高三一轮复习生物：动物细胞融合与单克隆抗体课件

动物细胞融合与单克隆抗体(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图想一想：能否利用类似植物体细胞杂交的方法，将两种动物体细胞融合并培养成杂种动物个体呢？有梦想，才会有创造！阅读教材52页，思考以下问题：什么是动物细胞融合？其原理是什么？什么是杂交细胞？诱导动物细胞融合的方法有哪些？说出诱导动物细胞融合的过程。动物细胞融合完成的标志是什么？动物细胞融合和受精作用的区别有哪些？动物细胞融合的意义是什么？动物细胞融合概念动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的两个或多个细胞具有原来遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。2.原理

细胞膜具有一定的流动性3.诱导方法物理法：化学法：生物法：灭活的病毒（特有的方法）离心、电激、振动聚乙二醇(PEG)病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜连接细胞膜被病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞保留融合活性灭活丧失感染能力诱导细胞融合的培养基中存在哪些类型的细胞？A细胞、B细胞、AA细胞、AB细胞、BB细胞。AB杂交细胞的遗传物质有什么特点？含有两种生物的遗传物质。融合完成的标志？来自不同细胞的两个或多个细胞核融合成一个细胞核。能否将杂交细胞培育成一个个体？A细胞B细胞4.过程动物细胞融合和受精作用的区别有哪些？(1)受精作用是在同种生物之间进行的，精子与卵细胞的融合不需要任何诱导剂就能形成受精卵，受精卵内具备同种生物的两个亲本的遗传物质。(2)动物细胞融合是在不同物种间进行的细胞融合，由于物种间存在生殖隔离，所以在自然条件下不能融合成杂交细胞，必须有诱导剂作用才能融合。形成的杂交细胞具备两个亲本细胞的遗传物质，从而体现两个亲本的遗传特性。5.动物细胞融合技术的意义和应用突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能最主要用途：制造单克隆抗体动物细胞融合与植物体细胞杂交的对比比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性细胞融合方法用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散后，诱导细胞融合诱导手段离心、电激、振动、聚乙二醇等诱导与植物体细胞杂交相比，还可用灭活的病毒诱导结果形成杂种植株形成杂种细胞，以生产细胞产品用途克服远缘杂交不亲和的障碍，扩展杂交亲本范围，培育新品种制备单克隆抗体、病毒疫苗、干扰素等意义突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能融合动物细胞的筛选方式利用抗药性筛选系统：利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞。亲本A：对氨苄青霉素敏感，对卡那霉素不敏感。亲本B：对卡那霉素敏感，对氨苄青霉素不敏感。杂种细胞：可以在两种抗生素培养基上生长营养互补筛选系统：细胞在缺乏一种或几种营养成分时不能生长繁殖，即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营养互补作用原理，可以筛选杂种细胞。亲本A：色氨酸缺陷型亲本B：苏氨酸缺陷型杂种细胞：可以在不含色氨酸和苏氨酸的培养基上培养，亲本细胞均会死亡温度敏感突变型杂种细胞的筛选：一般的培养细胞能在32℃到40℃的范围内生长。但温度敏感突变型的细胞能在高温或低温下生长，由此筛选杂种细胞。亲本A：具有卡那霉素抗性，但只能在37℃左右生长。亲本B：高温敏感突变型，但不能抗卡那霉素。杂种细胞：能在高温和卡那霉素培养基上生长。

免疫器官免疫细胞吞噬细胞等淋巴细胞T淋巴细胞B淋巴细胞免疫活性物质：抗体、淋巴因子、溶菌酶等（免疫细胞生成、成熟或集中分布的场所）免疫系统骨髓、胸腺、脾脏、扁桃体、淋巴结温故···能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白体液免疫抗原吞噬细胞T细胞B细胞记忆B细胞效应B细胞（浆细胞）分泌抗体抗原-抗体反应形成沉淀或细胞集团（吞噬、处理）淋巴因子吞噬细胞吞噬和消化二次免疫抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低、特异性差抗原决定簇一种抗原决定簇只能激活一种B淋巴细胞，产生一种抗体。

单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体。小资料对B细胞进行细胞培养可行吗？什么细胞是可以无限增殖的？

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可以多达百万种以上，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，称为单克隆细胞。B细胞在体外存活5—7天后死亡。一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体

骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验阅读教材53—54页，思考以下问题：如何得到B淋巴细胞？如何诱导细胞融合？细胞两两融合后有哪些类型？单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？如何大规模生产单克隆抗体？1.如何得到B淋巴细胞？多次注射特定的抗原蛋白脾脏中获取2.如何诱导细胞融合？聚乙二醇、灭活病毒等3.诱导细胞融合后，可能存在哪些类型的细胞？瘤细胞、B细胞、瘤细胞-瘤细胞、B细胞-B细胞、瘤细胞-B细胞抗原注射后时间抗体浓度第一次注射第二次注射4.单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？第一次：选择性培养基——只有杂交瘤细胞才能存活。第二次：选能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞。5.如何大规模生产单克隆抗体？体外培养，从培养液中提取；小鼠腹腔内培养，从腹水中提取。克隆化培养和抗体检测单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。多孔阳性检测：将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续有限稀释，一般需进行3-4次，直至每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

你学会了吗？单克隆抗体的应用1.诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速2.治疗疾病和运载药物主要用于癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。疗效高、毒副作用小HAT培养基筛选原理单克隆抗体技术中人工诱导小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后，细胞将以多种形式出现，如脾细胞-瘤细胞、脾细胞-脾细胞、瘤细胞-瘤细胞、细胞多聚体、未融合的脾细胞和瘤细胞等，其中只有脾细胞-瘤细胞的融合体是有用的。正常的脾细胞在培养基中存活仅5-7天，无需特别筛选，细胞多聚体也容易死去，关键问题是要去除未融合的瘤细胞。

选择培养基具有3种关键成分：次黄嘌呤（hypoxanthine）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（thymidine），故名HAT培养基。

DNA在细胞内具有起始合成途径（denovopathway）和中间合成途径（salvagepa-thway）。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