最新-5第五章核酸化学-课件

第五章

核酸第五章

核酸1第一节概述P177一、核酸研究简史（一）核酸的发现1868年瑞士青年科学家Miescher在外科绷带脓细胞分离得到细胞核，从中提取出一种含磷量很高的酸性化合物称为核素。1889年Altmann发明了从酵母和动物组织中制备不含蛋白质的核酸的方法。首次提出了核酸的名称。第一节概述P177一、核酸研究简史2（二）核酸功能的发现1944年,Avery的肺炎球菌转化现象证明了遗传的物质基础是核酸（三）DNA双螺旋结构模型结构的建立X-射线结晶学技术的进步导致1953年Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型。1958年提出中心法则。1966年Nirenberg破译了遗传密码（二）核酸功能的发现1944年,Avery的肺炎球菌转化现象3DNA双螺旋立体结构两条DNA链形成双螺旋结构ThetwostrandsofDNAformadoublehelix.

DNA双螺旋立体结构两条DNA链形成双螺旋结构41958Crick提出中心法则1958Crick提出中心法则5DNA？

RNA蛋白质

复制转录翻译？？DNA复制转录翻译？？6（四）生物技术的兴起七十年代前期DNA重组技术的建立的基础导致现代生物技术的兴起。

（五）人类基因组计划开辟了生命科学的新纪元1990年人类基因组计划实施庞大的人类基因组计划，在经过各国科学家的多年努力，已取得巨大的成就。人类基因组的全序列提前到2019、4、14完成。生命科学已进入了后基因组时代，研究重心已从基因测序转移到基因的功能。功能基因组学蛋白质组学结构基因组学RNA组学（四）生物技术的兴起七十年代前期DNA重组技术的建立的基础导7二核酸的概念和重要性(一)概念核酸是由许多核苷酸单元按一定顺序连接组成的线性多聚体，是核蛋白的组分之一，呈酸性，最初从细胞核中发现，所以称核酸。核酸是所有生物遗传变异的物质基础。(二)重要性1.与生命活动关系密切，是重要的生命物质。生命的起源、生长、发育、衰老、死亡与之有关。2.核酸研究是现代生命科学研究的核心。二核酸的概念和重要性8第二节核酸的类别、分布和组成（一）、类别：P178核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）。核糖核酸（RNA）分成三类：1、信使RNA（mRNA）2、转移RNA（tRNA）3、核糖体RNA（rRNA）第二节核酸的类别、分布和组成9（二）、分布：P1781、DNA的分布：原核生物集中于核区.真核生物细胞核,线粒体、叶绿体亦含有DNA.原核、真核生物的质粒病毒含有DNA或RNA.

（二）、分布：P178102、RNA的分布存在于细胞质和细胞核中。发现了许多新的具有特殊功能的RNA：如反义RNA，核酶等.病毒和亚病毒RNA有许多种：正链RNA病毒、负链RNA病毒、类病毒、卫星病毒等.2、RNA的分布11（三）、组成P1781.组成元素:C、H、O、N、P2.组成单位:核苷酸（三）、组成P1781.组成元素:C、H、12核酸水解产物：核酸水解产物：13（1）碱基：P179a、嘌呤碱：腺嘌呤（Ade)、鸟嘌呤(Gua)b、嘧啶碱：胞嘧啶(Cyt)、尿嘧啶(Ura)、胸腺嘧啶(Thy)c、稀有碱基:稀有碱基大部分都是甲基化碱基tRNA稀有碱基约占10%（1）碱基：P17914RNA为D-核糖，DNA为D-2-脱氧核糖，二者都是β型。差别：2位羟基是否脱氧。（2）核酸中的糖P180RNA为D-核糖，DNA为D-2-脱氧核糖，二者都是β型15嘌呤碱基和嘧啶碱基P179嘌呤碱基和嘧啶碱基P17916

（3）核苷：P180戊糖与碱基通过β-糖苷键相连，C—N糖苷键。糖C1与嘧啶碱N1与嘌呤碱N9相连，碱基与糖环垂直。根据核苷中所含戊糖的不同，分为核糖核苷和脱氧核糖核苷。命名先冠以碱基名称，糖环C加′，碱基不加′。核苷的顺式结构和反式结构。

RNA某些修饰化和异构化的核苷，碱基、核糖均可被修饰，主要是甲基化。tRNA、rRNA还含有少量假尿嘧啶核苷。（3）核苷：P18017核苷核苷18（4）核苷酸P181戊糖羟基的磷酸化成核苷酸。核糖核苷糖环上有3个自由羟基。脱氧核糖核苷糖环上有2个自由羟基。环化腺苷酸是细胞功能的调节分子和信号分子。（4）核苷酸P18119碱基相连（核苷）酯键碱基相连（核苷）酯键20核苷酸核苷酸21最新-5第五章核酸化学-课件22

DNA

RNA化学碱基(base) ATGCAUGC成分糖(sugar)脱氧核糖核糖(deoxyribose)(ribose)磷酸(phosphoricacid)结构脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸单元 deoxyribonucleotideribonucleotideDNA与RNA的化学成分 DNA23第三节核酸的结构P186一、核酸的一级结构P186（一）核酸中核苷酸的连接方式DNA、RNA中的脱氧核苷酸、核苷酸是通过3‘，5‘–磷酸二酯键连接的。表示方法：书写顺序5‘——3’。核酸的一级结构是指核酸分子中各核苷酸残基以磷酸二酯键连接、沿多核苷酸链排列的顺序。第三节核酸的结构P186一、核酸的一级结构24最新-5第五章核酸化学-课件25核苷酸的组成与连接核苷酸的组成与连接26最新-5第五章核酸化学-课件271、表示方法（1）线条式：竖线碳链、碱基、磷酸1、表示方法（1）线条式：竖线碳链、碱基、磷酸28（2）文字式：5＇pＡpＣpＴpＴpＧpＡpＡpＣpＧ3＇DNA

5＇pＡpＣpＵpＵpＧpＡpＡpＣpＧ3＇RNA此式可进一步简化为：5＇ＡＣＴＴＧＡＡＣＧ3＇

5＇ＡＣＵＵＧＡＡＣＧ3＇（2）文字式：29(二）DNA1、DNA的一级结构P186DNA的一级结构A、T、G、C通过3`，5`-磷酸二酯键连接，C’1—碱基，C’2——脱氧。碱基：A、T、G、C脱氧核糖没有侧链

