尿膀胱肿瘤抗原在膀胱癌诊断中的临床价值及相关性分析

尿膀胱肿瘤抗原在膀胱癌诊断中的临床价值及相关性分析薛玉泉;王振龙;张亚平;种铁【摘要】目的分析尿膀胱肿瘤抗原(BTA)在膀胱癌筛查中的临床应用价值及影响因素.方法回顾性分析76例膀胱癌和42例泌尿系统良性疾病患者的临床资料，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测尿液BTA浓度和尿脱落细胞阳性表达情况.采用受试者工作特征曲线(ROC)确定截断点、灵敏度、特异度和曲线下面积(AUC),采用秩和检验比较BTA和尿脱落细胞学检查的AUC差异;相关性分析采用Spearman相关分析结果BTA检测的最佳截断点为91.74ng/ml,且AUC明显大于尿脱落细胞学检查(P<0.01).膀胱癌患者尿液中BTA含量明显高于良性疾病组患者(P<0.01).BTA检测的灵敏度为89.47%(68/76),明显高于尿脱落细胞学检查的38.16%(P<0.01).BTA阳性检测结果与血尿浓度、TNM分期、WHO病理组织学分级呈正相关(P<0.05),尿脱落细胞学检查结果仅与膀胱癌患者TNM分期呈正相关(P<0.05).结论尿BTA检查灵敏度和特异度较高，可用于膀胱癌早期无创性筛查.【期刊名称】《癌症进展》【年(卷)，期】2019(017)001【总页数】4页(P45-48)【关键词】膀胱癌;膀胱肿瘤抗原;尿脱落细胞学检查;血尿【作者】薛玉泉;王振龙涨亚平;种铁【作者单位】西安交通大学第二附属医院泌尿外科,西安710000;西安交通大学第二附属医院泌尿外科,西安710000;西安交通大学第二附属医院泌尿外科,西安710000;西安交通大学第二附属医院泌尿外科,西安710000【正文语种】中文【中图分类】R737.14膀胱癌是泌尿系统发病率和病死率最高的恶性肿瘤，男性发病率高于女性，尿路上皮非肌层浸润性膀胱癌是最常见的病理组织学类型［1］。受环境因素和遗传因素的影响，膀胱癌的发病率逐年上升。与大多数恶性肿瘤相同，膀胱癌的病变过程复杂多变，发病初期缺乏典型的临床表现，一过性或镜下血尿是目前膀胱癌患者发病早期最常见的症状，但往往易被患者忽视［2］。此外，膀胱癌是一种转移率和复发率均较高的恶性肿瘤［3］，手术切除后仍需密切监测患者的病情进展，因此，准确诊断膀胱癌对术前筛查和术后监测十分重要。目前，临床常用的膀胱癌诊断方法包括影像学检查、膀胱镜检查和尿脱落细胞学检查等，但诊断效果并不理想［4］。由于腔内特殊的生长环境，膀胱癌细胞分泌的特异性肿瘤抗原或蛋白可进入尿液，膀胱肿瘤抗原(bladdertumorantigen，BTA)对进入尿液的抗原或蛋白进行检测，可用于临床膀胱癌的诊断，但有研究显示，BTA假阳性率较高［5］。本研究分析BTA在膀胱癌筛查中的临床应用价值及影响因素，现报道如下。1资料与方法一般资料回顾性分析2015年11月至2017年10月期西安交通大学第二附属医院收治的膀胱癌患者的临床资料。纳入标准：①所有患者经膀胱镜活检或手术病理学检查，确诊为膀胱癌；②所有患者病理结果均由2名以上病理科主治医师双盲阅片确诊；③临床资料完整。排除标准：①接受除膀胱癌手术外其他手术或放化疗的患者；②合并有其他部位恶性肿瘤的患者。依据纳入和排除标准，共纳入76例膀胱癌患者，作为膀胱癌组，其中男57例，女19例；年龄23-78岁，平均年龄(58.49±8.73)岁；初发59例，复发17例；血尿浓度＜50/hp共28例，〉50/hp共48例；TNM分期依据美国癌症联合委员会(AmericanJointCommitteeonCancer,AJCC)标准：I期31例，H期28例，山~3期17例；病理组织学分级依据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)标准：低级别42例，高级别34例。回顾性分析同期本院收治的泌尿系统良性疾病患者的临床资料。纳入标准：①伴有不同程度的血尿、尿频、尿急和尿痛等与膀胱癌相似的临床症状；②临床资料完整。排除标准：①经病理证实非膀胱肿瘤；②肾结石、肾功能下降等疾病的患者。