能排除新H1N1流感

目前甲型H1N1主要的检测方法快速流感抗原检测

49目前甲型H1N1主要的检测方法核酸检测：Real-timeRT-PCR

检测（美国CDC建立）RT-PCR检测（病毒病所国家流感中心建立）目前甲型H1N1主要的检测方法核酸检测：50目前甲型H1N1主要的检测方法免疫荧光法

免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测甲型H1N1病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1感染的最后诊断。病毒培养

用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染甲型H1N1

病毒。血清学检测

血凝抑制实验目前甲型H1N1主要的检测方法免疫荧光法

免疫荧光试验可以区51病毒培养

用MDCK细胞和SPF鸡胚分离甲型H1N1