(二）DNA30DNA的

一

级

结

构

图

示DNA的

一

级

结

构

图

示312、一级结构特点

DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量十分巨大。细菌的基因是连续的,无内含子功能相关基因，组成操纵子，有共同的调控序列，较少重复序列。真核生物的基因是断开的，有内含子功能相关基因，不组成操纵子，调控序列占比重大，有较大重复序列,又分为高度重复、中度重复、单一序列。此外还有回文结构.越是高等的真核生物其调控序列和重复序列的比例越大。2、一级结构特点DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量32内含子——基因内不编码任何蛋白质和RNA的顺序，又称为插入顺序（基因与基因之间非编码顺序称为间隔顺序）。操纵子——DNA分子中基因表达的一个协调单位。重复顺序——DNA中许多重复排列的核苷酸序列。高度重复顺序——“基础顺序”短，含5-100pb,重复106-107次。中度重复顺序——“基础顺序”长，含100-300pb或更长,重复几百到几万次。单一顺序——单拷贝。大小不等，每一段顺序决定一个蛋白质结构，为一个蛋白基因，称为结构基因。回文结构——该结构中脱氧核苷酸的排列在DNA两条链中顺读与倒读其意义是一样的。相关概念内含子——基因内不编码任何蛋白质和RNA的顺序，又称为插入顺33回文结构及其形成的发夹结构和十字架结构回文结构及其形成的发夹结构和十字架结构34附：一级结构的测定原理:末端终止法化学法DNA测序仪附：一级结构的测定35（1）末端终止法：（1）末端终止法：36（2）化学法硫酸二甲酯使G和A甲基化后，G的糖苷键更容易断裂，甲酸替代硫酸二甲酯后，都断裂；食盐存在时，肼专门断裂C，无食盐存在时，C和T都断裂。（2）化学法硫酸二甲酯使G和A甲基化后，G的糖苷键更容易断裂373、二级结构（1）、模型建立的依据：P187aChargaff等科学家用纸层析及紫外分光光度技术分析了各种生物的DNA的碱基组成。结果显示：摩尔数：A=T；G=C；A+C=G+T；A+G=C+T3、二级结构38X-raypictureofDNAb、DNA钠盐纤维X-衍射分析：b、DNA钠盐纤维X-衍射分析：3934A3.4AantiparallelMajorgrooveMinorgroove20A34ADNA结构模型

34A3.4AantiparallelMajorgroov40DNA结构模型DNA结构模型41（2）、DNA双螺旋的结构特征：P187A、两条反平行多核苷酸链绕中心轴缠绕，右手螺旋；B、骨架：内侧——碱基垂直于纵轴；外侧——磷酸与戊糖、彼此通过3’、5’磷酸二酯键，糖环平面与纵轴平行。大沟宽1.2nm，深0.85nm；小沟宽0.6nm，深0.75nm；C、直径：2nm，二相邻碱基高度0.34nm，二核苷酸夹角36度，旋转一周10个核苷酸，一周高度3.4nm；（2）、DNA双螺旋的结构特征：P18742最新-5第五章核酸化学-课件43D、碱基互补配对：A、T形成两个氢键；GC形成三个氢键，碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制。D、碱基互补配对：A、T形成两个氢键；GC形成三个氢键，碱44腺嘌呤胸腺嘧啶鸟嘌呤胞嘧啶碱基之间形成氢键模型腺嘌呤胸腺嘧啶鸟嘌呤胞嘧啶碱基之间形成氢键模型45双螺旋平面图ThedoublehelixmaintainsaconstantwidthbecausepurinesalwaysfacepyrimidinesinthecomplementaryA-TandG-Cbasepairs.ThesequenceinthefigureisT-A,C-G,A-T,G-C.双螺旋平面图46碱基平面垂直于糖--磷酸骨架Flatbasepairslieperpendiculartothesugar-phosphatebackbone.

碱基平面垂直于糖--磷酸骨架475、DNA二级结构的多态性P190DNA分子结构可受环境的影响而改变B型DNA：在相对湿度92%下制得的纤维是B型结构，适中。A型DNA：在相对湿度75%下制得的纤维是A型结构，宽短。Z型DNA：碱基与中心的倾角9℃，细长。5、DNA二级结构的多态性P19048

B-DNAA-DNAZ-DNA 螺旋类型：右手螺旋右手螺旋左手螺旋每圈螺旋含碱基数目：10.41112碱基平面与分子中轴：垂直几乎垂直不垂直 存在状态：正常高盐、脱水真核基因组 生理DNA-RNA与基因表达 条件异源双链调控有关 (heteroduplex)DNA的构型

49三链DNA.人工合成DNA发现，第三股嵌在大沟里。四链DNAP191三链DNA.P19150三链DNA结构三链DNA结构516、三级结构：P193细长的分子以一种高度压缩状态存在于细胞中，双螺旋的进一步扭曲就构成了三级结构。超螺旋，三级结构中的一种。DNA压缩总原则：多级螺旋，4级压缩。6、三级结构：P19352DNA超螺旋结构DNA超螺旋结构53叶绿体中含有环状DNA细菌等原核生物质粒染色体线粒体中含有环状DNA原核、真核生物环状DNA超螺旋三级结构叶绿体中含有环状DNA细菌等原核生物质粒染色体线粒体中含有环54（三）RNA1、RNA结构的特点P195RNA与DNA结构十分相似，二者相比有几点不同：（1）核糖;（2）碱基：A、G、C、U（3）二者在三维结构上的区别——RNA不具有规则的氢键结构，单链形式存在，只是回折，局部配对，不配对形成突环。（三）RNA552、tRNAP197•由70--90个核苷酸组成，但修饰成分多。在蛋白质合成过程中具有转运氨基酸、识别密码子的作用，在DNA反转录合成及基因表达调控中起着重要的作用。2、tRNAP19756tRNA有“接头”(adaptor)功能，具备双重特性:识别氨基酸——其3’末端的腺苷酸可与一氨基酸共价连接识别密码子——反密码子与mRNA中的密码子碱基配对。tRNA有“接头”(adaptor)功能，具备双重特性:57（1）、结构特点：A、有较多的稀有碱基，多为转录后加工而来。B、3`末端为氨基酸接受臂CCA。C、5`末端作为GorC。（1）、结构特点：A、有较多的稀有碱基，多为转录后加工而582、二级结构—三叶草形：叶柄是双螺旋氨基酸臂；突环三大一小。A、接受臂：接受活化AA，末端为CCA。B、TψC环：ψ假鸟嘧啶，有TψC顺序。C、额外环(可变环）：变化最大区域，不同tRNA不同大小额外环。D、反密码环：7个核苷酸组成，环中部反密码子。三对碱基组成。E、二氢尿嘧啶环：8---12核苷酸，两个二氢尿嘧啶。2、二级结构—三叶草形：59接受臂：3’端有一游离的CCA顺序，氨基酸通过共价键与A上的2’-OH或3’-OH相连；TψC臂：ψ是假尿嘧啶。该臂上有TψC的顺序。反密码子臂：在反密码子环的中间是三联的反密码子。二氢尿嘧啶臂（D臂）：环中含有二氢尿嘧啶。额外臂：变化最大的区域，可分为两类，一类仅含3-5个核苷酸，另一类含有一条较大的臂。接受臂：3’端有一游离的CCA顺序，氨基酸通过共价键与A上的60Ala的tRNA结构示意图Ala61Aspace-fillingmodelshowsthatyeasttRNAPhetertiarystructureiscompact.ThetwoviewsoftRNAarerotatedby90°.（3）三级结构：倒L型：靠氢键维持。Aspace-fillingmodelshowsth62靠氢键维持，tRNA三级结构呈L形；受体臂顶端的碱基位于“L”的一个端点，而反密码子臂的套索状结构生成了“L”的另一端点，分子中两个不同的功能基团是最大限度分离的。这个结构形式与AA-tRNA合成酶对tRNA的识别有关，满足了蛋白质合成过程中对tRNA的各种要求。tRNAL形三级结构靠氢键维持，tRNA三级结构呈L形；tRNAL形三级结构63反密码子环3`氨基酸臂反密码子环3`氨基酸臂643、rRNAP199rRNA占RNA总量的80%以上，核糖体由大小两个亚基组成，大小亚基分别几种rRNA和数十种蛋白质组成。rRNA与几十种蛋白质组成的细胞颗粒——核糖体是细胞内合成蛋白质的工厂。核糖体上催化肽键合成的是rRNA，蛋白质只是维持rRNA的构象，起辅助作用。3、rRNAP19965—Mg2++Mg2++Urea16srRNAProtein:S1,S2,……S215srRNA23srRNAProtein:L1,L2,……L3430S50S70S核糖体和rRNA的结构和功能—Mg2++Mg2++Urea16srRNA5srRNA66rRNA的二级结构图示rRNA的二级结构图示674、mRNAP201（1）原核生物mRNA结构特征P201原核生物的mRNA链上有多个编码区（多个基因），为多顺反子，5’和3‘端各有一段非翻译区。多顺反子：一个转录本加工而成的mRNA序列中包含多个基团。编码区：mRNA中以AUG为起点，以终止密码子为终点，编码AA的一系列密码子序列。4、mRNAP20168前导区：mRNA5’端编码区前面的非翻译序列。尾区：mRNA3’端终止密码子后非翻译序列。原核生物mRNA结构前导区：mRNA5’端编码区前面的非翻译序列。原核生物mRN69（2）真核生物mRNA结构特征P201真核生物的mRNA都是单顺反子。单顺反子：一个转录本加工而成的mRNA序列只代表一个基因。mRNA5’端都有帽子结构。绝大多数真核生物mRNA具有poly(A)尾。（2）真核生物mRNA结构特征P20170真核生物mRNA的结构模式EukaryoticmRNAismodifiedbyadditionofacaptothe5’endandpoly(A)tothe3’end真核生物mRNA的结构模式EukaryoticmRNAi71真核生物转录常从嘌呤核苷酸开始，第1个核苷酸保留5’三磷酸基团，以3’位与下一核苷酸5’位形成磷酸二酯键。转录的起始序列可表示为5’PPPAPNPNPNP…；在鸟苷酰转移酶催化下在其5’加入G，且连接形式是5’—5’三磷酸键。表示为：5’GPPPAPNPNP+PP+P。“帽子”结构真核生物转录常从嘌呤核苷酸开始，第1个核苷酸保留5’三磷酸基72帽子0：第1个甲基在末端鸟嘌呤7位上，所有真核生物均存在此结构。帽子1：第2个甲基加到次末端核苷酸上，具有两个甲基。在高等真核生物中，如果转录的第1个核苷酸是A的话，则在A的N6位上还有一个甲基。帽子2：以帽子1为底物，在第三个核苷酸再加上一个甲基。“帽子”结构的甲基化帽子0：第1个甲基在末端鸟嘌呤7位上，所有真核生物均存在此结73