共纳入42例泌尿系统良性疾病患者，作为良性疾病组，其中男31例，女11例；年龄18-81岁，平均年龄(57.17±10.04)岁；泌尿系统炎症19例，膀胱结石7例，前列腺肥大10例，腺性膀胱炎2例，不明原因血尿4例。1.2主要仪器与试剂仪器：3K15低温高速离心机购自德国SIGMA公司，BX43荧光显微镜购自日本奥林巴斯公司，电子分析天平购自上海玉研科学仪器有限公司，恒温水浴摇床购自北京六一仪器厂，ZW-A微量振荡器购自上海将来实验设备有限公司，HWA-50D恒温水浴锅购自韩国Autonics公司，BIO-RAD680型全自动酶标仪购自美国伯乐公司，IB-02G-2C电热恒温培养箱购自韩国杰奥特公司。试剂：人BTA检测试剂盒购自北京普恩光德生物科技公司，酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)试剂盒购自上海莼试生物技术有限公司。1.3尿脱落细胞学检查膀胱镜检前采集所有患者40~50ml中段尿液样本，离心半径为8cm,2115r/min离心5min，弃上清液，向尿液沉淀物中加入甲醇与冰醋酸(3:1)固定液，反复吹打混匀。取200pl混合液滴于载玻片上，干燥，置于吖啶橙溶液中浸泡3-5min。采用10ml磷酸盐缓冲液(phosphatebuffersolution,PBS)反复冲洗，置于CaCl2溶液中浸泡3-5min,盖上盖玻片后，置于荧光显微镜下观察。每份尿液样本至少涂2张病理片，并于载玻片一端注明编号。由2名以上病理科主治医师分别对结果进行判定，结果判定分为阴性、阳性和可疑。本研究中可疑结果按阳性结果处理，有一份结果判定为阳性，即按阳性结果处理。1.4BTA检测取10ml中段尿液样本，离心半径为8cm,2115r/min离心5min，取上清液，-20°C保存备用。按照试剂盒说明书，采用ELISA法检测尿液中BTA含量。1.5统计学方法采用SPSS19.0软件对数据进行-统计分析。正态分布计量资料以均数士标准差(士s)表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率(%)表示，组间比较采用x2检验；采用受试者工作特征(receiveroperatingcharacteristic,ROC)曲线确定最佳截断点、灵敏度、特异度和曲线下面积(areaunderthecurve,AUC),BTA和尿脱落细胞学检查的AUC差异比较采用秩和检验；相关性分析采用Spearman相关分析。以Pv0.05表示差异有统计学意义。2结果BTA检测与尿脱落细胞学检查结果比较结果显示，BTA检测的AUC为0.891(0.748~0.935)，明显大于尿脱落细胞学检查的0.657(0.525~0.768)，差异有统计学意义(Z=3.881,Pv0.01)。BTA检测的约登指数为0.797，诊断的最佳截断点为91.74ng/ml。选择ROC曲线获得的检测阈值，比较两组患者阳性检测结果：膀胱癌组患者BTA浓度＞91.74ng/m(l阳性)的比例和尿脱落细胞学检查阳性率，明显高于良性疾病组患者，差异均有统计学意义(Pv0.01)。(图1、表1)图1BTA和尿脱落细胞学检查的ROC曲线BTA检测和尿脱落细胞学检查在膀胱癌中的诊断价值BTA检测膀胱癌的灵敏度为89.47%(68/76)，明显高于尿脱落细胞学检查的38.16%(29/76)，差异有统计学意义(x2=43.335,P=0.000)；BTA检测膀胱癌的特异度为85.71%(36/42)，低于尿脱落细胞学检查的特异度95.24%(40/42)，但差异无统计学意义(x2=1.243,P=0.265)。