动物细胞工程课件

动物细胞工程桂林十八中：李保民动物细胞工程桂林十八中：李保民1动物细胞工程常用的技术手段：1.动物细胞培养、2.动物细胞融合、3.单克隆抗体4.胚胎移植5.动物细胞核移植、动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段：1.动物细胞培养、2一、动物细胞培养:就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。3.分散成单个细胞1.培养液的成分：

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等一、动物细胞培养:就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成33、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）（遗传物质改变）3、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮4细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快5动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰61、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是---73、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强D3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄84.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（）A.培养基成分不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-----9（二）动物细胞融合1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）（二）动物细胞融合1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活10细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇

诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。

思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？

因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞融合技术应用于哪些方面？主要是制备单克隆抗体。细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇

诱导11（二）动物细胞融合1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（二）动物细胞融合1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞12主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）13(三）单克隆抗体1.其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？3.如何得到抗体？提问？(三）单克隆抗体1.其由何种细胞产生？提问？14(三）单克隆抗体抗体1。抗原动物体内刺激效应B抗原动物体内刺激效应B抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一效应B细胞不能增值产生大量抗体2。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏(三）单克隆抗体抗体1。抗原动物体内刺激效应15(三）单克隆抗体设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖-化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞(三）单克隆抗体设计方案：-化学性质单一、特异性强的抗体。杂16？

？诱导其融合的方法有哪些？抗原效应B细胞(三）单克隆抗体2.制备过程：？？诱导其融合的方法有哪些？17BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？特定的选择培养基筛选出杂种细胞BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液18（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?（小鼠骨髓瘤19（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细203.单克隆抗体的应用：①在基础理论研究中具有重要意义②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。③生物导弹：单抗上连接抗癌药物(三）单克隆抗体3.单克隆抗体的应用：①在基础理论研究中具有重要意义21小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个221、新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是A.PCR技术——扩增蛋白质B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒D.花粉离体培养——培育单倍体植物2、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是培养保留接触抵制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞克隆培养法培养过程上多数细胞的基因型会发生改变二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的恶性细胞系的细胞可进行付代培养BDD检测、巩固1、新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器23动物细胞工程课件24动物细胞工程桂林十八中：李保民动物细胞工程桂林十八中：李保民25动物细胞工程常用的技术手段：1.动物细胞培养、2.动物细胞融合、3.单克隆抗体4.胚胎移植5.动物细胞核移植、动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段：1.动物细胞培养、26一、动物细胞培养:就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。3.分散成单个细胞1.培养液的成分：

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等一、动物细胞培养:就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成273、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）（遗传物质改变）3、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮28细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快29动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰301、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是---313、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强D3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄324.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（）A.培养基成分不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-----33（二）动物细胞融合1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）（二）动物细胞融合1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活34细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇

诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。

思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？

因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞融合技术应用于哪些方面？主要是制备单克隆抗体。细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇

诱导35（二）动物细胞融合1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（二）动物细胞融合1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞36主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）37(三）单克隆抗体1.其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？3.如何得到抗体？提问？(三）单克隆抗体1.其由何种细胞产生？提问？38(三）单克隆抗体抗体1。抗原动物体内刺激效应B抗原动物体内刺激效应B抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一效应B细胞不能增值产生大量抗体2。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏(三）单克隆抗体抗体1。抗原动物体内刺激效应39(三）单克隆抗体设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖-化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞(三）单克隆抗体设计方案：-化学性质单一、特异性强的抗体。杂40？

？诱导其融合的方法有哪些？抗原效应B细胞(三）单克隆抗体2.制备过程：？？诱导其融合的方法有哪些？41BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？特定的选择培养基筛选出杂种细胞BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液42（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于