帽子结构功能：a、增加mRNA稳定性，保护mRNA免遭5’外切酶的攻击。b、有助于核糖体对mRNA的识别和结合，使翻译得以正确起始。帽子结构功能：74mRNApoly(A)尾功能：A、防止mRNA降解，大大提高了mRNA在细胞质中的稳定性。B、是mRNA穿越核膜由细胞核进入细胞质的必需形式。C、与翻译有关；切除poly(A)尾会影响翻译起始。mRNApoly(A)尾功能：75第四节核酸的性质P205一、一般性质1、外观：DNA白色纤维状，RNA白色粉末；2、溶解性：极性化合物，微溶于水但不溶于乙醇、乙醚、氯仿、三氯醋酸等有机溶剂，常以乙醇进行沉淀，其钠盐易溶于水，溶解度与pH有关；3、黏度：DNA溶液的黏度极高，RNA溶液的黏度小4、颜色反应：RNA与浓HCL和苔黑酚（甲基间苯二酚）共热产生绿色，原因：D-核糖与酸作用产生糠醛，糠醛与甲基间苯二酚作用呈绿色；DNA与强酸和二苯胺一同加热呈蓝色，原因：D-2-脱氧核糖与酸作用产生ω-羟基-γ-酮戊醛，后者与二苯胺作用呈蓝色。第四节核酸的性质P205一、一般性质76二、核酸的水解：1、酸水解：磷酸酯键与糖苷键对酸的敏感程度不同。磷酸酯键比糖苷键稳定；嘌呤的糖苷键比嘧啶糖苷键更不稳定；嘌呤与脱氧核糖的糖苷键最不稳定。2、碱水解RNA的磷酸酯键易被碱水解；DNA的磷酸酯键对碱稳定。原因：a、RNA核糖上2’-OH基，在碱性条件下形成磷酸三酯，磷酸三酯极不稳定，随即水解，产生2’，3’环磷酸酯，进而分解成2’或3’核苷酸，溶液成为混合液。b、DNA核糖上无2’-OH基，不能形成磷酸三酯中间物，因此可以抵抗碱水解。二、核酸的水解：1、酸水解：77RNA链水解RNA水解后生成一个2‘,3’环式单核苷酸中间体；中间体不稳定，很快转变为2‘单核苷酸和3’单核苷酸RNA链水解RNA水解后生成一个2‘,3’环式单核苷酸中间体783、酶水解：核糖核酸酶A、牛胰核糖核酸酶：专一性切割位点：嘧啶核苷-3‘-磷酸与其它核苷酸之间的连键。产物：3’-嘧啶核苷酸；或以3’-嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。水解机制：同碱相似。3、酶水解：核糖核酸酶79B、核糖核酸酶T1专一性切割位点：3’-鸟苷酸与其相邻的5’-核苷酸之间的连键。

产物：3’-鸟苷酸；或以3’-鸟苷酸结尾的寡核苷酸。C、核糖核酸酶T2专一性切割位点：3’-腺苷酸与其相邻的5’-核苷酸之间的连键。

产物：3’-腺苷酸结尾的寡核苷酸。B、核糖核酸酶T180脱氧核糖核酸酶A、牛胰脱氧核糖核酸酶：切断双链或单链DNA成为5’-磷酸为末端的寡核苷酸，平均长度4个核苷酸。B、牛脾脱氧核糖核酸酶：切断双链或单链DNA成为3’-磷酸为末端的寡核苷酸，平均长度6个核苷酸。C、链球菌脱氧核糖核酸酶：产物为5’-磷酸为末端的寡核苷酸，长短不一。D、限制性内切酶：在细菌中发现这类酶，主要降解外源DNA，对自身DNA无作用。脱氧核糖核酸酶81限制性内切酶特点：切割位点往往是回文结构；具有高度专一性，识别双链特定的位点，将两条链切开成粘性、平头末端；用于染色体结构分析、基因测序的分析、基因的体外重组。限制性内切酶特点：切割位点往往是回文结构；具有高度专一性，识82最新-5第五章核酸化学-课件83三、核酸的酸碱解离性质(参见P182)1、碱基的解离嘧啶和嘌呤化合物杂环中的氮和取代基具有结合和释放质子的能力，因此是兼性离子，即是两性电解质。胞嘧啶的解离；胸腺嘧啶的解离；腺嘌呤的解离；鸟嘌呤和次黄嘌呤的解离；2、核苷的解离：糖的存在增加了酸性解离3、核苷酸的解离：磷酸基的存在，使核苷酸具有较强的酸性。三、核酸的酸碱解离性质(参见P182)1、碱基的解离84四、核酸的紫外吸收：参见P182核酸中碱基环的共轭双键对240~290nm波段紫外光有强烈吸收。最大光吸收值在260nm，是核酸定量以及定性的基础。由于蛋白质在此光区仅有弱吸收，故可以此特性来测定核酸在细胞和组织中的分布。用A260/A280的比值可以判断样品的纯度：纯DNA的A260/A280比值应为1.8,纯RNA应为2.0；摩尔吸光系数ε(P)值；ε(P)=A/CL。四、核酸的紫外吸收：参见P18285（一）变性：（P208）1、概念：许多因素可以破坏氢键，氢键破坏后的核酸的双螺旋结构变成单链的，成为“无规线团”，此作用称为核酸的变性。变性是双螺旋氢键的断裂，不涉及共价键（磷酸二酯键）断裂。（如果磷酸二酯键断裂则叫降解，此时分子量降低）2、引起变性的因素：1）温度的升高；2）碱酸度改变；3）某些变性剂：尿素、甲醛等。五、核酸的变性、复性及杂交P208（一）变性：（P208）五、核酸的变性、复性及杂交863、变性的特点：1）结构变成无规则线团；2）260nm紫外吸光度急剧升高；粘度下降；生物活性丧失3）爆发式，变性发生在很窄的温度范围，有一个相变的过程。熔解温度（Tm值）：双螺旋失去一半时的温度。也叫熔点、解链温度。3、变性的特点：1）结构变成无规则线团；87DNA变性曲线DNA变性曲线884、影响DNA的Tm的因素：（1）DNA均一性：均质DNA熔解过程在一个较窄的温度范围内；异质DNA熔解过程在一个较宽的温度范围内。（2）G-C含量：G-C含量越高Tm值愈高；原因：G≡CA＝T测定Tm可以推算出DNA碱基的百分组成。经验公式：XG-C=（Tm-69.3)X2.44；