(表2)表1两组患者BTA浓度和尿脱落细胞学检查结果的比较［n(%)］指标BTA浓度(ng/ml)>91.74<91.74尿脱落细胞学检查阳性阴性膀胱癌组(n=76)68(89.47)8(10.53)29(38.16)47(61.84)良性疾病组(n=42)6(14.29)36(85.71)2(4.76)40(95.24)x2值65.39715.576P值0.0000.000表2BTA和尿脱落细胞学检查与病理诊断结果对照诊断方法BTA检测阳性阴性尿脱落细胞学检查阳性阴性合计病理诊断结果膀胱癌688294776非膀胱癌63624042合计74443187118BTA和尿脱落细胞学检查诊断阳性与膀胱癌患者临床特征的关系不同血尿浓度、TNM分期、WHO组织学分级的膀胱癌患者BTA检测阳性率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；不同年龄和发病情况的膀胱癌患者BTA检测阳性率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。不同TNM分期的膀胱癌患者尿脱落细胞学检查阳性率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；不同年龄、发病情况、血尿浓度和WHO组织学分级的膀胱癌患者尿脱落细胞学检查阳性率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。(表3)表3BTA阳性检测结果和尿脱落细胞学阳性检查结果与膀胱癌患者临床特征的关系(n=76)临床特征年龄(岁)<50>50发病初发复发血尿浓度(/hp)<50>50TNM分期inm-N组织学分级低级别高级别例数3145591728483128174234BTA检测阳性［n(%)］27(87.10)41(91.11)53(89.83)15(88.24)21(75.00)47(97.92)23(74.19)28(100)17(100)34(80.95)34(100)P值0.8570.7950.0060.0010.021尿脱落细胞学检查阳性［n(%)］11(35.48)18(40.00)23(38.98)6(35.29)8(28.57)21(43.75)3(9.68)14(50.00)12(70.59)12(28.57)17(50.00)P值0.6900.7830.1890.0000.0562.4膀胱癌患者的临床特征与BTA和尿脱落细胞学检查结果的相关性分析Spearman相关分析结果显示，膀胱癌患者的血尿浓度、TNM分期和WHO组织学分级，与BTA检测阳性呈正相关(P<0.05);TNM分期与尿脱落细胞学检查阳性呈明显正相关(P<0.01)。(表4)表4膀胱癌患者的临床特征与BTA检测结果和尿脱落细胞学检查结果的相关性分析临床特征年龄发病血尿浓度TNM分期WHO组织学分级BTA阳性r值0.2110.2820.6350.3760.295P值0.1590.0530.0000.0340.047尿脱落细胞学检查r值0.1960.2410.2780.6640.260P值0.2030.1170.0510.0000.0843讨论膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，近些年，虽然取得了一定的临床疗效，但由于膀胱癌高复发率、高转移率和预后差等特点，其病死率一直居高不下［6］。特别是近十年，中国环境恶化日益严重，人口老龄化进程加快，膀胱癌的发病率逐渐上升，严重威胁老年男性患者的生命健康，且早期膀胱癌的临床表现不典型，患者多因出现间歇性血尿而就诊［7］。目前，腹部膀胱彩超、静脉尿路造影、尿脱落细胞学检查和膀胱镜检查等是膀胱癌诊断的主要方法，但这些诊断方法均存在一定的弊端［9］，经腹部膀胱彩超虽然简便易行、灵敏度高，但不适用于早期膀胱癌或微小病灶的诊断［10］；静脉尿路造影使用并不普遍，主要与造影剂易引起不良反应有关［11］；尿脱落细胞学检查灵敏度较低［12］;膀胱镜检查和病理活检虽是膀胱癌诊断的〃金标准”，但属于有创操作，可能导致二次感染，耐受性较差［13］。因此，膀胱癌分子生物学诊断技术逐渐受到关注。膀胱肿瘤相关抗原是由膀胱肿瘤细胞分泌的人补体因子H相关蛋白，可与基底膜表面相关受体结合，释放蛋白水解酶水解基底膜，从而使基底膜水解碎片成分释放至膀胱尿液中形成高分子复合物，直接参与肿瘤细胞的发生、发展、侵袭和转移过程，可作为膀胱癌早期发生和复发的特异性诊断标志物之一［14-15］。