4、影响DNA的Tm的因素：（1）DNA均一性：89（3）介质离子强度离子强度较低的介质中,Tm值较低,熔解温度范围较宽；离子强度较高的介质中,Tm值较高,熔解温度范围较窄。RNA的变性：螺旋区较少,变性Tm值较低；tRNA螺旋区较多,变性Tm值较高，类似于DNA。（3）介质离子强度离子强度较低的介质中,Tm值较低,熔解温90（二）复性（P209）变性后DNA两条分开的链重新特异的组合而恢复双螺旋结构和性质，这种作用称复性。复性可部分恢复理化性质，变性DNA骤然降温不能复性，据此可制备单链核酸探针。缓慢冷却复性称退火。片段越大复性越慢；浓度越大复性越快。（二）复性（P209）变性后DNA两条分开的链重新特异的组91单核苷酸ε(P)值大于单链多核苷酸；单链核苷酸ε(P)值大于双链核苷酸，因此核酸变性时,ε(P)值增高，称增色效应；核酸复性时,ε(P)值降低，称减色效应。常用核酸溶液紫外吸收值的变化作为变性或复性的指标。单核苷酸ε(P)值大于单链多核苷酸；92

双螺旋呼吸：

双链DNA配对碱基的氢键不断处于断裂和再生状态中，特别是在稳定性较低的富含A-T的区段。在微观上，常常出现瞬间的单链泡状结构，这种现象称为双螺旋的呼吸作用。一些蛋白质可识别这种结构，并在单链结构下阅读和识别DNA内部所含信息。双螺旋呼吸：93（三）杂交（P210）DNA的变性在一定条件下是可逆的，而相同来源的DNA分子容易通过这种方式进行杂交，甚至不同来源的DNA以及多核糖核苷酸与多脱氧核糖核苷酸之间也可以进行杂交。1、概念：不同来源的分子，经热变性后冷却复性，如异源间某些区域有相同的序列，则会形成杂交分子。（三）杂交（P210）DNA的变性在一定条件下是可逆的，而94核酸杂交FilterhybridizationestablisheswhetherasolutionofdenaturedDNA(orRNA)containssequencescomplementarytothestrandsimmobilizedonthefilter.核酸杂交Filterhybridizationestab95样品酶解琼脂糖电泳分离变性、转移硝酸纤维薄膜只吸收单链与放射性探针杂交十小时，洗涤烘干放射自显影，可探知或分离互补系列DNA2、southern（EdwenSouthern）杂交：（印记技术、固相杂交）（P428）琼脂糖电泳分离变性、转移硝酸纤维薄膜只吸收单链与放射性探针杂96样品酶解琼脂糖电泳分析变性转移硝酸纤维薄膜只吸收单链与放射性探针杂交十小时洗涤烘干放射自显影样品酶解琼脂糖电泳分析变性转移硝酸纤维薄膜只吸收单链与放射性97最新-5第五章核酸化学-课件983、DNA聚合酶链反应（PCR）（P423）原理：•1）变性：通过加热使双链DNA变成单链DNA。•2）退火：温度突然降低，引物与模板链局部形成杂交链。•3）延伸：在DNA聚合酶的作用下，进行DNA链延伸反应。•以上三步为一个循环。3、DNA聚合酶链反应（PCR）（P423）原理：99基本步骤：•a、设计一对引物：应尽量减少非特异产物。•b、优化反应体系：适量模板，引物，4种dNTP,TaqDNA聚合酶,Mg2+。•c、选择热循环温度：变性温度，退火温度，延伸温度。•d、鉴定扩增产物：一般用凝胶电泳。基本步骤：100§5.核酸的分离和纯化一、分离的一般原则要保持天然性，因此要求在提取过程中掌握下列原则：1、防止核酸酶的降解；2、防止化学因素的降解；3、防止物理因素的降解。§5.核酸的分离和纯化一、分离的一般原则101二、DNA的分离纯化预处理：将细胞提取物用1Mol/LNaCl溶解，然后稀释至0.14Mol/L，离心，沉淀为DNP，（溶液中含RNP）。DNP的蛋白质部分可用下列方法除去：1、苯酚法2、辛醇——氯仿法3、SDS法将不同构象的DNA进行分离：

蔗糖密度梯度超离心——大小不等的线性DNA分开，也可将分子量相同而构象不同的DNA分开；氯化铯密度梯度平衡超离心——双股DNA和单股DNA分开；氯化铯-溴化乙锭梯度离心——双链DNA的环状DNA和线状DNA分开。羟基磷灰石（HA）或白蛋白硅藻土（MAK）柱层析——分离变性DNA和天然DNA。二、DNA的分离纯化预处理：将细胞提取物用1Mol/LN102三、RNA的分离纯化预处理：细胞均浆进行差速离心，制得细胞核、叶绿体、线粒体、核糖体等细胞器和细胞溶质，然后再从这些细胞器中分离某一类RNA。RNP除蛋白的方法与DNP除蛋白的方法相似。RNA的提取多采用酚提取法进一步纯化多种方式：密度梯度离心、DEAE—纤维素、DEAE—Sephadex、甲基化白蛋白硅藻土等各种特异柱层析、特异亲和层析（分离mRNA)、免疫法（分离mRNA)等。聚丙烯酰胺凝胶电泳、羟基磷灰石柱层析、凝胶过滤法也常用于分离纯化RNA。三、RNA的分离纯化预处理：细胞均浆进行差速离心，制得细胞核103§6.核酸的分析测定1、紫外吸收法：测碱基2、定糖法：RNA戊糖糠醛＋苔黑酚＋三氯化铁绿色DNA脱氧戊糖羟基酮醛+二苯胺蓝色3、定磷法：样品灰化：浓硫酸或过氯酸处理生成无机磷＋钼酸胺磷钼酸+还原剂钼蓝。§6.核酸的分析测定104§7.核酸的生物学功能一、核酸与遗传信息的传递1、DNA是基本的遗传物质在遗传过程中，DNA的具体作用有2方面：A、在细胞分裂是按照自己的结构精确复制传给子孙；B、作为模板将所储遗传信息传给mRNA。§7.核酸的生物学功能一、核酸与遗传信息的传递105A、RNA参与蛋白质的生物合成rRNA占细胞总RNA的80%，它是装配者并起催化作用.tRNA占细胞总RNA的15%，它是转换器，携带氨基酸并起解译作用.mRNA占细胞总RNA的3~5%，它是信使，携带DNA的遗传信息,并起蛋白质合成的模板作用.2、RNA在传递遗传信息上的作用A、RNA参与蛋白质的生物合成2、RNA在传递遗传信息上的106rRNAmRNAtRNAmRNAtRNA107B、RNA功能的多样性控制蛋白质合成.作用于RNA转录后加工与修饰.基因表达与细胞功能的调节.生物催化与其他细胞持家功能.遗传信息的加工与进化.B、RNA功能的多样性108蛋白质外壳RNA无感染力有感染力可产生新TMV病毒水和苯酚C、有些病毒的遗传物质是RNA有些病毒只含有RNA和蛋白质，不含有DNA,称为RNA病毒，又叫做逆转录病毒。如烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus,TMV)，其遗传物质是RNA。蛋白质外壳RNA水和苯酚C、有些病毒的遗传物质是RNA有些病109二、核酸结构改变与生物变异任何一对碱基的改变或增减，都可以导致生物的变异。DNA结构的改变即导致蛋白质结构的改变，从而引起生物遗传的变异。三、核酸与病变1、核酸与遗传性疾病2、核酸与病毒性疾病二、核酸结构改变与生物变异任何一对碱基的改变或增减，都110四、DNA与细菌转化细菌转化实验噬菌体侵染实验这些实验都证明了DNA是主要遗传物质有些病毒的遗传物质是RNA.四、DNA与细菌转化细菌转化实验111细菌的遗传物质是DNA的转化实验图示Griffith(1928)发现肺炎双球菌转化，Avery(1944)证实转化因子是DNA而不是蛋白质，证实了遗传物质是DNA，并由Hotchkiss进一步证实。细菌的遗传物质是DNA的转化实验图示Griffith(192112搅拌过滤35S32P-*有放射性*有放射性-无放射性-无放射性搅拌过滤噬菌体的遗传物质是DNA的转化实验图示A.D.Hershey,MarthaChase(1952),用噬菌体T2感染大肠杆菌的放射性同位素标记示踪实验最终证实了遗传物质是DNA。搅拌过滤35S32P-*有放射性*有放射性-无放射性-无放射113Hershey和Chase的“渗振”实验T2噬菌体：32P标记DNA，35S标记外壳蛋白。侵染实验表明进入大肠杆菌细胞内并进行复制与组装的是DNA。ThegeneticmaterialofphageT2isDNA.Hershey和Chase的“渗振”实验114§8.基因重组与遗传工程概念：遗传工程（又称基因工程），简单地说，就是利用人工方法改组DNA（即改组基因），从而培育新型生物品种的技术。原理：先从甲种细胞提取DNA，用适当的酶切割成片段，或用人工合成的DNA片段（统称外源DNA）；再将外源DNA与合适的DNA进行重新组合，形成重组DNA分子，然后用适当的方法把这种重组DNA分子引入乙种生物（称受体或宿主）细胞中，并在受体细胞中繁殖遗传，使子代表现出新渗入的DNA所携带的遗传性和特性。步骤：1.重组DNA分子（即DNA体外重组、基因重组）2.将重组DNA引入受体细胞（转化、转导）。§8.基因重组与遗传工程概念：遗传工程（又称基因工程），简单115思考题：1、简述tRNA、rRNA、mRNA在蛋白质合成中的作用。2、试比较DNA和RNA在结构和功能上的区别。思考题：116最新-5第五章核酸化学-课件117第五章

核酸第五章

核酸118第一节概述P177一、核酸研究简史（一）核酸的发现1868年瑞士青年科学家Miescher在外科绷带脓细胞分离得到细胞核，从中提取出一种含磷量很高的酸性化合物称为核素。1889年Altmann发明了从酵母和动物组织中制备不含蛋白质的核酸的方法。首次提出了核酸的名称。第一节概述P177一、核酸研究简史119（二）核酸功能的发现1944年,Avery的肺炎球菌转化现象证明了遗传的物质基础是核酸（三）DNA双螺旋结构模型结构的建立X-射线结晶学技术的进步导致1953年Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型。1958年提出中心法则。1966年Nirenberg破译了遗传密码（二）核酸功能的发现1944年,Avery的肺炎球菌转化现象120DNA双螺旋立体结构两条DNA链形成双螺旋结构ThetwostrandsofDNAformadoublehelix.

DNA双螺旋立体结构两条DNA链形成双螺旋结构1211958Crick提出中心法则1958Crick提出中心法则122DNA？

RNA蛋白质

复制转录翻译？？DNA复制转录翻译？？123（四）生物技术的兴起七十年代前期DNA重组技术的建立的基础导致现代生物技术的兴起。

（五）人类基因组计划开辟了生命科学的新纪元1990年人类基因组计划实施庞大的人类基因组计划，在经过各国科学家的多年努力，已取得巨大的成就。人类基因组的全序列提前到2019、4、14完成。生命科学已进入了后基因组时代，研究重心已从基因测序转移到基因的功能。功能基因组学蛋白质组学结构基因组学RNA组学（四）生物技术的兴起七十年代前期DNA重组技术的建立的基础导124二核酸的概念和重要性(一)概念核酸是由许多核苷酸单元按一定顺序连接组成的线性多聚体，是核蛋白的组分之一，呈酸性，最初从细胞核中发现，所以称核酸。核酸是所有生物遗传变异的物质基础。(二)重要性1.与生命活动关系密切，是重要的生命物质。生命的起源、生长、发育、衰老、死亡与之有关。2.核酸研究是现代生命科学研究的核心。二核酸的概念和重要性125第二节核酸的类别、分布和组成（一）、类别：P178核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）。核糖核酸（RNA）分成三类：1、信使RNA（mRNA）2、转移RNA（tRNA）3、核糖体RNA（rRNA）第二节核酸的类别、分布和组成126（二）、分布：P1781、DNA的分布：原核生物集中于核区.真核生物细胞核,线粒体、叶绿体亦含有DNA.原核、真核生物的质粒病毒含有DNA或RNA.

（二）、分布：P1781272、RNA的分布存在于细胞质和细胞核中。发现了许多新的具有特殊功能的RNA：如反义RNA，核酶等.病毒和亚病毒RNA有许多种：正链RNA病毒、负链RNA病毒、类病毒、卫星病毒等.2、RNA的分布128（三）、组成P1781.组成元素:C、H、O、N、P2.组成单位:核苷酸（三）、组成P1781.组成元素:C、H、129核酸水解产物：核酸水解产物：130（1）碱基：P179a、嘌呤碱：腺嘌呤（Ade)、鸟嘌呤(Gua)b、嘧啶碱：胞嘧啶(Cyt)、尿嘧啶(Ura)、胸腺嘧啶(Thy)c、稀有碱基:稀有碱基大部分都是甲基化碱基tRNA稀有碱基约占10%（1）碱基：P179131RNA为D-核糖，DNA为D-2-脱氧核糖，二者都是β型。差别：2位羟基是否脱氧。（2）核酸中的糖P180RNA为D-核糖，DNA为D-2-脱氧核糖，二者都是β型132嘌呤碱基和嘧啶碱基P179嘌呤碱基和嘧啶碱基P179133