本研究通过ELISA试剂盒检测膀胱癌患者尿液中的BTA含量，ROC曲线分析显示，BTA检测的最佳截断点为91.74ng/ml，且AUC明显大于尿脱落细胞学检查，表明BTA检查是灵敏度和特异度均较高的膀胱癌筛查手段。此外，膀胱癌组患者BTA291.74ng/ml（阳性）的比例明显高于良性疾病组患者，表明BTA可作为膀胱癌的特异性诊断标志物，可将BTA检查作为膀胱癌筛查的主要手段，但缺乏可靠的理论证据支持。本研究进一步探讨了膀胱癌患者不同临床特征对尿日丁入水平的影响，结果显示，膀胱癌患者尿BTA检测阳性与患者血尿浓度、TNM分期和WHO组织学分级密切相关，表明恶性程度较高的浸润性膀胱癌BTA水平也相对升高，尿BTA水平在一定程度上反映了膀胱癌的进展。初发与复发性膀胱癌患者BTA检测的阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05），这可能与复发性膀胱癌患者仍然可以产生BTA相关蛋白有关。虽然BTA检测的灵敏度和准确度较高，但本研究结果发现，血尿浓度与膀胱癌患者BTA检测阳性有关。很多泌尿系统良性疾病患者也可能会发生血尿或尿路移行上皮细胞破坏而致基底膜破坏，从而导致BTA假阳性；因此，BTA检测仍不能完全取代膀胱镜检或病理组织活检单独作为膀胱癌筛查或随访技术，需考虑患者血尿浓度，并与其他疾病进行鉴别，建议联合其他诊断手段进行膀胱癌筛查。综上所述，尿BTA检查简单快速，灵敏度和特异度较高，可用于膀胱癌早期筛查和术后监测的无创性筛查，且可初步评估患者的疾病进展程度；但BTA检测易受血尿浓度的影响，建议联合其他诊断手段以提高膀胱癌筛查的准确度。参考文献【相关文献】SiegelR,MaJ,Zou乙etal.Cancerstatistics,2014[J].CACancerJClin,2014,64(10):9-29.ChangTC,MarcqG,KissB,etal.Image-guidedtransurethralresectionofbladdertumors-currentpracticeandfutureoutlooks[J].BladderCancer,2017,3(3):149-159.ParkJC,CitrinDE,AgarwalPK,etal.Multimodalmanagementofmuscleinvasivebladdercancer[J].CurrProblCancer,2014,38(3):80-108.D’CostaJJ,GoldsmithJC,WilsonJS,etal.Asystematicreviewofthediagnosticandprognosticvalueofurinaryproteinbiomarkersinurothelialbladdercancer[J].BladderCancer,2016,2(3):301-317.SmolenskyD,RathoreK,CekanovaM.Moleculartargetsinurothelialcancer:detection,treatment,andanimalmodelsofbladdercancer[J].DrugDesDevelTher,2016,10:3305-3322.韩苏军，张思维,陈万青，等.中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析[J].癌症进展,2013,11(1):89-95.郭毓鹏，关红军，董晶，等.尿膀胱癌抗原检测诊断膀胱癌的Meta分析[J].临床泌尿外科杂志,2015,30(5):420-424.YeF,WangL,Castillo-MartinM,etal.Biomarkersforbladdercancermanagement:presentandfuture[J].AmJClinExpUrol,2014,2(1):1-14.GoodisonS,RosserCJ,UrquidiV.Bladdercancerdetection