（3）核苷：P180戊糖与碱基通过β-糖苷键相连，C—N糖苷键。糖C1与嘧啶碱N1与嘌呤碱N9相连，碱基与糖环垂直。根据核苷中所含戊糖的不同，分为核糖核苷和脱氧核糖核苷。命名先冠以碱基名称，糖环C加′，碱基不加′。核苷的顺式结构和反式结构。

RNA某些修饰化和异构化的核苷，碱基、核糖均可被修饰，主要是甲基化。tRNA、rRNA还含有少量假尿嘧啶核苷。（3）核苷：P180134核苷核苷135（4）核苷酸P181戊糖羟基的磷酸化成核苷酸。核糖核苷糖环上有3个自由羟基。脱氧核糖核苷糖环上有2个自由羟基。环化腺苷酸是细胞功能的调节分子和信号分子。（4）核苷酸P181136碱基相连（核苷）酯键碱基相连（核苷）酯键137核苷酸核苷酸138最新-5第五章核酸化学-课件139

DNA

RNA化学碱基(base) ATGCAUGC成分糖(sugar)脱氧核糖核糖(deoxyribose)(ribose)磷酸(phosphoricacid)结构脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸单元 deoxyribonucleotideribonucleotideDNA与RNA的化学成分 DNA140第三节核酸的结构P186一、核酸的一级结构P186（一）核酸中核苷酸的连接方式DNA、RNA中的脱氧核苷酸、核苷酸是通过3‘，5‘–磷酸二酯键连接的。表示方法：书写顺序5‘——3’。核酸的一级结构是指核酸分子中各核苷酸残基以磷酸二酯键连接、沿多核苷酸链排列的顺序。第三节核酸的结构P186一、核酸的一级结构141最新-5第五章核酸化学-课件142核苷酸的组成与连接核苷酸的组成与连接143最新-5第五章核酸化学-课件1441、表示方法（1）线条式：竖线碳链、碱基、磷酸1、表示方法（1）线条式：竖线碳链、碱基、磷酸145（2）文字式：5＇pＡpＣpＴpＴpＧpＡpＡpＣpＧ3＇DNA

5＇pＡpＣpＵpＵpＧpＡpＡpＣpＧ3＇RNA此式可进一步简化为：5＇ＡＣＴＴＧＡＡＣＧ3＇

5＇ＡＣＵＵＧＡＡＣＧ3＇（2）文字式：146(二）DNA1、DNA的一级结构P186DNA的一级结构A、T、G、C通过3`，5`-磷酸二酯键连接，C’1—碱基，C’2——脱氧。碱基：A、T、G、C脱氧核糖没有侧链

(二）DNA147DNA的

一

级

结

构

图

示DNA的

一

级

结

构

图

示1482、一级结构特点

DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量十分巨大。细菌的基因是连续的,无内含子功能相关基因，组成操纵子，有共同的调控序列，较少重复序列。真核生物的基因是断开的，有内含子功能相关基因，不组成操纵子，调控序列占比重大，有较大重复序列,又分为高度重复、中度重复、单一序列。此外还有回文结构.越是高等的真核生物其调控序列和重复序列的比例越大。2、一级结构特点DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量149内含子——基因内不编码任何蛋白质和RNA的顺序，又称为插入顺序（基因与基因之间非编码顺序称为间隔顺序）。操纵子——DNA分子中基因表达的一个协调单位。重复顺序——DNA中许多重复排列的核苷酸序列。高度重复顺序——“基础顺序”短，含5-100pb,重复106-107次。中度重复顺序——“基础顺序”长，含100-300pb或更长,重复几百到几万次。单一顺序——单拷贝。大小不等，每一段顺序决定一个蛋白质结构，为一个蛋白基因，称为结构基因。回文结构——该结构中脱氧核苷酸的排列在DNA两条链中顺读与倒读其意义是一样的。相关概念内含子——基因内不编码任何蛋白质和RNA的顺序，又称为插入顺150回文结构及其形成的发夹结构和十字架结构回文结构及其形成的发夹结构和十字架结构151附：一级结构的测定原理:末端终止法化学法DNA测序仪附：一级结构的测定152（1）末端终止法：（1）末端终止法：153（2）化学法硫酸二甲酯使G和A甲基化后，G的糖苷键更容易断裂，甲酸替代硫酸二甲酯后，都断裂；食盐存在时，肼专门断裂C，无食盐存在时，C和T都断裂。（2）化学法硫酸二甲酯使G和A甲基化后，G的糖苷键更容易断裂1543、二级结构（1）、模型建立的依据：P187aChargaff等科学家用纸层析及紫外分光光度技术分析了各种生物的DNA的碱基组成。结果显示：摩尔数：A=T；G=C；A+C=G+T；A+G=C+T3、二级结构155X-raypictureofDNAb、DNA钠盐纤维X-衍射分析：b、DNA钠盐纤维X-衍射分析：15634A3.4AantiparallelMajorgrooveMinorgroove20A34ADNA结构模型

34A3.4AantiparallelMajorgroov157DNA结构模型DNA结构模型158（2）、DNA双螺旋的结构特征：P187A、两条反平行多核苷酸链绕中心轴缠绕，右手螺旋；B、骨架：内侧——碱基垂直于纵轴；外侧——磷酸与戊糖、彼此通过3’、5’磷酸二酯键，糖环平面与纵轴平行。大沟宽1.2nm，深0.85nm；小沟宽0.6nm，深0.75nm；C、直径：2nm，二相邻碱基高度0.34nm，二核苷酸夹角36度，旋转一周10个核苷酸，一周高度3.4nm；（2）、DNA双螺旋的结构特征：P187159最新-5第五章核酸化学-课件160D、碱基互补配对：A、T形成两个氢键；GC形成三个氢键，碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制。D、碱基互补配对：A、T形成两个氢键；GC形成三个氢键，碱161腺嘌呤胸腺嘧啶鸟嘌呤胞嘧啶碱基之间形成氢键模型腺嘌呤胸腺嘧啶鸟嘌呤胞嘧啶碱基之间形成氢键模型162双螺旋平面图ThedoublehelixmaintainsaconstantwidthbecausepurinesalwaysfacepyrimidinesinthecomplementaryA-TandG-Cbasepairs.ThesequenceinthefigureisT-A,C-G,A-T,G-C.双螺旋平面图163碱基平面垂直于糖--磷酸骨架Flatbasepairslieperpendiculartothesugar-phosphatebackbone.

碱基平面垂直于糖--磷酸骨架1645、DNA二级结构的多态性P190DNA分子结构可受环境的影响而改变B型DNA：在相对湿度92%下制得的纤维是B型结构，适中。A型DNA：在相对湿度75%下制得的纤维是A型结构，宽短。Z型DNA：碱基与中心的倾角9℃，细长。5、DNA二级结构的多态性P190165

B-DNAA-DNAZ-DNA 螺旋类型：右手螺旋右手螺旋左手螺旋每圈螺旋含碱基数目：10.41112碱基平面与分子中轴：垂直几乎垂直不垂直 存在状态：正常高盐、脱水真核基因组 生理DNA-RNA与基因表达 条件异源双链调控有关 (heteroduplex)DNA的构型

166三链DNA.人工合成DNA发现，第三股嵌在大沟里。四链DNAP191三链DNA.P191167三链DNA结构三链DNA结构1686、三级结构：P193细长的分子以一种高度压缩状态存在于细胞中，双螺旋的进一步扭曲就构成了三级结构。超螺旋，三级结构中的一种。DNA压缩总原则：多级螺旋，4级压缩。6、三级结构：P193169DNA超螺旋结构DNA超螺旋结构170叶绿体中含有环状DNA细菌等原核生物质粒染色体线粒体中含有环状DNA原核、真核生物环状DNA超螺旋三级结构叶绿体中含有环状DNA细菌等原核生物质粒染色体线粒体中含有环171（三）RNA1、RNA结构的特点P195RNA与DNA结构十分相似，二者相比有几点不同：（1）核糖;（2）碱基：A、G、C、U（3）二者在三维结构上的区别——RNA不具有规则的氢键结构，单链形式存在，只是回折，局部配对，不配对形成突环。（三）RNA1722、tRNAP197•由70--90个核苷酸组成，但修饰成分多。在蛋白质合成过程中具有转运氨基酸、识别密码子的作用，在DNA反转录合成及基因表达调控中起着重要的作用。2、tRNAP197173tRNA有“接头”(adaptor)功能，具备双重特性:识别氨基酸——其3’末端的腺苷酸可与一氨基酸共价连接识别密码子——反密码子与mRNA中的密码子碱基配对。tRNA有“接头”(adaptor)功能，具备双重特性:174（1）、结构特点：A、有较多的稀有碱基，多为转录后加工而来。B、3`末端为氨基酸接受臂CCA。C、5`末端作为GorC。（1）、结构特点：A、有较多的稀有碱基，多为转录后加工而1752、二级结构—三叶草形：叶柄是双螺旋氨基酸臂；突环三大一小。A、接受臂：接受活化AA，末端为CCA。B、TψC环：ψ假鸟嘧啶，有TψC顺序。C、额外环(可变环）：变化最大区域，不同tRNA不同大小额外环。D、反密码环：7个核苷酸组成，环中部反密码子。三对碱基组成。E、二氢尿嘧啶环：8---12核苷酸，两个二氢尿嘧啶。2、二级结构—三叶草形：176接受臂：3’端有一游离的CCA顺序，氨基酸通过共价键与A上的2’-OH或3’-OH相连；TψC臂：ψ是假尿嘧啶。该臂上有TψC的顺序。反密码子臂：在反密码子环的中间是三联的反密码子。二氢尿嘧啶臂（D臂）：环中含有二氢尿嘧啶。额外臂：变化最大的区域，可分为两类，一类仅含3-5个核苷酸，另一类含有一条较大的臂。接受臂：3’端有一游离的CCA顺序，氨基酸通过共价键与A上的177Ala的tRNA结构示意图Ala178Aspace-fillingmodelshowsthatyeasttRNAPhetertiarystructureiscompact.ThetwoviewsoftRNAarerotatedby90°.（3）三级结构：倒L型：靠氢键维持。Aspace-fillingmodelshowsth179靠氢键维持，tRNA三级结构呈L形；受体臂顶端的碱基位于“L”的一个端点，而反密码子臂的套索状结构生成了“L”的另一端点，分子中两个不同的功能基团是最大限度分离的。这个结构形式与AA-tRNA合成酶对tRNA的识别有关，满足了蛋白质合成过程中对tRNA的各种要求。tRNAL形三级结构靠氢键维持，tRNA三级结构呈L形；tRNAL形三级结构180反密码子环3`氨基酸臂反密码子环3`氨基酸臂1813、rRNAP199rRNA占RNA总量的80%以上，核糖体由大小两个亚基组成，大小亚基分别几种rRNA和数十种蛋白质组成。rRNA与几十种蛋白质组成的细胞颗粒——核糖体是细胞内合成蛋白质的工厂。核糖体上催化肽键合成的是rRNA，蛋白质只是维持rRNA的构象，起辅助作用。3、rRNAP199182—Mg2++Mg2++Urea16srRNAProtein:S1,S2,……S215srRNA23srRNAProtein:L1,L2,……L3430S50S70S核糖体和rRNA的结构和功能—Mg2++Mg2++Urea16srRNA5srRNA183rRNA的二级结构图示rRNA的二级结构图示1844、mRNAP201（1）原核生物mRNA结构特征P201原核生物的mRNA链上有多个编码区（多个基因），为多顺反子，5’和3‘端各有一段非翻译区。多顺反子：一个转录本加工而成的mRNA序列中包含多个基团。编码区：mRNA中以AUG为起点，以终止密码子为终点，编码AA的一系列密码子序列。4、mRNAP201185前导区：mRNA5’端编码区前面的非翻译序列。尾区：mRNA3’端终止密码子后非翻译序列。原核生物mRNA结构前导区：mRNA5’端编码区前面的非翻译序列。原核生物mRN186（2）真核生物mRNA结构特征P201真核生物的mRNA都是单顺反子。单顺反子：一个转录本加工而成的mRNA序列只代表一个基因。mRNA5’端都有帽子结构。绝大多数真核生物mRNA具有poly(A)尾。（2）真核生物mRNA结构特征P201187真核生物mRNA的结构模式EukaryoticmRNAismodifiedbyadditionofacaptothe5’endandpoly(A)tothe3’end真核生物mRNA的结构模式EukaryoticmRNAi188真核生物转录常从嘌呤核苷酸开始，第1个核苷酸保留5’三磷酸基团，以3’位与下一核苷酸5’位形成磷酸二酯键。转录的起始序列可表示为5’PPPAPNPNPNP…；在鸟苷酰转移酶催化下在其5’加入G，且连接形式是5’—5’三磷酸键。表示为：5’GPPPAPNPNP+PP+P。“帽子”结构真核生物转录常从嘌呤核苷酸开始，第1个核苷酸保留5’三磷酸基189帽子0：第1个甲基在末端鸟嘌呤7位上，所有真核生物均存在此结构。帽子1：第2个甲基加到次末端核苷酸上，具有两个甲基。在高等真核生物中，如果转录的第1个核苷酸是A的话，则在A的N6位上还有一个甲基。帽子2：以帽子1为底物，在第三个核苷酸再加上一个甲基。“帽子”结构的甲基化帽子0：第1个甲基在末端鸟嘌呤7位上，所有真核生物均存在此结190

帽子结构功能：a、增加mRNA稳定性，保护mRNA免遭5’外切酶的攻击。b、有助于核糖体对mRNA的识别和结合，使翻译得以正确起始。帽子结构功能：191mRNApoly(A)尾功能：A、防止mRNA降解，大大提高了mRNA在细胞质中的稳定性。B、是mRNA穿越核膜由细胞核进入细胞质的必需形式。C、与翻译有关；切除poly(A)尾会影响翻译起始。mRNApoly(A)尾功能：192第四节核酸的性质P205一、一般性质1、外观：DNA白色纤维状，RNA白色粉末；2、溶解性：极性化合物，微溶于水但不溶于乙醇、乙醚、氯仿、三氯醋酸等有机溶剂，常以乙醇进行沉淀，其钠盐易溶于水，溶解度与pH有关；3、黏度：DNA溶液的黏度极高，RNA溶液的黏度小4、颜色反应：RNA与浓HCL和苔黑酚（甲基间苯二酚）共热产生绿色，原因：D-核糖与酸作用产生糠醛，糠醛与甲基间苯二酚作用呈绿色；DNA与强酸和二苯胺一同加热呈蓝色，原因：D-2-脱氧核糖与酸作用产生ω-羟基-γ-酮戊醛，后者与二苯胺作用呈蓝色。第四节核酸的性质P205一、一般性质193二、核酸的水解：1、酸水解：磷酸酯键与糖苷键对酸的敏感程度不同。磷酸酯键比糖苷键稳定；嘌呤的糖苷键比嘧啶糖苷键更不稳定；嘌呤与脱氧核糖的糖苷键最不稳定。2、碱水解RNA的磷酸酯键易被碱水解；DNA的磷酸酯键对碱稳定。原因：a、RNA核糖上2’-OH基，在碱性条件下形成磷酸三酯，磷酸三酯极不稳定，随即水解，产生2’，3’环磷酸酯，进而分解成2’或3’核苷酸，溶液成为混合液。b、DNA核糖上无2’-OH基，不能形成磷酸三酯中间物，因此可以抵抗碱水解。二、核酸的水解：1、酸水解：194RNA链水解RNA水解后生成一个2‘,3’环式单核苷酸中间体；中间体不稳定，很快转变为2‘单核苷酸和3’单核苷酸RNA链水解RNA水解后生成一个2‘,3’环式单核苷酸中间体1953、酶水解：核糖核酸酶A、牛胰核糖核酸酶：专一性切割位点：嘧啶核苷-3‘-磷酸与其它核苷酸之间的连键。产物：3’-嘧啶核苷酸；或以3’-嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。水解机制：同碱相似。3、酶水解：核糖核酸酶196B、核糖核酸酶T1专一性切割位点：3’-鸟苷酸与其相邻的5’-核苷酸之间的连键。

产物：3’-鸟苷酸；或以3’-鸟苷酸结尾的寡核苷酸。C、核糖核酸酶T2专一性切割位点：3’-腺苷酸与其相邻的5’-核苷酸之间的连键。

产物：3’-腺苷酸结尾的寡核苷酸。B、核糖核酸酶T1197脱氧核糖核酸酶A、牛胰脱氧核糖核酸酶：切断双链或单链DNA成为5’-磷酸为末端的寡核苷酸，平均长度4个核苷酸。B、牛脾脱氧核糖核酸酶：切断双链或单链DNA成为3’-磷酸为末端的寡核苷酸，平均长度6个核苷酸。C、链球菌脱氧核糖核酸酶：产物为5’-磷酸为末端的寡核苷酸，长短不一。D、限制性内切酶：在细菌中发现这类酶，主要降解外源DNA，对自身DNA无作用。脱氧核糖核酸酶198限制性内切酶特点：切割位点往往是回文结构；具有高度专一性，识别双链特定的位点，将两条链切开成粘性、平头末端；用于染色体结构分析、基因测序的分析、基因的体外重组。限制性内切酶特点：切割位点往往是回文结构；具有高度专一性，识199最新-5第五章核酸化学-课件200三、核酸的酸碱解离性质(参见P182)1、碱基的解离嘧啶和嘌呤化合物杂环中的氮和取代基具有结合和释放质子的能力，因此是兼性离子，即是两性电解质。胞嘧啶的解离；胸腺嘧啶的解离；腺嘌呤的解离；鸟嘌呤和次黄嘌呤的解离；2、核苷的解离：糖的存在增加了酸性解离3、核苷酸的解离：磷酸基的存在，使核苷酸具有较强的酸性。三、核酸的酸碱解离性质(参见P182)1、碱基的解离201四、核酸的紫外吸收：参见P182核酸中碱基环的共轭双键对240~290nm波段紫外光有强烈吸收。最大光吸收值在260nm，是核酸定量以及定性的基础。由于蛋白质在此光区仅有弱吸收，故可以此特性来测定核酸在细胞和组织中的分布。用A260/A280的比值可以判断样品的纯度：纯DNA的A260/A280比值应为1.8,纯RNA应为2.0；摩尔吸光系数ε(P)值；ε(P)=A/CL。四、核酸的紫外吸收：参见P182202（一）变性：（P208）1、概念：许多因素可以破坏氢键，氢键破坏后的核酸的双螺旋结构变成单链的，成为“无规线团”，此作用称为核酸的变性。变性是双螺旋氢键的断裂，不涉及共价键（磷酸二酯键）断裂。（如果磷酸二酯键断裂则叫降解，此时分子量降低）2、引起变性的因素：1）温度的升高；2）碱酸度改变；3）某些变性剂：尿素、甲醛等。五、核酸的变性、复性及杂交P208（一）变性：（P208）五、核酸的变性、复性及杂交2033、变性的特点：1）结构变成无规则线团；2）260nm紫外吸光度急剧升高；粘度下降；生物活性丧失3）爆发式，变性发生在很窄的温度范围，有一个相变的过程。熔解温度（Tm值）：双螺旋失去一半时的温度。也叫熔点、解链温度。3、变性的特点：1）结构变成无规则线团；204DNA变性曲线DNA变性曲线2054、影响DNA的Tm的因素：（1）DNA均一性：均质DNA熔解过程在一个较窄的温度范围内；异质DNA熔解过程在一个较宽的温度范围内。（2）G-C含量：G-C含量越高Tm值愈高；原因：G≡CA＝T测定Tm可以推算出DNA碱基的百分组成。经验公式：XG-C=（Tm-69.3)X2.44；

4、影响DNA的Tm的因素：（1）DNA均一性：206（3）介质离子强度离子强度较低的介质中,Tm值较低,熔解温度范围较宽；离子强度较高的介质中,Tm值较高,熔解温度范围较窄。RNA的变性：螺旋区较少,变性Tm值较低；tRNA螺旋区较多,变性Tm值较高，类似于DNA。（3）介质离子强度离子强度较低的介质中,Tm值较低,熔解温207（二）复性（P209）变性后DNA两条分开的链重新特异的组合而恢复双螺旋结构和性质，这种作用称复性。复性可部分恢复理化性质，变性DNA骤然降温不能复性，据此可制备单链核酸探针。缓慢冷却复性称退火。片段越大复性越慢；浓度越大复性越快。（二）复性（P209）变性后DNA两条分开的链重新特异的组208单核苷酸ε(P)值大于单链多核苷酸；单链核苷酸ε(P)值大于双链核苷酸，因此核酸变性时,ε(P)值增高，称增色效应；核酸复性时,ε(P)值降低，称减色效应。常用核酸溶液紫外吸收值的变化作为变性或复性的指标。单核苷酸ε(P)值大于单链多核苷酸；209

双螺旋呼吸：

双链DNA配对碱基的氢键不断处于断裂和再生状态中，特别是在稳定性较低的富含A-T的区段。在微观上，常常出现瞬间的单链泡状结构，这种现象称为双螺旋的呼吸作用。一些蛋白质可识别这种结构，并在单链结构下阅读和识别DNA内部所含信息。双螺旋呼吸：210（三）杂交（P210）DNA的变性在一定条件下是可逆的，而相同来源的DNA分子容易通过这种方式进行杂交，甚至不同来源的DNA以及多核糖核苷酸与多脱氧核糖核苷酸之间也可以进行杂交。1、概念：不同来源的分子，经热变性后冷却复性，如异源间某些区域有相同的序列，则会形成杂交分子。（三）杂交（P210）DNA的变性在一定条件下是可逆的，而211核酸杂交FilterhybridizationestablisheswhetherasolutionofdenaturedDNA(orRNA)containssequencescomplementarytothestrandsimmobilizedonthefilter.核酸杂交Filterhybridizationestab212样品酶解琼脂糖电泳分离变性、转移硝酸纤维薄膜只吸收单链与放射性探针杂交十小时，洗涤烘干放射自显影，可探知或分离互